孫盛明　蘇艷莉　張武肖　戈賢平*　朱　健

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，無(wú)錫214081；

2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無(wú)錫漁業(yè)學(xué)院，無(wú)錫214081)

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飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、肝臟抗氧化指標(biāo)、腸道菌群結(jié)構(gòu)和抗病力的影響

孫盛明1蘇艷莉2張武肖2戈賢平1*朱健1

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，無(wú)錫214081；

2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無(wú)錫漁業(yè)學(xué)院，無(wú)錫214081)

摘要：本試驗(yàn)旨在研究飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、肝臟抗氧化指標(biāo)、腸道菌群結(jié)構(gòu)和抗病力的影響。選取初始體重為(1.81±0.01) g的團(tuán)頭魴幼魚(yú)360尾，隨機(jī)分為4組(每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾)，分別飼喂添加0(T0組，作為對(duì)照組)、2×107(T1組)、2×108(T2組)、2×109 CFU/g枯草芽孢桿菌(T3組)的等氮等脂飼料。試驗(yàn)期為8周。結(jié)果表明：1)與對(duì)照組相比，T1組和T2組團(tuán)頭魴幼魚(yú)的增重率、特定生長(zhǎng)率顯著升高(P<0.05)，且T1組的飼料系數(shù)顯著降低(P<0.05)。2)與對(duì)照組相比，T1組團(tuán)頭魴幼魚(yú)的肝臟抗氧化酶(超氧化歧化酶、過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶)活性顯著升高(P<0.05)，同時(shí)該組肝臟丙二醛含量顯著降低(P<0.05)。3)各組全魚(yú)水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。4)變性梯度凝膠電泳(DGGE)圖譜顯示攝食不同添加量枯草芽孢桿菌飼料的團(tuán)頭魴幼魚(yú)的腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。5)采用嗜水氣單胞菌對(duì)魚(yú)體進(jìn)行攻毒，各組96 h后的累積死亡率未產(chǎn)生顯著差異(P>0.05)，但T1組和T2組的累積死亡率低于對(duì)照組和T3組。由此可見(jiàn)，飼料中添加2×107 CFU/g的枯草芽孢桿菌能夠提高團(tuán)頭魴幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能、抗氧化能力，并改變腸道菌群結(jié)構(gòu)，但對(duì)其體成分和抗病力沒(méi)有顯著影響。

關(guān)鍵詞：團(tuán)頭魴；枯草芽孢桿菌；生長(zhǎng)；抗氧化能力；腸道菌群結(jié)構(gòu)

隨著高密度集約化養(yǎng)殖快速發(fā)展，養(yǎng)殖水環(huán)境日益惡化，從而導(dǎo)致養(yǎng)殖動(dòng)物的疾病暴發(fā)甚至大規(guī)模死亡。鑒于傳統(tǒng)的抗菌藥物具有在動(dòng)物體內(nèi)殘留、引起病原菌的耐藥性等缺點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者紛紛致力于各種抗菌藥物替代品的研究，故此，益生菌作為抗生素時(shí)代之后的一種新型飼料添加劑得到廣泛關(guān)注并成為研究熱點(diǎn)[1-2]。在養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)上應(yīng)用的益生菌是指添加到飼料或應(yīng)用于養(yǎng)殖水體中在一定程度上改善養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的水環(huán)境或腸道內(nèi)微生物平衡，從而對(duì)寄主產(chǎn)生包括刺激免疫、改善胃腸道形態(tài)、促進(jìn)生長(zhǎng)和飼料利用、提高魚(yú)肉品質(zhì)等有利影響的微生物細(xì)胞[3]。與其他益生菌相比，枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)具有穩(wěn)定性好、抗性強(qiáng)、耐高溫、耐酸堿和產(chǎn)酶豐富等優(yōu)勢(shì)。已有研究表明，飼料中添加枯草芽孢桿菌不僅能促進(jìn)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)，提高消化酶活性和非特異性免疫力，而且還能夠改善其腸道菌群結(jié)構(gòu)[4-10]。

