張 巖，劉運(yùn)德

（1．天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津300070；2．天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津300070）

論著

安圖化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)高血壓5項(xiàng)激素相關(guān)性分析

張 巖1，劉運(yùn)德2

（1．天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津300070；2．天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津300070）

目的：分析不同廠家試劑盒檢測(cè)高血壓5項(xiàng)激素[腎素、血管緊張素Ⅱ（AⅡ）、醛固酮（ALD）、皮質(zhì)醇（COR）和促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）]濃度值差異，并探討用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)高血壓5項(xiàng)激素濃度值對(duì)原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究的意義。方法：選取159例高血壓患者(收縮壓≥140 mmHg，舒張壓≥90 mmHg)，分別用DRG酶聯(lián)免疫試劑盒和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測(cè)定腎素濃度；選取138例高血壓患者，分別用ENZO酶聯(lián)免疫試劑盒和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測(cè)定AⅡ濃度；選取146例高血壓患者，分別用IBL酶聯(lián)免疫試劑盒和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測(cè)定ALD濃度；選取239例高血壓患者及316例高血壓患者，分別用ROCHE全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑盒測(cè)定COR及ACTH濃度。結(jié)果：不同廠家試劑盒檢測(cè)高血壓濃度存在一定的偏差，但相關(guān)性良好（相關(guān)系數(shù)R＞0．95）。結(jié)論：化學(xué)發(fā)光法做為一種高靈敏、高特異、高準(zhǔn)確的定量檢測(cè)方法，定量檢測(cè)高血壓5項(xiàng)激素對(duì)原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究具有重要的意義。

腎素；血管緊張素Ⅱ；醛固酮；皮質(zhì)醇；促腎上腺皮質(zhì)激素；化學(xué)發(fā)光法；高血壓

據(jù)2010年全國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況調(diào)查資料顯示，我國(guó)成人高血壓患病率為18．8%，全國(guó)有高血壓患者約1．6億[1]。在高血壓的診治中,除原發(fā)性高血壓外，還有一組特殊群體—繼發(fā)性高血壓也不能忽視[2]。原發(fā)性高血壓憑目前的醫(yī)學(xué)技術(shù)尚無(wú)法查明病因，因此只能長(zhǎng)期服降壓藥來(lái)控制，而繼發(fā)性高血壓則不同，由某些特定的病因引起，且往往由于血壓長(zhǎng)期居高不下，藥物治療很難奏效，但可以通過(guò)查明病因來(lái)有效控制血壓[3]。目前檢測(cè)高血壓5項(xiàng)[腎素、血管緊張素Ⅱ（AⅡ）、醛固酮（ALD）、皮質(zhì)醇（COR）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）]已成為原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究的重要指標(biāo)[4-6]，而現(xiàn)今國(guó)內(nèi)進(jìn)行高血壓5項(xiàng)檢測(cè)采用ELISA以及放射免疫分析法（RIA）占多數(shù)。隨著中國(guó)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，化學(xué)發(fā)光法（CLIA）定量檢測(cè)試劑盒也進(jìn)入了中國(guó)市場(chǎng)，不同廠家由于使用包被物、標(biāo)記材料及方法學(xué)等方面的差異，會(huì)出現(xiàn)同一份標(biāo)本用不同廠家試劑盒檢測(cè)數(shù)值方面的差異[7]，為此我們開(kāi)展了該方面的研究。

1 資料和方法

1．1 一般資料

1．1．1 2013年3月-2014年3月天津市代謝病醫(yī)院收治的159例高血壓患者（收縮壓≥140 mmHg，舒張壓≥90 mmHg），男性106例，女性53例，年齡42～68歲，平均55歲，病程2～10年，其中輕型48例（149 mmHg≥收縮壓≥140 mmHg和/或99 mmHg≥舒張壓≥90mmHg），中型85例（179mmHg≥收縮壓≥160 mmHg和/或109 mmHg≥舒張壓≥100 mmHg），重型26例（收縮壓≥180 mmHg和/或舒張壓≥100 mmHg）[8]，用于進(jìn)行腎素的測(cè)定。

