陳迪勇，宋光林，李榮華，李占彬

(貴州省分析測(cè)試研究院，貴州　貴陽　550002)

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內(nèi)標(biāo)
—標(biāo)準(zhǔn)曲線氣相色譜法測(cè)定血液中的乙醇含量*

陳迪勇，宋光林，李榮華，李占彬▲

(貴州省分析測(cè)試研究院，貴州貴陽550002)

摘要：目的：建立內(nèi)標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定血液中的乙醇含量的氣相色譜方法，并與SF/Z JD0107001-2010進(jìn)行比較。 方法：用移液管量取0.20 mL血樣及1.00 mL 40.0 μg / mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液加入2.0 mL塑料離心管中，混合均勻，離心后將清液通過0.45 μm的無機(jī)濾膜過濾后裝入2.0 mL進(jìn)樣瓶中密封，應(yīng)用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，采用ZB-624柱分離樣品中的乙醇和叔丁醇，然后采用內(nèi)標(biāo)—曲線法定量分析血液中的乙醇含量。結(jié)果：內(nèi)標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量分析血液中的乙醇含量，乙醇的加標(biāo)回收率在97.6 %～101.0 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.0 %，且重現(xiàn)性好。結(jié)論：該法分析血液中的乙醇含量能滿足檢測(cè)工作要求，相較頂空進(jìn)樣—?dú)庀嗌V法更簡(jiǎn)單，難度也更小。

關(guān)鍵詞：內(nèi)標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)曲線法；氣相色譜法；血液；乙醇

根據(jù)近年世界衛(wèi)生組織交通事故調(diào)查顯示，道路交通事故中大約有50 %～60 %與酒后駕車有關(guān)，酒后駕車造成了重大的人員傷亡和財(cái)產(chǎn)損失。

隨著國(guó)家對(duì)酒駕打擊力度的加大，酒駕的司法鑒定工作越來越重要。怎樣能夠更簡(jiǎn)單，快捷，準(zhǔn)確的測(cè)定血液中乙醇含量是司法鑒定工作者們所面臨的問題。本試驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)-標(biāo)準(zhǔn)曲線氣相色譜法，通過對(duì)待檢血樣的檢測(cè)和色譜條件的摸索，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)方法的改進(jìn)[1，2]。

1試驗(yàn)部分

1.1儀器和試劑

氣相色譜儀：Agilent 7890A氣相色譜儀及工作站，F(xiàn)ID檢測(cè)器；

叔丁醇：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；

無水乙醇：色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2色譜條件

色譜柱為phenomenex的ZB-624毛細(xì)柱(60 m×0.25 mm×1.40 μm) 。柱溫50 ℃保持10 min，以10 ℃/min的升溫速率升至200 ℃，共25 min；汽化室溫度200 ℃，檢測(cè)器溫度250 ℃；載氣(氮?dú)?流速：1.2 mL/min；進(jìn)樣方式：自動(dòng)進(jìn)樣器，分流比5∶1 (可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整分流比以改變檢出限)，進(jìn)樣量1μL 。

1.3試驗(yàn)步驟

1.3.1樣品制備

用移液管量取0.20 mL血樣及1.00 mL40.0 g/mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液加入2.0 mL塑料離心管中，混合均勻，離心后將清液通過0.45 μm的無機(jī)濾膜過濾后裝入2.0 mL進(jìn)樣瓶中密封。用同樣方法制備平行樣，供上機(jī)測(cè)試。

1.3.2乙醇含量的測(cè)定

按1.3.1步驟制備樣品，按1.2條件測(cè)定樣品中乙醇的含量。

1.3.3試驗(yàn)方法可行性[3]

用移液管量取0.20 mL 0.20 mg/mL的乙醇水溶液及1.00 mL 40.0 g/mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液加入2.0 mL塑料離心管中，混合均勻，離心后將清液通過0.45 μm的無機(jī)濾膜過濾后裝入2.0 mL進(jìn)樣瓶中密封，上機(jī)測(cè)試，其對(duì)比色譜圖見圖1。從圖1可知，乙醇、叔丁醇的出峰時(shí)間分別為7.673、10.377，試驗(yàn)條件能達(dá)到分離效果，試驗(yàn)方法可行。

1.3.4方法的重現(xiàn)性

在1.2的色譜條件下，對(duì)1.3.3制備的樣品做

圖1　乙醇、叔丁醇的對(duì)比色譜圖

重現(xiàn)性試驗(yàn)，其乙醇的氣相色譜保留時(shí)間(t1=7.669 min、t2=7.664 min、t3=7.676 min)的相對(duì)偏差為0.078，叔丁醇的氣相色譜保留時(shí)間(t1=10.372 min、t2=10.372 min、t3=10.386 min)的相對(duì)偏差為0.078，此方法的重現(xiàn)性較好，見圖2。

