羅賢勇　龐國蓮　張建坤

[摘要] 目的 探討Galectin-3、CK19、TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床診斷意義。 方法 回顧性分析我科2010年1月～2014年12月間286例甲狀腺乳頭狀癌和80例甲狀腺濾泡性病變伴乳頭狀增生病例（40例濾泡性腺瘤和40例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫），應(yīng)用免疫組化方法檢測Galectin-3、CK19、TPO蛋白表達(dá)。 結(jié)果 Galectin-3、CK19的陽性表達(dá)率分別為98.3%和98.6%，顯著高于B組的15.0%和10.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；TPO在甲狀腺乳頭狀癌中的陰性表達(dá)為87.1%，顯著高于B組的7.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 Galectin-3、CK19、TPO是診斷甲狀腺乳頭狀癌的重要標(biāo)記物，聯(lián)合檢測準(zhǔn)確率高，在甲狀腺乳頭狀癌與良性病變的鑒別診斷中具有重要價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] Galectin-3；CK19；TPO；甲狀腺乳頭狀癌

[中圖分類號] R736.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2016）07-0100-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of Galectin-3， CK19 and TPO in papillary thyroid carcinoma and its clinical significance. Methods A retrospective analysis came from our department from January 2010 to December 2014， 286 cases of thyroid papillary carcinoma and 80 cases of thyroid follicular lesions with papillary hyperplasia cases （40 cases of follicular adenoma and 40 cases of nodular goiter）， the expression of Galectin-3， CK19 and TPO protein was detected by immunohistochemistry. Results The positive expression of Galectin-3（98.3%） and CK19（98.6%） were respectively significantly higher than the group B （15.0% and 10.0%）， the difference was statistically significant（P<0.05）. TPO negative expression in PTC（87.1%） was significantly higher than that in the group B（7.5%）， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Galectin-3， CK19 and TPO are important markers for the diagnosis of papillary thyroid carcinoma， and the accurate rate of combined detection is high. It is of great value in the differential diagnosis of papillary thyroid carcinoma and benign lesions.

[Key words] Galectin-3； CK19； TPO； Papillary thyroid carcinoma

近年來全球范圍甲狀腺惡性腫瘤呈快速增長趨勢，在我國甲狀腺癌也在快速增長。在發(fā)達(dá)國家，甲狀腺癌占所有癌的21%，而甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carinoma，PTC）又占甲狀腺惡性腫瘤的85%～90%以上[1-4]。PTC由于其腫瘤多為單發(fā)，原發(fā)病灶可能很小，需經(jīng)仔細(xì)觀察方能發(fā)現(xiàn)[5-7]，且其形態(tài)學(xué)特征主要表現(xiàn)在細(xì)胞核上，經(jīng)典的PTC具有明顯毛玻璃樣核、核仁、核溝、核內(nèi)包含體和砂粒體，然而在實(shí)際臨床診斷工作中有一些乳頭狀癌僅憑細(xì)胞核形態(tài)很難與一些甲狀腺良性病變伴乳頭狀增生相鑒別。我們通過免疫組織化學(xué)方法聯(lián)合檢測Galectin-3、CK19、TPO，希望能找到PTC的有效標(biāo)志物，幫助診斷和鑒別診斷?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院2010年1月～2014年12月間送我科病檢的甲狀腺乳頭狀病變366例，其中甲狀腺乳頭狀癌286例（A組），甲狀腺濾泡性病變伴乳頭狀增生病例80例（B組），年齡13～78歲，中位年齡49歲，男84例，女282例，男女比例1∶3.36，其中286例甲狀腺乳頭狀癌（包括86例甲狀腺乳頭狀微小癌，29例甲狀腺濾泡亞型乳頭狀癌）。所有患者術(shù)前均進(jìn)行詳細(xì)問診，行頸部超聲、甲狀腺功能測定等必要術(shù)前檢查，部分患者行甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查。

1.2方法及試劑

所有甲狀腺未固定的送檢標(biāo)本均以0.2 cm間隔書頁狀平行切開，仔細(xì)觀察切面，必要時結(jié)合指腹觸診，發(fā)現(xiàn)可疑病灶時盡量以最大面充分取材（對鈣化區(qū)域行脫鈣后常規(guī)石蠟切片），術(shù)中冰凍切片后標(biāo)本均經(jīng)10%的福爾馬林固定、脫水、石蠟包埋，切片厚3～5 μm，脫蠟至水后對兩組病變樣本行免疫組織化學(xué)染色檢查，試劑盒Galectin-3、CK19、TPO均購自于福州邁新生物科技有限公司，為即用型抗體，采用SP法，具體操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