1．1．2 2013年8月-2014年2月河南省人民醫(yī)院收治的146例高血壓患者，男性96例，女性50例，年齡45～65歲，平均57歲，病程2～10年，其中輕型48例，中型64例，重型26例，用于進(jìn)行血管緊張素Ⅱ的測(cè)定。

1．1．3 2013年8月-2014年2月天津市代謝病醫(yī)院收治的138例高血壓患者，男性86例，女性52例，年齡42～68歲，平均55歲，病程2～10年，其中輕型48例，中型64例，重型34例，用于進(jìn)行醛固酮的測(cè)定。

1．1．4 2012年l2月-2014年1月鄭州安圖生物有限公司收集的239例高血壓患者，男性158例，女性81例，年齡42～70歲，平均58歲，病程2～10年，其中輕型68例，中型124例，重型47例，用于進(jìn)行皮質(zhì)醇的測(cè)定。

1．1．5 2012年l2月-2014年1月鄭州安圖生物有限公司收集的316例高血壓患者，男性219例，女性97例，年齡42～68歲，平均55歲，病程2～10年，其中輕型98例，中型164例，重型54例，用于促腎上腺皮質(zhì)激素的檢測(cè)。

1．1．6 由于標(biāo)本用量和需要病人配合，另外可以減小隨機(jī)誤差，故每個(gè)比較組采用不同來(lái)源臨床標(biāo)本。

1．1．7 測(cè)定前患者應(yīng)停用降壓藥3周以上；停用利尿劑4周以上；停用避孕藥6周以上；不宜停藥的患者應(yīng)改用對(duì)試驗(yàn)影響較小的藥物。

區(qū)域噴發(fā)活動(dòng)以石炭早期的噴發(fā)活動(dòng)為主，二疊世噴發(fā)次之。巖性主要是輝石安山玢巖、安山玢巖。噴發(fā)類型為爆發(fā)相—噴溢相。海底噴發(fā)為主，陸相噴發(fā)次之。

1.2 不同試劑盒方法學(xué)和對(duì)比方法

1.2.1 由于代理商供貨問(wèn)題，與安圖對(duì)比的試劑盒采用不同廠家的試劑盒，均為進(jìn)口已上市公司。

1.2.2 DRG腎素定量檢測(cè)試劑盒（ELISA），為定量檢測(cè)試劑，正常參考值范圍為0.81～128 pg/mL。

1.2.3 ENZO血管緊張素Ⅱ定量檢測(cè)試劑盒（ELISA），為定量檢測(cè)試劑，正常參考值范圍為4.6～1 000 pg/mL。

1.2.4 IBL醛固酮定量檢測(cè)試劑盒（ELISA），為定量檢測(cè)試劑，正常參考值范圍為10～1 000 pg/mL。

1.2.5 羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀，與其配套的皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素定量檢測(cè)試劑盒，正常參考值范圍分別為0.018～63.4μg/dL及1.0～2000pg/mL。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 腎素的測(cè)定 利用DRG腎素定量檢測(cè)試劑盒及鄭州安圖生物腎素定量檢測(cè)試劑盒分別測(cè)定159例高血壓患者血漿中腎素的含量。

1.3.2 血管緊張素Ⅱ的測(cè)定 利用ENZO血管緊張素Ⅱ定量檢測(cè)試劑盒及鄭州安圖生物血管緊張素Ⅱ定量檢測(cè)試劑盒分別測(cè)定138例高血壓患者血漿中血管緊張素Ⅱ的含量。

1.3.3 醛固酮的測(cè)定 利用IBL醛固酮定量檢測(cè)試劑盒及鄭州安圖生物醛固酮定量檢測(cè)試劑盒分別測(cè)定159例高血壓患者血漿中血管緊張素Ⅱ的含量。

1.3.4 皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素的測(cè)定 利用羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀及鄭州安圖生物皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素定量檢測(cè)試劑盒分別測(cè)定239例及316例高血壓患者血漿中皮質(zhì)醇及促腎上腺皮質(zhì)激素的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 腎素檢測(cè) DRG酶免定量試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中腎素含量方面無(wú)顯著差別,回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，綜合分析對(duì)比結(jié)果,兩方試劑均按照統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量溯源,相關(guān)性分析見(jiàn)圖1。

