李美珍，上官可可，楊金榮，房志仲

（1.天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院藥劑科，天津300211；2.天津醫(yī)科大學藥學院藥劑學教研室，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津300070）

論著

復方呋塞米螺內(nèi)酯膠囊的處方篩選

李美珍1，上官可可1，楊金榮2，房志仲2

（1.天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院藥劑科，天津300211；2.天津醫(yī)科大學藥學院藥劑學教研室，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津300070）

目的：利用均勻設計法及相關分析優(yōu)選復方呋塞米螺內(nèi)酯膠囊處方。方法：以不同處方配比的崩解劑、粘合劑、填充劑、潤滑劑為載藥輔料，以崩解時限、裝量差異、體外溶出度等作為考察指標，采用均勻設計法及相關分析篩選最優(yōu)處方。測定自制與市售制劑在不同溶出介質(zhì)中的體外溶出度，并計算f2因子進行比較。結(jié)果：確定最佳處方中輔料的種類及其用量，羧甲基淀粉鈉（CMS-Na）為崩解劑，水為粘合劑，微晶纖維素(MCC)、乳糖為填充劑，硬脂酸鎂、滑石粉為潤滑劑。自制與市售制劑在不同溶出介質(zhì)中溶出度行為并無顯著差異（50≤f2≤100）。結(jié)論：該試驗篩選出的優(yōu)化復方制備處方和工藝條件，所得顆粒均勻、硬度適宜，制得膠囊外觀整潔、崩解迅速。

復方膠囊；呋塞米；螺內(nèi)酯；處方篩選；f2因子

呋塞米為強效利尿劑，臨床上主要用于治療心臟性水腫、腎性水腫、肝硬化腹水等[1]，長期或大劑量應用，可引起低鉀血癥、低鈉血癥和代謝性酸中毒，嚴重時因血容量降低，導致休克甚至死亡[2]。螺內(nèi)酯為人工合成的類固醇類藥物，單獨應用效力較弱，與呋塞米等合用，方可取得顯著利尿作用，并可抵消相互引起的低鉀血癥[3-5]。有研究顯示呋塞米螺內(nèi)酯聯(lián)用可安全有效的治療輕中度原發(fā)性高血壓，有良好的耐受性，并且副作用小，不引起血糖、血脂代謝和血清中鉀、尿酸濃度的變化[6]。國外已有呋塞米螺內(nèi)酯復方制劑上市，兩種藥物的聯(lián)合應用可減少單獨使用所引起的不良反應，增強利尿作用，改善患者的順應性。但國內(nèi)目前并無相關藥物制劑報道。本研究將呋塞米與螺內(nèi)酯組成復方制劑，進行處方篩選，并與上市制劑進行體外溶出度比較，為國內(nèi)仿制制劑研究提供思路。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 高效液相色譜儀（美國Spectraphysics、Spectra Focus紫外檢測器、輸液泵SP8810、Anstar色譜工作站）；ZDY-Ⅱ-1 IKVA高精密度單相交流穩(wěn)壓電源（國營啟東電訊廠）；ALC-210.4電子分析天平（ACCULAB Sartorius group，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；ZB-1B型智能崩解儀（天津大學精密儀器廠）；智能藥物溶出儀ZCR-8A（天津市鑫洲科技有限公司）；烘箱（天津市中環(huán)實驗電爐有限公司），0號膠囊板。

1.1.2 試劑 呋塞米原料藥（東北制藥廠，批號090312），螺內(nèi)酯原料藥（天津天天藥業(yè)，批號090829），對照（市售）制劑Lasilactone Capsules（Sanofiaxentis，127386A），羧甲基淀粉鈉（湖州展望化學藥業(yè)有限公司，20101014），微晶纖維素-102（山東聊城阿華制藥有限公司，20100602），乳糖（上海華茂藥業(yè)有限公司，100609），硬脂酸鎂（湖州展望化學藥業(yè)有限公司，20101101），滑石粉（山東聊城阿華制藥有限公司，091280），聚維酮（山東聊城阿華制藥有限公司，100245），0號膠囊殼（蘇州膠囊有限公司，28095），其它試劑均為市售分析純，重蒸水（自制）。

