王曉茹 ，白光輝(蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術學院，江蘇蘇州 5009；蘇州市立醫(yī)院)

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胃腸道間質瘤淋巴管及血管生成機制

王曉茹1，白光輝2(1蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術學院，江蘇蘇州 215009；2蘇州市立醫(yī)院)

摘要：目的探討胃腸道間質瘤(GIST)的淋巴管及血管生成機制。方法 收集70例GIST患者的腫瘤組織蠟塊，并收集30例胃癌患者的腫瘤組織蠟塊，通過免疫組化法觀察淋巴管密度及微血管密度(MVD)，并觀察淋巴生成及血管誘導相關因子血管內皮生長因子(VEGF-C)、果蠅同源異形盒蛋白1(PROX-1)、缺氧誘導因子1α(HIF-1α)、的表達。結果GIST的淋巴管及MVD計數均顯著低于胃癌組織(P<0.05)；胃間質瘤、小腸間質瘤及胃癌組織中VEGF-C、PROX-1、HIF-1α表達差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；HIF-1α低表達組的MVD明顯低于高表達組(P<0.05)。結論 間質來源GIST的淋巴管及微血管計數明顯少于上皮來源的胃癌，VEGF-C、HIF-1α表達可能與GIST微血管生成相關;VEGF-C可能與GIST淋巴管生成有關。

關鍵詞：胃腸道間質瘤；淋巴管；微血管

胃腸道間質瘤(GIST)起源于胃腸道間葉組織，占胃腸道惡性腫瘤的1%～3%，多發(fā)病于中老年患者[1，2]。GITST患者20%～30%屬于惡性，且11%～47%首次就診時已出現轉移[3，4]。GIST常見轉移方式為血行轉移，淋巴結轉移僅占小部分，且手術不推薦行淋巴結清掃，因此對于GIST的淋巴結轉移機制研究至關重要[5]。淋巴管是淋巴結轉移通道，其生成受多種因素控制，但淋巴管特異分子標志物有限[6]。胃癌的主要轉移途徑為淋巴轉移，盡管與GIST組織來源不同，但通過對相同發(fā)病部位的胃癌進行對比研究有重要價值[7，8]。淋巴生成及血管誘導相關因子血管內皮生長因子(VEGF-C)、果蠅同源異形盒蛋白1(PROX-1)、缺氧誘導因子1α(HIF-1α)在GIST中淋巴管及血管的生成中發(fā)揮作用，但相關文獻報道較少。2010年1月～2014年12月,我們對GIST的淋巴管及血管生成機制進行了研究?，F將結果報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料GIST患者70例，經手術切除并經術后病理組織學及免疫組織學確診，制備石蠟包塊，其中胃間質瘤患者38例，小腸間質瘤患者32例。納入標準：①病理組織學符合GIST診斷；②免疫組織化學檢查CD117為陽性；③原發(fā)性GIST患者，無遠處轉移及腹膜種植，術前未接受甲磺酸伊馬替尼輔助化療。70例患者中男42例、女28例，年齡(58.52±9.06)歲，患者均無淋巴結轉移。另選取同期我院胃癌患者術后組織30例份，經術后病理確診，制備石蠟包塊，腫瘤組織均為上皮來源，排除間質瘤、肉瘤等非上皮源性腫瘤。30例胃癌患者中男21例、女9例，年齡(53.28±8.22)歲，淋巴結轉移17例。

1.2淋巴管及微血管密度(MVD)計數采用免疫組化法。將選取的石蠟標本進行連續(xù)切片，多聚賴氨酸浸泡后37 ℃烤箱烘干備用。脫蠟水化后1 mmol/L/pH8.0檸檬酸溶液中抗原修復，3%H2O2阻斷，依次滴加一抗、二抗，PBS緩沖液漂洗，切片染色觀察。PBS取代一抗作為陰性對照，已知陽性切片作為陽性對照，保證顯色反應的單一性及可比性。參照相關文獻，由兩位經驗豐富病理科醫(yī)師雙盲閱片，MVD計數依據CD31染色結果，于毛細血管最多處評估MVD，先用低倍鏡尋找微血管密集區(qū)域，然后用高倍鏡觀察計數，觀察3個視野，微血管顯色為單個或一簇棕色內皮細胞，大血管、纖維化、炎癥壞死的微血管不計數；淋巴管計數依據D2-40染色結果，為裂縫樣或多開口薄壁管腔，計數方法同微血管計數[9]。

1.3淋巴生成及血管誘導相關因子VEGF-C、PROX-1、HIF-1α蛋白表達檢測將各組織通過石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，備用。通過免疫組化超敏法，使用二甲苯脫蠟并水化，雙氧水浸泡10 min清除過氧化物酶活性并沖洗，使用EDTA液進行抗原修復，一次添加一抗、二抗，沖洗后37 ℃恒溫孵育，DAB染色，鏡下觀察。相關抗體檢測采用分級判定，無陽性細胞及陽性細胞<5%為-，陽性細胞數5%～20%為+，陽性細胞數20%～50%為++，陽性細胞數>50%為+++。-、+、++定為低表達，+++定為高表達。