團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)，隸屬于硬骨魚(yú)綱(Osteichthyes)，鯉形目(Cypriniformes)，鯉科(Cyprinidae)，鳊亞科(Abramidinae)，魴屬(Megalobrama)，其肉質(zhì)鮮美、生長(zhǎng)快、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，為我國(guó)目前主要養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)之一[11-12]。隨著集約化養(yǎng)殖模式的擴(kuò)大和推廣，因高密度養(yǎng)殖、投飼頻率增加以及水體污染等問(wèn)題導(dǎo)致團(tuán)頭魴的病害和重大疫病頻發(fā)，而營(yíng)養(yǎng)素是影響水生動(dòng)物抗病力最重要且最易于調(diào)控的因子之一，但有關(guān)枯草芽孢桿菌在團(tuán)頭魴幼魚(yú)飼料中的應(yīng)用研究鮮有報(bào)道。本研究旨在探討飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、肝臟抗氧化指標(biāo)、腸道菌群結(jié)構(gòu)和抗病力的影響，為枯草芽孢桿菌在團(tuán)頭魴養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1枯草芽孢桿菌制劑

試驗(yàn)用枯草芽孢桿菌制劑為枯草芽孢桿菌B115菌株，由浙江省淡水水產(chǎn)研究所魚(yú)病室提供，經(jīng)30 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)后制成含不同濃度枯草芽孢桿菌的菌液，使用前用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定制劑中細(xì)菌數(shù)量。

1.2試驗(yàn)飼料

以魚(yú)粉、豆粕、菜籽粕、棉籽粕和小麥粉等為主要原料配制基礎(chǔ)飼料，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。用含不同濃度枯草芽孢桿菌的菌液替代基礎(chǔ)飼料中的空白菌液，配制3種試驗(yàn)飼料。基礎(chǔ)飼料中枯草芽孢桿菌的濃度為0(T0組，作為對(duì)照組)，3種試驗(yàn)飼料中枯草芽孢桿菌的濃度分別為2×107(T1組)、2×108(T2組)、2×109CFU/g(T3組)。飼料原料經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)60目孔徑分篩，按表1配比混合均勻，少量的組分采用逐級(jí)擴(kuò)大法混合，加入枯草芽孢桿菌菌液，再次充分混勻后，用SLP-45型制粒機(jī)(中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院漁業(yè)機(jī)械儀器研究所研制)制成粒徑為2.0 mm的沉性顆粒飼料，50 ℃烘干后于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用團(tuán)頭魴幼魚(yú)由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心苗種基地提供，試驗(yàn)魚(yú)被放入有溫控系統(tǒng)的循環(huán)流水養(yǎng)殖圓形桶(規(guī)格為直徑820 mm，高700 mm)內(nèi)養(yǎng)殖。選取健康、初始均重為(1.81±0.01) g的團(tuán)頭魴幼魚(yú)360尾，隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚(yú)。試驗(yàn)前2周使用不含枯草芽孢桿菌的對(duì)照組飼料進(jìn)行馴化，待團(tuán)頭魴幼魚(yú)表現(xiàn)出主動(dòng)搶食為止，隨后開(kāi)始以組為單位隨機(jī)投喂不同枯草芽孢桿菌添加量的試驗(yàn)飼料。每天投喂4次，分別于08:00—8:30、11:00—11:30、14:00—14:30、17:00—17:30進(jìn)行投喂，達(dá)飽食水平，日投喂量為魚(yú)體重的2%～4%，并根據(jù)攝食和生長(zhǎng)情況作適當(dāng)調(diào)整。試驗(yàn)期為8周，8周后對(duì)各組試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行稱(chēng)重及采樣。養(yǎng)殖期間水溫為26～30 ℃，pH為7.0～8.0，溶氧濃度大于5 mg/L，氨氮濃度小于0.4 mg/L，亞硝酸鹽氮濃度小于0.06 mg/L。

表1　基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供The vitamin premix provided the following per kg of the diet：VA 900 000 IU，VD 250 000 IU，VE 4 500 mg，VC 5 000 mg，VK3220 mg，VB1320 mg，VB21 090 mg，VB65 000 mg，VB12116 mg，生物素 biotin 50 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 1 000 mg，葉酸 folic acid 165 mg，膽堿 choline 60 000 mg，煙酸nicotinic acid 2 500 mg。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供The mineral premix provided the following per kg of the diet：CuSO4·5H2O 2.5 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 28 g，ZnSO4·7H2O 22 g，MnSO4·4H2O 9 g，Na2SeO30.045 g，KI 0.026 g，CoCl2·6H2O 0.1 g。