1.2 實驗方法

1.2.1 膠囊的制備 稱取處方量的CMS-Na作為崩解劑，MCC、乳糖作為填充劑，與呋塞米、螺內(nèi)酯原料藥用等量遞加法將其混合均勻，緩慢將黏合劑加入到混合物中制軟材，用24目篩制粒，40℃烘干后過24目篩整粒。加入滑石粉、硬脂酸鎂作為潤滑劑混合均勻后裝入0號膠囊殼中，每粒重400 mg，其中含藥顆粒300 mg。

1.2.2 考察方法

1.2.2.1 崩解時間測定：取供試品6粒，分別置吊籃的玻璃管中，每管各加1粒，加擋板，按《中國藥典》2010版（二部）附錄XA崩解時限檢查法進行測定，各粒均應在30 min內(nèi)全部崩解。如有1粒不能完全崩解，應另取6粒復試，均應符合規(guī)定。

法拉利所使用的V12發(fā)動機能夠輸出澎湃的動力，蘭博基尼的V10發(fā)動機能制造出震撼人心的排氣聲線，邁凱倫行駛起來則擁有如鉆石切割般的精準，奧迪的品質(zhì)感正詮釋著其對生活品質(zhì)的追求，阿斯頓·馬丁當然會流露出令人魂牽夢繞的英倫氣息。

1.2.2 2 體外溶出度的測定：（1）呋塞米溶出度測定方法：呋塞米溶出度測定按照《中國藥典》2010年版（二）附錄XC第二法進行測定，以磷酸鹽緩沖液（pH6.8）1 000 mL為溶出介質(zhì)，溫度（37.0±0.5）℃，50 r/min，依法操作，于不同時間點取樣10 mL（取出后迅速補加37℃等量新鮮介質(zhì)），經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液在239 nm波長下，按照液相色譜條件進行測定。分別計算不同時間的累積溶出百分率，繪制溶出曲線。30 min時應不少于標示量的65%。（2）螺內(nèi)酯溶出度測定方法：螺內(nèi)酯溶出度測定按照《中國藥典》2010年版第二部附錄XC第二法進行測定，以0.1%十二烷基硫酸鈉的0.1 mol/L鹽酸溶液1 000 mL為溶出介質(zhì)，溫度（37.0±0.5）℃，50 r/min，依法操作，于不同時間點取樣10 mL（取出后迅速補加37℃等量新鮮介質(zhì)），經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液在239 nm波長下，按照液相色譜條件進行測定。分別計算不同時間的累積溶出百分率，繪制溶出曲線。60 min時應不少于標示量的80%。

1.2.3 處方設計[7-10]通過預試驗，確定對復方制劑制備工藝影響較大的因素主要有崩解劑、填充劑、粘合劑的種類等幾方面。

1.2.3.1 崩解劑的選擇：預試驗表明，崩解劑的種類對膠囊的崩解時限有很大影響。本試驗選用不同的崩解劑類型，即PPVP、CMS-Na和L-HPC進行崩解劑的考察，以崩解時限為主要指標進行篩選。如表1所示。

表1 崩解劑加入方式的考察Tab 1 Investigation of disintegrating agents

1.2.3.2 填充劑的確定：填充劑的種類對膠囊的裝量差異與溶出度等有很大影響。選用乳糖、MCC及聯(lián)用進行試驗，以裝量差異及30 min時呋塞米累積溶出百分率（A）、60 min時螺內(nèi)酯累積溶出百分率（B）為指標進行篩選。如表2所示。

表2 填充劑的篩選Tab 2 Selection of filling agents

1.2.3.3 黏合劑或潤濕劑的篩選：按以上處方篩選結(jié)果，分別以8%淀粉漿、5%PVPK30醇溶液、水為黏合劑或潤濕劑，濕法制粒，制備制劑，以裝量差異及崩解時限為指標進行篩選。

