王　偉，高倩倩

(1.臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東臨沂 276000；2.臨沂市科學(xué)技術(shù)合作與應(yīng)用研究院，山東臨沂 276001)

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高效液相色譜法測定紅景天軟膠囊中的紅景天苷

王偉1，高倩倩2

(1.臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東臨沂 276000；2.臨沂市科學(xué)技術(shù)合作與應(yīng)用研究院，山東臨沂 276001)

[摘要]本研究旨在建立高效液相色譜法測定紅景天軟膠囊中紅景天苷含量的方法，為紅景天軟膠囊提供檢測和質(zhì)量控制參考。用甲醇對樣品進行超聲處理，色譜條件為色譜柱(C(18)，4.6 mm×250 mm，5.0 μm)，流動相為甲醇∶水=15∶85(V∶V)，柱溫為35℃，檢測波長為215 nm，流速為1.0 mL·min(-1)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，紅景天苷在0.021～0.114 mg·mL(-1)范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系(r2=0.99966)，平均回收率為98.14%(n=9)。此法操作簡單快速,準確性和重現(xiàn)性好，可作為紅景天軟膠囊中紅景天苷含量的檢測方法。

[關(guān)鍵詞]紅景天苷；高效液相色譜法；含量測定

紅景天(RhodiolaroseaLinn)是景天科(Crassulaceae)紅景天屬(Rhodida)植物，主要有效成分是紅景天苷(salidroside)。紅景天苷具有抗心肌缺血、抗衰老、抗輻射、抗腫瘤等多種藥理作用[1-6]。測定紅景天苷的方法已有一些報道，氣相色譜法和薄層色譜法較少，最常用的方法為高效液相色譜法[7-9]，本研究建立了能分離紅景天軟膠囊中紅景天苷含量的高效液相色譜方法。

1材料與方法

1.1儀器和試劑

紅景天苷標(biāo)準品(中國食品藥品檢定研究院，110818-201505)；甲醇、乙腈均為色譜純(默克公司)；蒸餾水為實驗室自制；紅景天軟膠囊購于藥店。EQ-500超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；1260高效液相色譜儀(安捷倫公司)；色譜柱(C18，4.6 mm×250 mm，5.0 μm，安捷倫公司)。

1.2色譜條件

柱溫為35 ℃；檢測波長為215 nm；流速為1.0 mL·min-1；流動相為甲醇∶水=15∶85(V∶V)。

1.3標(biāo)準品溶液、供試品溶液的配制及標(biāo)準曲線的繪制

精確稱取紅景天苷標(biāo)準品0.0100 g置于20 ml容量瓶中，加入甲醇溶解，配制成濃度為0.5 mg·mL-1的標(biāo)準品溶液。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、5.0 mL于25 mL容量瓶中,配成濃度為0.01、0.02、0.03、0.04、0.1 mg·mL-1的標(biāo)準溶液。經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾,分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積。以紅景天苷對照品含量X(mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準曲線。

取軟膠囊，剪開，取內(nèi)容物0.5 g置于50 mL容量瓶中，加入甲醇，超聲(功率500 W，頻率50 kHz)，處理30 min，取出，放冷，定容至刻度，經(jīng)0.45μm的濾膜過濾，作為供試品溶液。

1.4精密度實驗

取紅景天苷對照品溶液，按上述色譜條件，重復(fù)進樣5次，計算RSD(%)。

1.5穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于配制后0、8、16、24h精密吸取10 μL進樣，測定峰面積，計算RSD(%)。

1.6重復(fù)性

取同一批供試品5份，按上述提取方法制成溶液，進樣，測定峰面積，分別計算含量，并計算RSD(%)。

1.7加標(biāo)回收率實驗

精密稱取約0.5 g樣品5份，置于50 mL容量中，分別精密加入紅景天苷對照溶液(濃度為1.0 mg·mL-1)，按供試品制備方法處理樣品，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過濾,即為加標(biāo)溶液。

1.8樣品測定

實測樣品3個，每個2份，共計6份，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，用標(biāo)準曲線法計算紅景天苷含量。