1.4樣品采集和測(cè)定方法

1.4.1樣品采集與制備

試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h后，統(tǒng)計(jì)每組存活尾數(shù)，養(yǎng)殖魚(yú)全部稱(chēng)量體重和測(cè)量體長(zhǎng)。每組隨機(jī)取3尾魚(yú)立即剖開(kāi)腹部，剝離出肝臟并稱(chēng)重，將剝離出的肝臟置于離心管內(nèi)于-80 ℃超低溫冰箱中保存，用于測(cè)定丙二醛(MDA)含量以及超氧化歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性；分離出腸道置于無(wú)菌離心管中，并轉(zhuǎn)入-80 ℃超低溫冰箱中保存，用于測(cè)定腸道菌群結(jié)構(gòu)。每組取3尾魚(yú)進(jìn)行全魚(yú)營(yíng)養(yǎng)成分分析。

1.4.2肝臟抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

肝臟中MDA含量以及SOD、CAT和GSH-Px活性均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測(cè)定，具體的測(cè)定方法按照試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行操作，肝臟中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法。

1.4.3全魚(yú)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定

采用常壓干燥法在105 ℃的烘箱中烘至恒重來(lái)計(jì)算干物質(zhì)含量；采用凱氏定氮法(GB/T 6432—1994)測(cè)定粗蛋白質(zhì)含量；采用索氏抽提法(GB/T 6432—1994)測(cè)定粗脂肪含量；采用560 ℃灼燒法(GB/T 6438—1992)測(cè)定粗灰分含量。

1.4.4腸道菌群結(jié)構(gòu)的測(cè)定

腸道菌群通過(guò)變性梯度凝膠電泳(DGGE)進(jìn)行分離及后續(xù)克隆測(cè)序。采用帶GC夾細(xì)菌通用引物518R和341F[13]進(jìn)行細(xì)菌基因組DNA的擴(kuò)增，擴(kuò)增片段為細(xì)菌的16S rDNA的V3可變區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。使用大連寶生物工程公司的膠回收純化試劑盒(KAPA 2G Robust PCR Kit)從1%瓊脂糖凝膠中回收純化PCR產(chǎn)物，按試劑盒中的使用說(shuō)明進(jìn)行操作。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)DGGE進(jìn)行分離，采用的凝膠變性梯度為35%～55%，聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%(化學(xué)變性劑為100%尿素7 mol/L和40%的丙烯酰胺)，在1×TAE緩沖液中150 V、60 ℃下電泳5 h，電泳完畢后采用銀染的方法進(jìn)行染色，銀染結(jié)束后利用凝膠成像儀觀察并記錄結(jié)果[14]。

1.4.5生長(zhǎng)性能的測(cè)定

主要生長(zhǎng)性能指標(biāo)用以下公式求得：

增重率(WGR，%)=100×(終末均重-

初始均重)/初始均重；

特定生長(zhǎng)率(SGR，%/d)=100×(ln終末均重-

ln初始均重)/養(yǎng)殖天數(shù)；

飼料系數(shù)(FCR)=攝入飼料干重/

(終末體重-初始體重)；

存活率(SR，%)=100×終末尾數(shù)/初始尾數(shù)。

1.5攻毒試驗(yàn)

采樣結(jié)束后，繼續(xù)投喂各組剩下的團(tuán)頭魴，穩(wěn)定1周后，進(jìn)行嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)的攻毒試驗(yàn)。攻毒試驗(yàn)期間停止投喂飼料。攻毒試驗(yàn)前以不同濃度梯度的嗜水氣單胞菌菌液做預(yù)試驗(yàn)，依據(jù)預(yù)試驗(yàn)篩選出的半致死濃度(LD50)進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，按照50 g體重腹腔注射0.5 mL生理鹽水懸浮的嗜水氣單胞菌(濃度為5×107CFU/mL)，注射96 h后統(tǒng)計(jì)各組死亡魚(yú)的數(shù)量。

1.6數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包中的單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，若差異顯著，再進(jìn)行Tukey’s多重比較，差異顯著水平為P<0.05，所有結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示。