1.2.4 處方優(yōu)化[11-12]

1.2.4.1 均勻設計優(yōu)化處方：根據(jù)以上單因素考察的試驗，其中崩解劑、填充劑的種類及用量是主要影響因素。本試驗擬考察MCC（X1）和CMS-Na（X2）的用量，采用U5*（53）均勻設計方法，以30 min時呋塞米累積溶出百分率（A）、60 min時螺內(nèi)酯累積溶出百分率（B）為標準，其滿分各為50分，兩者總和為該制劑評價得分，選取最優(yōu)處方。其設計水平見表3，U5*（53）均勻設計表見表4，U5*（53）均勻設計使用表見表5。

表3 試驗因素水平設計表（%）Tab 3 Factors and levels for homogeneous design（%）

表4 U5*（53）均勻設計表Tab 4 Homogeneous design list

表5 U5*（53）使用表Tab 5 U5*（53）usage list

1.2.4.2 數(shù)據(jù)處理：由DPS軟件分別對制劑評價得分數(shù)據(jù)做出線性回歸、逐步回歸、二次多項式逐步回歸、多因子及互作項逐步回歸、多因子及平方項逐步回歸，選取最佳函數(shù)模型，篩選出最佳MCC（X1）和CMS-Na（X2）的用量。

1.2.4.4 最佳處方溶出度試驗：根據(jù)篩選的最佳處方制備制劑，按照“1.2.2.2項下”溶出度測定方法，分別測定自制與市售膠囊在0.1 mol/L HCl、水、PBS4.5、PBS6.8 4種介質(zhì)中的溶出度，并采用f2相似因子法進行復方膠囊中呋塞米、螺內(nèi)酯體外溶出曲線的統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 膠囊殼崩解時限的測定 按照“1.2.2.1項下”進行試驗，膠囊殼的崩解時間為6 min左右，全溶時間15 min左右，符合中國藥典規(guī)定。

2.2 崩解劑的選擇 按照“1.2.3.1項下”試驗方法，對6個處方以崩解時限及30 min時呋塞米累積溶出百分率（A）、60 min時螺內(nèi)酯累積溶出百分率（B）為指標考察，對制劑進行綜合評價。結(jié)果見表6。表明不同類型的崩解劑及其聯(lián)用對制劑的崩解時限影響顯著?！吨袊幍洹?010版（二部）附錄XA規(guī)定，硬膠囊劑應在30 min內(nèi)全部崩解，處方4～6崩解較快，呋塞米、螺內(nèi)酯體外溶出速度快；處方1、3崩解較慢；處方2崩解時間適宜，且根據(jù)呋塞米、螺內(nèi)酯體外溶出度試驗繪制的溶出曲線均較平緩，故選CMS-Na為崩解劑。

表6 崩解劑考察結(jié)果Tab 6 Results of disintegrating agent

2.3 填充劑的選擇 按照“1.2.1項下”制備膠囊，結(jié)果表明乳糖、MCC單用時裝量差異較大，而二者聯(lián)合應用時裝量差異較小，符合規(guī)定，且30 min時呋塞米累積溶出百分率（A）、60 min時螺內(nèi)酯累積溶出百分率（B）也均符合規(guī)定，溶出曲線也較平緩，故采用乳糖與MCC聯(lián)合應用。

2.4 黏合劑或潤濕劑的篩選 試驗結(jié)果表明分別以8%淀粉漿、5%PVPK30醇溶液、水為黏合劑或潤濕劑，濕法制粒，所得顆粒流動性均良好，裝量差異、崩解時限均符合要求，體外溶出30 min時呋塞米累積溶出百分率、60 min時螺內(nèi)酯累積溶出百分率也無顯著性差異，考慮到用水作潤濕劑時簡單方便，故選用水為復方膠囊的潤濕劑。