Galectin-3染色以核漿表達(dá)為主，以細(xì)胞核或細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標(biāo)準(zhǔn)（圖1）；CK19和TPO染色為膜漿表達(dá)，以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標(biāo)準(zhǔn)（圖2、圖3）。結(jié)果參定Beesley分析方法，按陽性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)并參照著色強(qiáng)度確定[8-10]：陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性（-），10%～25%為弱陽性（+），26%～50%為陽性（++），>50%為強(qiáng)陽性（+++）。用已知陽性片作陽性對照，磷酸緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Galectin-3免疫組化結(jié)果分析

A組286例PTC患者Galectin-3抗體除5例為陰性表達(dá)外，其余281例均為陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率98.3%；B組80例甲狀腺良性濾泡性病變患者以陰性表達(dá)為主，弱陽性12例，陰性68例，陽性率僅為15.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=271.352，P<0.05），見表1。

2.2 CK19免疫組化結(jié)果分析

A組286例PTC患者CK19抗體除4例為陰性表達(dá)外，其余282例均為陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率98.6%；B組80例甲狀腺良性濾泡性病變患者以陰性表達(dá)為主，陰性72例，弱陽性8例，陽性率為10.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=298.268，P<0.05），見表2。

2.3 TPO免疫組化結(jié)果分析

A組286例PTC患者TPO抗體249例呈陰性表達(dá)，僅有37例呈弱至中陽性表達(dá)，陰性表達(dá)率87.1%；B組80例甲狀腺良性濾泡性病變患者TPO則以陽性表達(dá)為主，有74例呈陽性率表達(dá)，6例呈陰性表達(dá)，陰性表達(dá)率為7.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=187.282，P<0.05），見表3。

3討論

本組病例我們選取286例PTC和80例甲狀腺濾泡性良性病變伴乳頭狀增生（結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和濾泡型腺瘤伴乳頭狀增生病例各40例）病例作為研究對象，發(fā)現(xiàn)Galectin-3、CK19、TPO等抗體均可作為診斷PTC的有效標(biāo)志物用于診療中，其單項(xiàng)陽性（陰性）檢出率均較為理想，PTC患者Galectin-3、CK19 多以陽性表達(dá)為主，而TPO表達(dá)卻是以陰性為主。CK19是一種低分子量的細(xì)胞角蛋白，分子量為40kDa，存在于各種上皮和正常上皮來源的腫瘤中，有研究表明CK19在PTC中表達(dá)較強(qiáng)且較特異，在濾泡性腺瘤、濾泡性癌及增生性結(jié)節(jié)中均不表達(dá)或部分病例有局部弱至中度陽性表達(dá)[11，12]。本研究A組病例除4例陰性表達(dá)外，其余282例均呈不同程度的弱至強(qiáng)陽性表達(dá)，陽性率98.6%與上述表述一致。Galectin-3是由β-半乳糖苷鍵結(jié)合蛋白（Galectin-3結(jié)構(gòu)域）和一個層粘連蛋白構(gòu)成的嵌合體結(jié)構(gòu)，它與同型細(xì)胞間的粘附有關(guān)，是一個同型細(xì)胞粘附凝集素，它的下調(diào)表示各種腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移的活躍度，是PTC診斷中的一個重要依據(jù)；A組病例僅有5例呈陰性表達(dá)，9例呈弱陽性表達(dá)，41例呈中陽性表達(dá)，231例呈強(qiáng)陽性表達(dá)，陽性率為98.3%；而對照組僅有12例呈弱陽性表達(dá)，其余68例呈陰性表達(dá)，陽性率僅為15.0%，說明Galectin-3在PTC中的表達(dá)具有較強(qiáng)的敏感性和特異性。TPO主要位于甲狀腺上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基體及濾泡腔刷狀緣等部位，直接參與甲狀腺細(xì)胞中碘的氧化、酪氨酸的碘化及碘化酪氨酸的藕聯(lián)等，甲狀腺激素的催化主要靠TPO完成，正常人群的TPO呈陽性表達(dá)，它的丟失僅限于甲狀腺惡性腫瘤患者，其敏感性可達(dá)89.5%[13-16]。本研究結(jié)果與上述報(bào)道一致，本組研究病例中A組患者僅29例呈弱陽性表達(dá)，8例為中陽性表達(dá)，其余249例均呈陰性表達(dá)，陰性表達(dá)率87.1%，B組病例僅有6例呈陰性表達(dá)，陰性率為7.5%，特異性及敏感性均較為理想。