2結(jié)果與分析

2.1生長(zhǎng)性能

由表2可知，T1組和T2組的終末體重、增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于不添加枯草芽孢桿菌的對(duì)照組(P<0.05)，且T1組的飼料系數(shù)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。然而，枯草芽孢桿菌添加量最高的T3組在增重率、特定生長(zhǎng)率方面均低于T1組(P<0.05)、T2組(P<0.05)以及對(duì)照組(P>0.05)，說(shuō)明飼料中過(guò)量添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。

2.2體成分

由表3可知，團(tuán)頭魴幼魚(yú)攝食添加不同劑量枯草芽孢桿菌的飼料與攝食不添加枯草芽孢桿菌的飼料相比，其全魚(yú)水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表2　飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無(wú)字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表3　飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)體成分的影響

2.3肝臟抗氧化指標(biāo)

由表4可知，T1組的SOD、CAT和GSH-Px活性均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，且T1組的MDA含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明飼料中添加適量的枯草芽孢桿菌能提高團(tuán)頭魴幼魚(yú)肝臟中抗氧化酶活性并降低MDA的積累。T2組和T3組與對(duì)照組相比，SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA含量均沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。

表4　飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

2.4腸道菌群結(jié)構(gòu)

由圖1可知，DGGE分離圖譜及聚類(lèi)分析相似性范圍為0.38～0.80，對(duì)照組與3個(gè)試驗(yàn)組(T1組、T2組和T3組)的相似性較低，表明攝食含枯草芽孢桿菌飼料的團(tuán)頭魴幼魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯變化。

圖1　各組團(tuán)頭魴幼魚(yú)腸道細(xì)菌的DGGE圖譜及聚類(lèi)分析

2.5攻毒試驗(yàn)

由表5可知，各組團(tuán)頭魴幼魚(yú)腹腔注射嗜水氣單胞菌96 h后的累積死亡率均在50%以上，對(duì)照組、T1組、T2組和T3組的累積死亡率分別為61.7%、51.7%、53.3%和58.3%，T1組和T2組的累積死亡率低于對(duì)照組和T3組，但組間沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。

表5　嗜水氣單胞菌攻毒后團(tuán)頭魴幼魚(yú)的累積死亡率

3討論

3.1飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

相關(guān)研究表明枯草芽孢桿菌對(duì)魚(yú)類(lèi)腸道菌群的結(jié)構(gòu)組成有重要的影響[15-17]，益生菌對(duì)仔魚(yú)健康穩(wěn)定的腸道菌群系的構(gòu)建有重要的意義。有研究指出，多種枯草芽孢桿菌菌株被添加至仔魚(yú)的飼料中均取得了良好的效果，枯草芽孢桿菌的添加對(duì)仔魚(yú)的生長(zhǎng)有良好的促進(jìn)作用[18-19]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加適量枯草芽孢桿菌能提高團(tuán)頭魴幼魚(yú)的增重率、特定生長(zhǎng)率并降低其飼料系數(shù)，說(shuō)明飼料中添加適量的枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，這與在羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus)[20-21]、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)[22]以及肉雞(Gusgallus)[23]上的研究結(jié)果相一致。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加過(guò)量枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，符合高權(quán)新等[17]對(duì)益生菌使用量的有關(guān)說(shuō)明，這主要有2個(gè)方面原因：一方面，芽孢桿菌產(chǎn)生過(guò)量的酶有可能抑制動(dòng)物體內(nèi)內(nèi)源酶的活性，降低內(nèi)源酶對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解；另一方面，飼料中過(guò)量添加枯草芽孢桿菌可導(dǎo)致魚(yú)體內(nèi)菌群比例失調(diào)，進(jìn)而影響其生長(zhǎng)性能。

3.2飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

SOD在團(tuán)頭魴乃至其他水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)中起著重要的作用[24]，魚(yú)體內(nèi)過(guò)多的超氧陰離子自由基的清除需要由抗氧化酶系統(tǒng)中的SOD、CAT等來(lái)完成，主要是通過(guò)SOD的歧化反應(yīng)把自由基轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫(H2O2)，然后通過(guò)CAT和GSH-Px把H2O2分解為對(duì)機(jī)體無(wú)害的水(H2O)，從而阻止了自由基積累對(duì)魚(yú)體的毒害[25-26]。本研究表明，飼料中添加2×107CFU/g枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)的抗氧化酶活性有顯著的提高作用，同時(shí)還能顯著降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的含量。