圖2　血液中的乙醇重現(xiàn)性對(duì)比色譜圖

1.3.5計(jì)算方法的確定[3]

(a)內(nèi)標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

將配制好的乙醇對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣，以乙醇和叔丁醇的峰面積比為縱坐標(biāo)，乙醇對(duì)照品工作溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖3。

表1　乙醇對(duì)照品溶液濃度與峰面積比對(duì)照表

圖3　血液中乙醇濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

(b)樣品中乙醇含量的計(jì)算

將1.3.1中制備的血樣在1.2的色譜條件下上機(jī)測(cè)試，測(cè)試結(jié)果按圖3中的工作曲線方程計(jì)算樣品中的乙醇濃度。

(c)平行試驗(yàn)

按以上步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)，結(jié)果見圖4。

圖4　平行試驗(yàn)對(duì)照?qǐng)D

按圖3中的工作曲線方程計(jì)算樣品中的乙醇濃度，結(jié)果見表2。

表2　平行試驗(yàn)結(jié)果

按下式計(jì)算相對(duì)相差：

式中：

C1、C2為樣品平行定量測(cè)定的結(jié)果；

C為樣品平行定量測(cè)定結(jié)果的平均值(C1+C2)/2。

由上式計(jì)算得到血樣2的相對(duì)相差為1.21 %，符合標(biāo)準(zhǔn)中沒有凝血塊的樣相對(duì)相差不超過5 %的要求。

1.3.6回收率試驗(yàn)

分別向血樣2中加入一定量的10.0 mg/mL乙醇的水溶液，混合均勻后按1.3.1的方法制備血樣，在1.2的色譜條件下上機(jī)測(cè)試，按圖3中的工作曲線方程計(jì)算樣品中的乙醇濃度，然后計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果見表3。

表3　回收率試驗(yàn)結(jié)果

2討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用內(nèi)標(biāo)—標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定血液中的乙醇含量，乙醇的加標(biāo)回收率在97.6 %～101.0 %，平均回收率在99.0 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.80 %。本方法采用樣品直接加內(nèi)標(biāo)物進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定方法簡(jiǎn)便，快捷，不受樣品中乙醇濃度的影響，且能避免系統(tǒng)誤差引起的干擾，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，方法重現(xiàn)性好，該法分析血樣中的乙醇含量能滿足司法檢測(cè)工作要求。

參考文獻(xiàn)【REFERENCES】

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ZHOUHF，HU，WANGF，TENJ.Rapiddeterminationofethanolinwholebloodbycapillarycolumngaschromatography[D].ShanghaiInstituteofmetallurgy，ChineseAcademyofSciences，MaterialphysicsandChemistry(Professional)DoctoralDissertation2000.

[2]李周儒，于常州，蔡紅星.頂空氣相色譜法測(cè)定血液中乙醇含量的探索[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，28(11)：710-712.

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Judicialauthenticationadministration.DeterminationofethanolinbloodbyHeadspaceGasChromatography：SF/ZJD0107001-2010[S].Instituteofforensicscienceandtechnology，2010.

Internal standard-standard curve of gaschromatographic method for the determination of blood alcohol content

CHEN Diyong，SONG Guanglin，LI Ronghua，LI Zhanbin

(Guizhouacademyoftestingandanalysis，Guiyang550002，China)

Abstract：The objective is to establish the internal standard quantitative method and standard curve for determination of alcohol content in blood by gas chromatography method，and compared with SF/Z JD0107001-2010.We use pipe to measure with 2.0 mL plastic centrifuge tube，0.20 mL blood and 1.00 mL 40.0 g/mL TERT butanol internal standard working solution mixed.The supernatant after centrifugation by inorganic membrane filtration 0.45 μm is taken into 2.0 mL sample bottle seal，the application of automatic sample，ZB-624 column separation ethanol and TERT butyl alcohol in the sample.And then the internal standard curve method is used for the quantitative analysis of alcohol content in blood.Results show that by the internal standard quantitative method and standard curve analysis of alcohol content in blood，after the recovery of ethanol at the rate of 97.6 % ～ 101 %，the relative standard deviation is less than 2 %，and has good repeatability. Conclusion：Determination of ethanol content in the blood of the method can meet the detection requirement，by headspace gas chromatography method is more simple with less difficulty.

Keywords：internal standard curve；gas chromatography；blood；alcohol

通訊作者：李占彬(1981-)，男，助理研究員。研究方向：化學(xué)分析。

作者簡(jiǎn)介：陳迪勇(1976-)，男，助理工程師 學(xué)士，就職于貴州省分析測(cè)試研究院，從事環(huán)境及職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)工作。

基金項(xiàng)目：國(guó)家國(guó)際科技合作專項(xiàng)資助(項(xiàng)目編號(hào)是2011DFB41640)。

收稿日期：2015-06-17；修回日期：2015-10-08

中圖分類號(hào)：DF 795.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1003-6563(2016)01-0081-04