2.5 均勻設計優(yōu)化處方結(jié)果

2.5.1 均勻設計試驗 采用U5*(53)均勻設計方法，以30 min時呋塞米累積溶出百分率（A）、60 min時螺內(nèi)酯累積溶出百分率（B）為標準，其滿分各為50分，兩者總和（Y）為該制劑評價得分，其結(jié)果見表7。

表7 均勻設計試驗結(jié)果Tab 7 Results of uniform design

2.5.2 均勻設計法試驗結(jié)果數(shù)據(jù)處理 經(jīng)DPS軟件分別對所得實驗數(shù)據(jù)做出線性回歸、逐步回歸、二次多項式逐步回歸、多因子及互作項逐步回歸、多因子及平方項逐步回歸，根據(jù)所得各函數(shù)各項參數(shù)，最終選取二次多項式逐步回歸和多因子及平方項逐步回歸作為最佳函數(shù)模型。其擬合方程均為：Y=8.86954593+0.04050321826X1+15.598048274X2 -0.650 331 334 1X2*X2。最高指標時各因素組合：Y=100.623 5，X1=19.914 2，X2=10，即每粒膠囊中MCC含量為60 mg（20%），CMS-Na含量為30 mg（10%）。

2.6 最佳處方的確定 處方/粒：呋塞米20.0 mg，螺內(nèi)酯50.0 mg，羧甲基淀粉鈉30.0 mg，微晶纖維素60.0 mg，乳糖122.0 mg，滑石粉15 mg，硬脂酸鎂3.0 mg，總重300.0 mg。

2.7 最佳處方溶出度試驗結(jié)果 自制與市售復方膠囊中呋塞米與螺內(nèi)酯不同溶出介質(zhì)體外溶出度測定結(jié)果見表8～11。

表8 PBS6.8溶出度的測定結(jié)果（%）Tab 8 Results of dissolution in PBS6.8（%）

表9 0.1 mol/L鹽酸溶液溶出度測定結(jié)果（%）Tab 9 Results of dissolution in 0.1 mol/L HCl（%）

表10 水中溶出度測定結(jié)果（%）Tab 10 Results of dissolution in water（%）

表11 PBS4.5中溶出度測定結(jié)果（%）Tab 11 Results of dissolution in PBS4.5（%）

由以上試驗結(jié)果可知，自制與市售復方膠囊中呋塞米、螺內(nèi)酯在PBS6.8、0.1 mol/L鹽酸、水、PBS4.5 4種溶出介質(zhì)中的溶出度行為并無顯著差異（50≤f2≤100）。

3 討論

3.1 空膠囊殼崩解時限的測定[13-14]本試驗在空膠囊中裝滿滑石粉，加擋板進行測定?！吨袊幍洹?000年版二部正式收載，但2005年版《中國藥典》修訂時，沒再收錄空心膠囊及腸溶空心膠囊標準。前3個標準的崩解時限為20 min，后一個標準為10 min，而判斷標準都是全溶或崩解。GB1371-92是國家標準，現(xiàn)階段國內(nèi)的空心膠囊標準相當于有兩個。由于空心膠囊已納入藥品管理,故國內(nèi)大多數(shù)生產(chǎn)廠家和藥廠都執(zhí)行《中國藥典》2000年版（二部）標準，查閱相關文獻表明空心膠囊在10 min內(nèi)全溶的很少。

3.2 藥物晶型[15]藥物晶型不同，導致晶格能不同，藥物的熔點、溶解速度、溶解度等也不同，對藥物溶出度有一定影響。本試驗所用呋塞米原料藥有晶型，用其進行處方設計制備制劑，呋塞米溶出度測定時，呋塞米不能完全溶出，累積溶出百分率低，當把呋塞米原料藥粉碎過100目篩后進行試驗，呋塞米可完全溶出。故本試驗制劑處方中所用呋塞米為原料藥粉碎后過100目篩所得。