3.3飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同添加量的枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)腸道菌群結(jié)構(gòu)有一定的影響。DGGE圖譜中的條帶表示的是一個(gè)可能的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌類(lèi)群或可操作分類(lèi)單元(OTU)[27]，本研究中對(duì)照組的條帶數(shù)均值高于3個(gè)試驗(yàn)組，表明飼料中添加枯草芽孢桿菌降低了腸道菌群結(jié)構(gòu)的多樣性，故此聚類(lèi)分析圖中對(duì)照組與3個(gè)試驗(yàn)組的相似性較低，表明攝食含枯草芽孢桿菌飼料的團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯變化。

3.4飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)抗病力的影響

嗜水氣單胞菌是團(tuán)頭魴以及其他淡水魚(yú)類(lèi)的主要致病菌之一，本試驗(yàn)中給試驗(yàn)魚(yú)腹腔注射一定劑量的嗜水氣單胞菌，96 h后T1、T2組的累積死亡率低于對(duì)照組，而T3組的累積死亡率是最高的，該結(jié)果表明飼料中添加適量枯草芽孢桿菌對(duì)團(tuán)頭魴幼魚(yú)的抗病力有所提高，這與在條紋鱸[28]和尼羅羅非魚(yú)[29]上所得結(jié)果相一致。由前面得出的適量枯草芽孢桿菌的添加對(duì)魚(yú)體的抗氧化能力有促進(jìn)作用，并結(jié)合枯草芽孢桿菌的添加對(duì)魚(yú)類(lèi)腸道菌群結(jié)構(gòu)的改善，本試驗(yàn)推測(cè)飼料中添加適量的益生菌將提高腸道原有有益菌群的消化能力[30]，強(qiáng)化魚(yú)體的抗氧化系統(tǒng)，從而提高魚(yú)體的免疫力和抗病力。

4結(jié)論

① 飼料中添加適量枯草芽孢桿菌能夠提高團(tuán)頭魴幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能、抗氧化能力，并改變腸道菌群結(jié)構(gòu)。

② 團(tuán)頭魴幼魚(yú)飼料中枯草芽孢桿菌的適宜添加量為2×107CFU/g。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫云章,楊紅玲,馬如龍,等.斜帶石斑魚(yú)消化道乳酸菌在模擬胃腸道環(huán)境中的存活[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2010,17(1):128-135.

[2]曾東,王益平,倪學(xué)勤,等.鯉益生菌篩選及部分菌株對(duì)鯉前腸黏液的體外黏附作用[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2009,16(3):427-433.

[3]MERRIFIELD D L,DIMITROGLOU A,FOEY A,et al.The current status and future focus of probiotic and prebiotic applications for salmonids[J].Aquaculture,2010,302(1/2):1-18.

[4]江永明,付天璽,張麗,等.微生物制劑對(duì)奧尼羅非魚(yú)生長(zhǎng)及消化酶活性的影響[J].水生生物學(xué)報(bào),2011,35(6):998-1004.

[5]劉曉勇,張穎,齊茜,等.枯草芽孢桿菌對(duì)雜交鱘幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、消化酶活性及非特異性免疫的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2011,18(6):1315-1320.

[6]程遠(yuǎn),黃凱,黃秀蕓,等.飼料中添加枯草芽孢桿菌對(duì)吉富羅非魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、免疫力和抗氧化功能的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2014,26(6):1503-1512.

[7]殷海成,趙紅月,黃進(jìn),等.枯草芽孢桿菌對(duì)免疫和未免疫黃河鯉免疫功能和抗病力的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2013,25(7):1559-1567.

[8]ALY S M,AHMED Y A G,AHAREEB A A A,et al.Studies onBacillussubtilisandLactobacillusacidophilus,as potential probiotics,on the immune response and resistance of tilapia nilotica (Oreochromisniloticus) to challenge infections[J].Fish & Shellfish Immunology,2008,25(1/2):128-136.

[9]AI Q H,XU H G,MAI K S,et al.Effects of dietary supplementation ofBacillussubtilisand fructooligosaccharide on growth performance,survival,non-specific immune response and disease resistance of juvenile large yellow croaker,Larimichthyscrocea[J].Aquaculture,2011,317(1/2/3/4):155-161.

[10]SHEN W Y,FU L L,LI W F,et al.Effect of dietary supplementation withBacillussubtilison the growth,performance,immune response and antioxidant activities of the shrimp (Litopenaeusvannamei)[J].Aquaculture Research,2010,41(11):1691-1698.