2結(jié)果與討論

2.1標(biāo)準曲線、精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性實驗

測得紅景天苷的標(biāo)準曲線方程Y=61347.64X-16.47(r2=0.99966)，在0.021～0.114 mg·mL-1內(nèi)具有良好的線性。精密度實驗中測得相對標(biāo)準偏差(RSD)為0.56%,塔板數(shù)均大于5000，表明儀器精密度良好，為準確的含量測定奠定了基礎(chǔ)。紅景天供試品溶液在放置0、8、16、24 h后，分別精密吸取10 μL進樣，測其峰面積相對標(biāo)準偏差(RSD)為0.43%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，不會隨著時間延長降解。

在重復(fù)性實驗中，選取同一批號樣品5份，測定含量分別為5.89、5.96、5.82、5.85、5.80 mg·mL-1，平均含量為5.9 mg·mL-1，相對標(biāo)準偏差(RSD)為1.1%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2回收率實驗

結(jié)果見表1，3個濃度下樣品中的紅景天苷的提取平均回收率為98.14%，相對標(biāo)準偏差(RSD)小于1.5%。

加標(biāo)回收率的測定是常用的確定準確度的方法之一,也是在樣品測定時,作為質(zhì)量控制的主要方法。本文在已知濃度的樣品中添加3個不同濃度水平的紅景天苷對照品溶液，分別測定其回收率，得到其平均回收率和RSD，結(jié)果表明該方法的準確度高，樣品處理方法和含量測定方法可行。

表1　加標(biāo)回收率實驗(n=9)

2.3實際樣品的測定

表2　樣品測定結(jié)果(n=6)

共測定3個樣品，每個樣品測2次，結(jié)果見表2，測得平均含量為5.84 mg·g-1，RSD為0.73%。紅景天苷軟膠囊里面添加了大豆油、蜂膠等，性狀粘稠，提取和分離檢測都有一定難度。在研究中采用甲醇對其進行溶解,分別采用了加熱回流提取法和超聲提取法來提取樣品，經(jīng)測試可知加熱回流法提取測得的紅景天苷含量低于超聲提取法。超聲提取簡單便捷，更適合于紅景天苷的提取。同時，超聲30 min和60 min后測得的紅景天苷含量沒有差別，表明超聲處理30 min即可提取完全。反相色譜系統(tǒng)的流動相首選甲醇-水系統(tǒng)，在研究中使用不同比例的甲醇-水作為流動相,結(jié)果表明若甲醇的比例加大，保留時間縮短，但紅景天苷與雜質(zhì)的分離度不好。以甲醇∶水=15∶85(V∶V)時為流動相時分離效果最好。在該條件下，樣品能較好地分離，未發(fā)現(xiàn)干擾峰，在與紅景天苷標(biāo)準品色譜峰相對應(yīng)的位置上檢出色譜峰(圖1)，說明此方法可行。

圖1　紅景天苷對照品及供試品色譜圖

3結(jié)論

本研究采用甲醇超聲溶解樣品，以甲醇∶水=15∶85(V∶V)為流動相，選擇C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)，柱溫35 ℃；檢測波長215 nm；流速1.0 mL·min-1，能把紅景天軟膠囊中的紅景天苷分離出來，通過測定其線性范圍、精密度和回收率實驗，結(jié)果均符合要求，表明該方法適用于測定紅景天軟膠囊中紅景天苷的含量檢測。

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Determination of Salidroside in Rhodiola Soft Capsules by High Performance Liquid Chromatography

WANG Wei1,GAO Qian-qian2

(1.Linyi Institute of Food and Drug Control,Linyi Shandong 276000,China;2.Linyi Academy of Technology Cooperation and Application,Linyi Shandong 276000,China)

Abstract:The main purpose of this study was to establish a method for the content determination and quality control of salidroside in rhodiola soft capsules by high performance liquid chromatography (HPLC). For the determination of salidroside, C(18) column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was adopted，the mobile phase was methanol- water(V∶V=15∶85) at the flow rate of 1.0mL·min(-1)，the detection wavelength was 225 nm and the column temperature was controlled about 35℃; and quantified by external standard method. The results indicated that the salidroside had a good linearity in the range of 0.021～0.114 mg·mL(-1)(r2=0.99966). The the average recovery was 98.14% (n=9). The method is simple and fast, sensitive and has good repetition.It can be used to determine the content of salidroside in rhodiola soft capsules.

Key words:salidroside; high performance liquid chromatography; determination

[中圖分類號]G807.4

[文獻標(biāo)識碼]A

[文章編號]2095-7602(2016)04-0060-04

[作者簡介]王偉(1983- )，女，工程師，從事食品藥品檢驗研究。

[收稿日期]2016-01-17