韓錦艷 許靜怡 張翔 周穎星 陳超翔 顏曉梅

摘 要 線粒體是真核細(xì)胞能量代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控中樞，雖然各種靈敏、特異的線粒體熒光標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于線粒體研究，但仍缺乏單線粒體水平的熒光染色性能評(píng)估方法。基于超高靈敏流式檢測(cè)技術(shù)（High sensitivity flow cytometry， HSFCM）能對(duì)單個(gè)線粒體進(jìn)行高靈敏、高通量、多參數(shù)定量分析的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，本研究發(fā)展了一種單線粒體水平的熒光標(biāo)記高通量評(píng)估方法。將攜帶靶向線粒體綠色熒光蛋白基因的pAcGFP1-Mito質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人宮頸癌HeLa細(xì)胞中，用G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，分別從瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中提取線粒體。此外，從未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的正常HeLa細(xì)胞中提取線粒體，分別進(jìn)行MitoTracker Green標(biāo)記以及SYTO 62線粒體DNA染色，應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室自行研制的超高靈敏流式檢測(cè)裝置在單線粒體水平對(duì)這4種線粒體標(biāo)記方法的熒光亮度、標(biāo)記效率和穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中單個(gè)線粒體的綠色熒光蛋白（GFP）熒光亮度為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的17.7倍，比MitoTracker Green標(biāo)記的線粒體亮度高約兩個(gè)數(shù)量級(jí)，且標(biāo)記穩(wěn)定性好。本研究為線粒體標(biāo)記方法的選擇提供了一種先進(jìn)的分析方法。

關(guān)鍵詞 線粒體；超高靈敏流式檢測(cè)技術(shù)；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；染料標(biāo)記