[11]王為民.團(tuán)頭魴養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀[J].科學(xué)養(yǎng)魚(yú),2009(4):44-45.

[12]蔣陽(yáng)陽(yáng),李向飛,劉文斌,等.不同蛋白質(zhì)和脂肪水平對(duì)1齡團(tuán)頭魴生長(zhǎng)性能和體組成的影響[J].水生生物學(xué)報(bào),2012,36(5):826-836.

[13]李曉,李冰,董玉峰,等.精養(yǎng)團(tuán)頭魴池塘沉積物微生物群落的結(jié)構(gòu)特征及組成多樣性分析[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2014,28(2):218-227.

[14]孫盛明,朱健,戈賢平,等.零換水條件下養(yǎng)殖水體中碳氮比對(duì)生物絮團(tuán)形成及團(tuán)頭魴腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響[J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2015,27(3):948-955.

[15]AVELLA M A,OLIVOTTO I,SILVI S,et al.Effect of dietary probiotics on clownfish:a molecular approach to define how lactic acid bacteria modulate development in a marine fish[J].Regulatory,Integrative and Comparative Physiology,2010,298(2):R359-R371.

[16]SUZER C,?OBAN D,KAMACI H O,et al.Lactobacillusspp.bacteria as probiotics in gilthead sea bream (Sparusaurata,L.) larvae:effects on growth performance and digestive enzyme activities[J].Aquaculture,2008,280(1/2/3/4):140-145.

[17]高權(quán)新,施兆鴻,彭士明.益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究進(jìn)展[J].海洋漁業(yè),2013,35(3):364-372.

[18]FARAMARZI M,JAFARYAN H,FARAHI A,et al.The effects on growth and survival of probioticBacillusspp.fed to Persian sturgeon (Acipencerpersicus) larvae[J].Aquaculture,Aquarium,Conservation & Legislation International Journal of the Bioflux Society,2011,4(1):10-14.

[19]MANDIKI S,MILLA S,WANG N,et al.Effects of probiotic bacteria on growth parameters and immune defence in Eurasian perchPercafluviatilisL.larvae under intensive culture conditions[J].Aquaculture Research,2011,42(5):693-703.

[20]WANG Y B,LI J R,LIN J.Probiotics in aquaculture:challenges and outlook[J].Aquaculture,2008,281(1/2/3/4):1-4.

[21]HASSAAN M S,SOLTAN M A,GHONEMY M M R.Effect of synbiotics betweenBacilluslicheniformisand yeast extract on growth,hematological and biochemical indices of the Nile tilapia (Oreochromisniloticus)[J].The Egyptian Journal of Aquatic Research,2014,40(2):199-208.

[22]ZOKAEIFAR H,BALCZAR J L,SAAD C R,et al.Effects ofBacillussubtilison the growth performance,digestive enzymes,immune gene expression and disease resistance of white shrimp,Litopenaeusvannamei[J].Fish & Shellfish Immunology,2012,33(4):683-689.

[23]ZHANG Z F,CHO J H,KIM I H.Effects ofBacillussubtilisUBT-MO2 on growth performance,relative immune organ weight,gas concentration in excreta,and intestinal microbial shedding in broiler chickens[J].Livestock Science,2013,55(2/3):343-347.

[24]LIN Y H,SHIE Y Y,SHIAU S Y.Dietary copper requirements of juvenile grouper,Epinephelusmalabaricus[J].Aquaculture,2008,274(1):161-165.

[25]XIE J,LIU B,ZHOU Q L,et al.Effects of anthraquinone extract from rhubarbRheumofficinaleBail on the crowding stress response and growth of common carpCyprinuscarpiovar.Jian[J].Aquaculture,2008(1):5-11.

[26]FATTMAN C L,SCHAEFER L M,OURY T D.Extracellular superoxide dismutase in biology and medicine[J].Free Radical Biology and Medicine,2003,35(3):236-256.

[27]姚延丹,李谷,陶玲,等.復(fù)合人工濕地-池塘養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)細(xì)菌多樣性研究[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù),2011,34(7):50-55.