3.3 均勻設計試驗 固體藥物制劑的體外溶出度數(shù)據(jù)是評價其質(zhì)量的重要依據(jù)，而根據(jù)“1.2.3項下”處方設計試驗中單因素考察結(jié)果可知，其中崩解劑、填充劑的種類及其用量是體外溶出度試驗的主要影響因素，故采用U5*（53）均勻設計方法考察MCC（X1）和CMS-Na（X2）的用量，并以30 min時呋塞米累積溶出百分率（A）、60 min時螺內(nèi)酯累積溶出百分率（B）為標準，其滿分各為50分，兩者總和（Y）為該制劑評價得分。其中A以65%、B以80%為滿分50分。

3.4 不同溶出介質(zhì)確定[16]日本于1998年推出《藥品品質(zhì)在評價工程》，其主要理念如下：藥物主要在消化道吸收，由于人體內(nèi)環(huán)境千差萬別，故消化道內(nèi)的體液pH值也各不相同。一個優(yōu)良的藥物，應不受pH值的影響，在各種環(huán)境下均能有所釋放從而被吸收；而一個低品質(zhì)藥物，則可能只在一種pH值介質(zhì)中釋放，在其它pH值介質(zhì)中就難有表現(xiàn)了。故本文同時考察藥物在0.1 mol/L HCl、水、PBS4.5、PBS6.8 4種介質(zhì)中的溶出度。

3.5 溶出度分析方法[17]固體藥物制劑的體外溶出度數(shù)據(jù)是評價一種藥物制劑不同品種、不同廠家產(chǎn)品、不同批次間質(zhì)量的重要依據(jù)。在制劑的開發(fā)研究中，通過對比不同處方之間的溶出曲線，可以準確的反映藥物處方、工藝、生產(chǎn)場地以及規(guī)模等因素變化對藥物體外釋放行為的影響。根據(jù)文獻報道，比較體外溶出度曲線的方法一般有（1）方差分析法；（2）非模型依賴法；（3）模型依賴法。每一種又包括多種具體方法。其中非模型依賴法的f2相似因子法可直接對釋藥數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，無需擬合各種釋藥速率，可靈敏、準確的反映制劑的體外溶出或釋放曲線之間的差異，被FDA推薦為比較兩條溶出曲線相似性的首選方法。當50≤f2≤100時，表明制劑具有相似的體外溶出或釋放特性。本試驗采用f2相似因子法進行復方膠囊中呋塞米、螺內(nèi)酯體外溶出曲線的統(tǒng)計分析。

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（2015-07-29收稿）

Optimizing prescription of the compound furosemide and spironolactone capsules

LI Mei-zhen1,SHANGGUAN Ke-ke1,YANG Jin-rong2,FANG Zhi-zhong2
（1.Department of Pharmacy,The Second Hospital,Tianjin Medical University,Tianjin 300211,China；2.Department of Pharmacy, College of Pharmacy,Tianjin Medical University,Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics(Theranostics)，Tianjin 300070,China）

O bjective：To Use uniform design method and correlation analysis to optimize the prescription of compound capsules.Methods：Many different formulations were designed by the uniform experimental of statistics,the blank capsules of all formulations were made,and the disintegration time,the packing amount divergent,and dissolution experiments of capsule as inspection indexes were added to set up the best formulations.Determination of the dissolution of self-made and marketed preparations in different dissolution media,and calculation of the f2factor were carried out.Results：The kind and dosage of accessories in the best formulations were determined,CMSNa was disintegrant,water was binding agent,MCC and lactose were used as fillers,and magnesium stearate and French chalk were used as lubricants.There was no significant difference in the dissolution behaviors of the self-made and marketed preparations in different dissolution media.Conclusion：The selected optimal preparation and the formulation of compound capsules have good process conditions, and the uniform particles,hardness is appropriate,the capsule appearance neat,sputtering quickly.

compound capsules;furosemide;spironolactone;formulation optimization;f2factor

R9

A

1006－8147（2016）02-0171-05

李美珍（1986-），女，碩士，研究方向：臨床藥學；通信作者：房志仲，E-mail:fangzhizhong@tmu.edu.cn。