綜上所述，CK19、Galectin-3蛋白在PTC中的陽性表達(dá)明顯高于甲狀腺良性病變，表明CK19、Galectin-3可作為初步診斷和鑒別甲狀腺病變的標(biāo)記物；TPO蛋白在PTC中的陰性表達(dá)率顯著高于甲狀腺良性病變，與CK19、Galectin-3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，進(jìn)一步說明CK19、Galectin-3與TPO蛋白在不同類型甲狀腺病變診斷及鑒別診斷中具有敏感性和特異性，它們聯(lián)合應(yīng)用可作為PTC與良性病變診斷及鑒別診斷的良好標(biāo)志物，同時對甲狀腺病變的預(yù)后診斷具有重要意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 高鍵，高明，于洋，等. 甲狀腺乳頭狀癌濾泡亞型臨床病理特征分析[J]. 中華普通外科雜志，2014，29（3）：199-202.

[2] 趙麗華，林竟，石柏，等. P53、Ki-67、Galectin-3、HBME-1、34βE12和CK19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及臨床病理意義[J]. 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，32（10）：1202-1206.

[3] 朱雄增，朱曉麗. 甲狀腺乳頭狀癌及其變異型的病理學(xué)研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用腫瘤雜志，2006，13（2）：117-119.

[4] Hughes DT，Haymart MR，Miller BS，et al. The most commonly oc-curring papillary thyroid cancer in the United States is now a microcar cinoma in a patient older than 45 years[J]. Thyroid，2011，21（3）：231-235.

[5] 陳英，許躍，薛娣，等. 甲狀腺乳頭狀癌中CK19、CD56、和VEGF-C的表達(dá)及意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2012，28（9）：1032-1034.

[6] 林茂華、毛瑛玉，李婷，等. CK19、CyclinD1、HBME-1、34βE12、TPO、Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及意義[J]. 實(shí)用癌癥雜志，2013，28（6）：617-619.

[7] 劉慶錳，何平生. CK8、CK19和TPO聯(lián)合檢測在甲狀腺乳頭狀癌及乳頭狀增生病變中的診斷應(yīng)用[J]. 實(shí)用腫瘤雜志，2011，26（2）：153-156.

[8] 鄭麗，胡向陽. Galectin-3、CK19、HBME-1表述和BRAF突變在甲狀腺乳頭狀癌中的意義[J]. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，48（4）：401-405.

[9] 鄧敏，葉顧萍，馬建中，等. 甲狀腺乳頭狀癌中CK19，Galectin-3、HBME-1和TPO的表述及意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27（8）：843-846.

[10] 汪玉，馮曉冬，張志魁，等. TPO、CKl9、Galectin-3、HBME-l及CD56在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的應(yīng)用研究[J]. 現(xiàn)代診斷與治療，2015，26（13）：2980-2981.

[11] 孔令非. 甲狀腺濾泡性病變[J]. 診斷病理學(xué)雜志，2002，9（6）：324-326.

[12] Wirtschafter A，Schmidt R，Rosen D，et al. Expression of the RET/PTC fusion gene as a marker for papillary carcinoma in Hashinmotos thyroiditis[J]. Laryngoscope，1997， 13（4）：107-109.

[13] 李惠，張凌，嵇慶海，等. 橋本氏甲狀腺炎合并甲狀腺乳頭狀癌的研究進(jìn)展[J]. 中華外科雜志，2011，49（11）：1042-1044.

[14] 王平. 腔鏡甲狀腺癌根治術(shù)的現(xiàn)狀與展望[J]. 外科理論與實(shí)踐，2011，16（6）：522-525.

[15] 孫敏國. 手術(shù)聯(lián)合131I甲狀腺片治療甲狀腺乳頭狀癌30例療效觀望[J]. 山東醫(yī)藥，2010，50（35）：90-91.

[16] 劉穎. CK19、TPO蛋白表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌病理診斷中的意義[J]. 中國醫(yī)藥科學(xué)，2015，5（5）：143-144.

（收稿日期：2015-12-20）