[28]LI P,DELBERT M,GATLIN III.Dietary brewers yeast and the prebiotic GrobioticTMAE influence growth performance,immune responses and resistance of hybrid striped bass (Moronechrysops×M.saxatilis) toStreptococcusiniaeinfection[J].Aquaculture,2004,231(1/2/3/4):445-456.

[29]ABDEL-TAWWAB M,ABDEL-RAHMAN A M,ISMAEL N E M.Evaluation of commercial live bakers’ yeast,Saccharomycescerevisiaeas a growth and immunity promoter for fry Nile tilapia,Oreochromisniloticus(L.) challenged in situ withAeromonashydrophila[J].Aquaculture,2008,280(1/2/3/4):185-189.

[30]TIMMERMAN H M,KONING C J M,MULDER L,et al.Monostrain,multistrain and multispecies probiotics—a comparison of functionality and efficacy[J].International Journal of Food Microbiology,2004,96(3):219-233.

(責(zé)任編輯菅景穎)

Effects of DietaryBacillussubtilison Growth Performance,Liver Antioxidant Ability, Intestinal Microflora Structure and Disease Resistance of Juvenile Blunt Snout Bream(Megalobramaamblycephala)

SUN Shengming1SU Yanli2ZHANG Wuxiao2GE Xianping1*ZHU Jian1

(1. Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization, Ministry of Agriculture, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences,Wuxi 214081, China; 2. Wuxi Fishery College, Nanjing Agricultural University, Wuxi 214081, China)

Abstract:This experiment was conducted to investigate the effects of dietary Bacillus subtilis (B. subtilis) on growth performance, liver antioxidant ability, intestinal microflora structure and disease resistance of juvenile blunt snout bream (Megalobrama amblycephala). Three hundred and sixty juvenile blunt snout bream with an average body weight of (1.81±0.01) g were randomly chosen and divided into 4 groups with 3 replicates per group and 30 fish per replicate. Four isonitrogenous and isolipidic diets were formulated with the B. subtilis supplemental level was 0 (T0 group, as control group), 2×107 (T1 group), 2×108 (T2 group), 2×109 CFU/g (T3 group), respectively, and those diets were randomly fed one of four groups for 8 weeks. The results showed as follows: 1) the weight gain rate (WGR) and specific growth rate (SGR) of T1 and T2 groups were significantly higher than those of control group (P<0.05), and the feed conversation ratio (FCR) of T1 group was significantly lower than that of control group (P<0.05). 2) Compared with the control group, the activities of liver antioxidant enzymes (superoxide dismutase, catalase and catalase) of T1 group were significantly increased (P<0.05), meanwhile, the liver malondialdehyde content in that group was significantly decreased (P<0.05). 3) No significant differences were observed in moisture, crude protein, crude lipid and ash contents of whole body among all groups (P>0.05). 4) The denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) image demonstrated that the intestinal microflora structure was changed when juvenile blunt snout bream fed diets supplemented with different levels of B. subtilis. 5) Following challenged by Aeromonas hydrophila on the 96 h, fish fed different experimental diets showed no significant differences in cumulative mortality, but the cumulative mortality in T1 and T2 groups was lower than that in control and T3 groups. It is concluded that adding 2×107 CFU/g B. subtilis to juvenile blunt snout bream diet can improve growth performance and antioxidant ability, and change the intestinal microflora structure, but cannot significantly affect the body composition and disease resistance.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(2)：507-514]

Key words:blunt snout bream (Megalobrama amblycephala); Bacillus subtilis; growth; antioxidant ability; intestinal microflora structure

*Corresponding author, professor, E-mail: gexp@ffrc.cn

中圖分類(lèi)號(hào)：S828

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)02-0507-08

作者簡(jiǎn)介：孫盛明(1983—)，男，山東萊州人，助理研究員，博士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料。E-mail: sunsm@ffrc.cn*通信作者：戈賢平，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail: gexp@ffrc.cn

基金項(xiàng)目：中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)資金(2015C06XK01)；江蘇省自然科學(xué)基金(SBK2015020058)；國(guó)家大宗淡水魚(yú)類(lèi)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系華東養(yǎng)殖崗位(CARS-46-14)；十二五國(guó)家科技支撐計(jì)劃長(zhǎng)江下游池塘高效生態(tài)養(yǎng)殖技術(shù)集成與示范(2012BAD25B07)

收稿日期：2015-07-24

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.02.024