黎燕瓊

【摘要】 目前乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是一個(gè)較嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。全球有近3億HBV攜帶者，我國(guó)占45%，準(zhǔn)確、及時(shí)地檢測(cè)HBV，對(duì)控制HBV傳播、提高診療效果非常重要。隨著HBV檢測(cè)方法的不斷發(fā)展，臨床已廣泛開展與其相關(guān)的檢測(cè)技術(shù)，對(duì)防治HBV感染發(fā)揮了重要作用。目前HBV的檢測(cè)方法主要有電子顯微鏡法、免疫學(xué)法、分子生物學(xué)法。本文對(duì)HBV幾種檢測(cè)方法進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒； 檢測(cè)方法

中圖分類號(hào) R512.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6805（2016）8-0159-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.8.091

乙型病毒性肝炎是一種廣泛傳播、危害嚴(yán)重的傳染性疾病，其病原體是HBV，HBV主要經(jīng)血液和血制品等傳播、母嬰傳播及接觸傳播。HBV感染是一個(gè)世界性的公共衛(wèi)生問題，全球有近3億HBV攜帶者，我國(guó)占45%[1]。急性乙肝有20%會(huì)轉(zhuǎn)化為慢性乙肝，進(jìn)而可能發(fā)展為肝硬化和肝癌[2]。HBV屬嗜肝DNA病毒科，基因組長(zhǎng)為3.2 kb。HBV基因組是不完全閉合環(huán)狀雙鏈DNA，是目前已知感染人類最小的DNA病毒[3]。HBV具有嚴(yán)格種屬及器官特異性，感染人體后侵襲的主要是肝細(xì)胞，并在肝細(xì)胞內(nèi)定居復(fù)制。目前認(rèn)為機(jī)體免疫調(diào)節(jié)紊亂和免疫功能低下是HBV持續(xù)存在并形成慢性肝細(xì)胞損傷的主要原因[4]。

1 電子顯微鏡法

電子顯微鏡法主要包括常規(guī)電鏡法和免疫電鏡法。英國(guó)學(xué)者Dane于1970年使用電鏡發(fā)現(xiàn)了完整的感染性病毒顆粒，即Dane顆粒。常規(guī)電鏡法具有觀察比較直觀、標(biāo)本用量小、制樣速度快的特點(diǎn)，但由于其觀察靈敏度較低而要求病毒在標(biāo)本中大量存在，該法在日常應(yīng)用中受到一定限制。免疫電鏡術(shù)是將免疫化學(xué)技術(shù)與電鏡術(shù)結(jié)合，是在超微結(jié)構(gòu)水平下觀察和研究抗原、抗體結(jié)合定位的一種方法，該方法的敏感性較常規(guī)電鏡法高，能提高HBV的檢出率，但該方法對(duì)操作者的技術(shù)要求較高，樣本制備過程較復(fù)雜[5]。由于電子顯微鏡檢查難以在臨床常規(guī)開展，故檢查HBV感染一般不用該類方法。

2 免疫學(xué)法

HBV感染的病原學(xué)診斷方法臨床上最常用的是檢測(cè)HBV標(biāo)志物。傳統(tǒng)的兩對(duì)半即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb是HBV免疫標(biāo)志物的血清學(xué)檢查的常規(guī)項(xiàng)目，近年來有文獻(xiàn)[6-8]報(bào)道前S1抗原與HBV、DNA及HBeAg三者間有顯著的相關(guān)性，可作為補(bǔ)充性免疫指標(biāo)。目前常用的免疫學(xué)檢測(cè)有酶免疫法（EIA）、微粒子酶免分析法（MEIA）或化學(xué)發(fā)光法（CIA）等，臨床應(yīng)用最廣泛的方法是ELISA和CIA。

早期的放射免疫法（RIA）有較高的檢測(cè)靈敏度，缺點(diǎn)是操作復(fù)雜、標(biāo)記物不穩(wěn)定、對(duì)人體及環(huán)境造成放射性污染。逐步發(fā)展起來的有酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）、膠體金免疫層析技術(shù)（CICA）、時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）、微粒子酶免疫分析（MEIA）及電化學(xué)發(fā)光免疫法（ECLIA）[3]。其基本原理是將酶與抗體或抗原結(jié)合成酶標(biāo)記抗體或抗原，在酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng)完成后，加入酶的相應(yīng)底物，通過酶對(duì)底物的顯色反應(yīng)，對(duì)抗原（抗體）進(jìn)行定位、定性或定量的測(cè)定分析，上述各種方法只是標(biāo)記物和吸附表面的不同。固相放射免疫法（SPRIA）靈敏度高，比ELISA法的靈敏度高20倍，檢測(cè)生物活性物質(zhì)可達(dá)pg水平，但因?qū)Νh(huán)境造成污染，同位素穩(wěn)定性差等原因，已很少用于HBV標(biāo)志物的檢測(cè)。ELISA法特異性高，靈敏度一般認(rèn)為在0.05 ng/ml水平，目前應(yīng)用最廣，其優(yōu)點(diǎn)為標(biāo)記的試劑無放射性危害且比較穩(wěn)定，但ELISA法易受酶純度和外界環(huán)境影響[4-5]。CICA標(biāo)志物為膠體金，利用層析技術(shù)來檢測(cè)抗原或抗體，優(yōu)點(diǎn)是不需儀器，操作快速、簡(jiǎn)便，有助于減少醫(yī)源性HBV感染，主要用于急診患者創(chuàng)傷性操作前快速過篩檢測(cè)[9]。

近年來發(fā)展起來的TRFIA是稀土離子標(biāo)記抗原或抗體、核酸探針和細(xì)胞等為特征的靈敏度遠(yuǎn)超過放射性同位素的檢測(cè)技術(shù)，且具有標(biāo)記物制備簡(jiǎn)便、無放射性污染、存儲(chǔ)時(shí)間長(zhǎng)、操作流程短、不受樣品自然熒光干擾、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬、檢測(cè)重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)方法，特點(diǎn)是能檢測(cè)低水平的HBV標(biāo)志物，在臨床中值得推廣[10]。富宏然[11]報(bào)道TRFIA法檢測(cè)的特異性、敏感性均比ELISA法高。