圖1 腎素檢測(cè)相關(guān)性分析Fig 1 Correlation analysis of renin detection

2.2 AⅡ檢測(cè) ENZO酶免定量試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中AⅡ含量方面無(wú)顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見(jiàn)圖2。

圖2 血管緊張素Ⅱ檢測(cè)相關(guān)性分析Fig 2 Correlation analysis of angiotensinⅡdetection

2.3 ALD檢測(cè) IBL酶免定量試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中ALD含量方面無(wú)顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見(jiàn)圖3。

圖3 醛固酮檢測(cè)相關(guān)性分析Fig 3 Correlation analysis of aldosterone detection

2.4 COR檢測(cè) 羅氏電化學(xué)發(fā)光試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中COR含量方面無(wú)顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見(jiàn)圖4。

圖4 皮質(zhì)醇檢測(cè)相關(guān)性分析Fig 4 Correlation analysis of cortisol detection

2.5 ACTH檢測(cè) 羅氏電化學(xué)發(fā)光試劑和安圖生物化學(xué)發(fā)光試劑在檢定血漿中ACTH含量方面無(wú)顯著差別，回算樣本濃度值相關(guān)性R大于0.95，見(jiàn)圖5。

圖5 促腎上腺皮質(zhì)激素檢測(cè)相關(guān)性分析Fig 5 Correlation analysis of the detection of ACTH

3 討論

通過(guò)對(duì)不同廠家試劑盒檢測(cè)高血壓5項(xiàng)激素濃度值進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在定量標(biāo)準(zhǔn)的選取方面和臨床樣本檢測(cè)方面，目前市場(chǎng)檢測(cè)高血壓的主要方法和鄭州安圖生物化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒無(wú)顯著性差異，相關(guān)性R大于0.95。

化學(xué)發(fā)光免疫分析是將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)微量化學(xué)物質(zhì)的一項(xiàng)新型免疫測(cè)定技術(shù)。其檢測(cè)原理是借助發(fā)光底物自身的發(fā)光強(qiáng)度直接進(jìn)行測(cè)定。酶促化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的原理在于免疫反應(yīng)中的酶作用于發(fā)光底物,發(fā)光底物在酶的作用下,產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。當(dāng)這種中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí),可發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器可測(cè)量光量子產(chǎn)額。由此可以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量[9]?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析具有高靈敏度和寬線性范圍，廣泛適用于高血壓5項(xiàng)激素的定量檢測(cè)。

研究發(fā)現(xiàn)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）基因的變異參與了原發(fā)性高血壓的發(fā)生[10]，RAAS是一個(gè)十分復(fù)雜的多層次的內(nèi)分泌系統(tǒng),有研究發(fā)現(xiàn)腎素活性（PRA）和ALD水平可能顯著影響著血壓的晝夜節(jié)律模式[11],并與靶器官損害有密切關(guān)系[12]。雖然目前COR導(dǎo)致血壓升高的機(jī)制仍不明確,但其可能通過(guò)多種作用途徑直接或間接的導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生一系列異常,包括血容量的增加、外周血管阻力增加、心輸出量增加等病理生理改變[13-14]。高分泌的COR與皮質(zhì)醇增多癥的高血壓發(fā)病機(jī)制相關(guān)，皮質(zhì)醇增多癥分為ACTH依賴性（COR高、ACTH高）和ACTH非依賴性（COR高、ACTH低）兩種類型[15]。皮質(zhì)醇增多癥是一種能夠引起繼發(fā)性高血壓的重要疾病,其中80%以上的成人皮質(zhì)醇增多癥患者伴發(fā)高血壓，因此檢測(cè)高血壓5項(xiàng)激素已成為原發(fā)性和繼發(fā)性高血壓分型診斷、治療及研究的重要指標(biāo)。

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（2015-10-25收稿）

R544．1

A

1006－8147（2016）03-0253-03

張巖（1984-），男，技師，碩士在讀，研究方向：免疫學(xué)；通信作者：劉運(yùn)德,E-mail：yundeliu@126.com。