2結果

2.1淋巴管及MVD計數D2-40染色陽性的淋巴管形狀不規(guī)則，內皮細胞胞質及胞膜呈棕褐色，在GIST及胃癌組織中均可看到D2-40陽性細胞，在血管及平滑肌細胞中未見D2-40陽性細胞；CD31染色陽性多分布在腫瘤組織內部及邊緣的血管內皮細胞，胞質及胞膜呈棕褐色。

GIST組織內少有瘤內淋巴管，胃癌組織瘤內淋巴管難以界定，不予計數。胃間質瘤及小腸間質瘤瘤內淋巴管計數不存在統(tǒng)計學差異(t=0.425，P=0.336)；胃間質瘤與小腸內間質瘤瘤旁淋巴管計數不存在統(tǒng)計學差異(t=1.132，P=0.131)，兩者分別與胃癌組織比較，瘤旁淋巴計數明顯低于胃癌組織(P<0.05)；胃間質瘤與小腸內間質瘤MVD計數不存在統(tǒng)計學差異(t=0.036，P=0.486)，兩者分別與胃癌組織比較，MVD計數明顯低于胃癌組織(P<0.05)。

表1　　　　GIST和胃癌患者淋巴管及MVD計數

注：與胃間質瘤比較，△P<0.05；與小腸間質瘤比較，○P<0.05。

2.2相關抗體VEGF-C、PROX-1及HIF-1α蛋白在GIST及胃癌組織中表達見表2。胃間質瘤、小腸間質瘤及胃癌組織中各相關抗體表達均無統(tǒng)計學差異(P均>0.05)。

2.3GIST患者淋巴管及MVD計數與相關抗體表達的關系GIST患者組織中VEGF-C與淋巴管密度及MVD計數顯著相關(P<0.05)，HIF-1α與MVD計數顯著相關(P<0.05)。見表3。

3討論

GIST來源于間質，僅有一半能被放射學或內鏡檢查所發(fā)現，無痛及生長緩慢是其主要特點，但臨床中70%的患者可出現臨床癥狀。淋巴管是腫瘤淋巴轉移的主要通道，淋巴管由靜脈發(fā)育生成，受PROX-1調節(jié)，淋巴系統(tǒng)出現，靜脈內皮細胞分化為淋巴內皮細胞。VEGF-C主要表達于心臟、小腸、卵巢等，在淋巴管豐富的腸系膜中高表達，其可與淋巴內皮細胞受體VEGFR-3結合，刺激淋巴管生長[10，11]。淋巴管密度主要通過檢測D2-40表達體現，D2-40是抗podoplanin抗體，可反映淋巴管內皮細胞的唾液糖蛋白抗原決定簇，被認為是淋巴管內皮細胞的特異標志物[12]。

表2　　　　淋巴生成及血管誘導相關因子在GIST

表3　　　　GIST患者淋巴管及MVD計數與相關抗體

本研究發(fā)現淋巴管染色特異性較高，血管及平滑肌細胞中未見D2-40陽性細胞表達；胃間質瘤與小腸間質瘤的瘤內淋巴管及瘤旁淋巴管計數均不存在統(tǒng)計學差異，胃癌組織由于瘤內淋巴管無法界定未進行計數，在瘤旁淋巴管比較中，GIST淋巴管計數明顯低于胃癌組織，可能是由于胃癌更易發(fā)生淋巴轉移的原因。在胃間質瘤、小腸間質瘤及胃癌組織中，相關抗體VEGF-C及PROX-1的表達均無統(tǒng)計學差異，兩種抗體表達在兩類腫瘤中無差別。

CD31廣泛分布于內皮細胞上，是內皮依賴性微血管存在標志物[13]，可反映MVD。HIF-1α是確定HIF活性的標志，在許多惡性腫瘤組織中高表達，調節(jié)血管生成及腫瘤發(fā)展，腫瘤的過度生長常伴隨缺血缺氧，缺氧則可激活HIF表達[14]。本研究中發(fā)現GIST的MVD計數明顯低于胃癌組織，這可能與胃癌發(fā)生部位特點及GIST生長較緩慢相關。兩種間質瘤及胃癌組織間HIF-1α表達不存在統(tǒng)計學差異，兩類腫瘤微血管生成對于HIF-1α依賴性并不存在差異。HIF-1α表達與MVD計數顯著相關，說明GIST組織內微血管的生成與HIF-1α的表達相關，但具體調控機制還有待進一步研究。

綜上所述，GIST與胃癌由于組織來源不同，淋巴管及MVD的分布存在差異，VEGF-C、HIF-1α表達可能與GIST微血管生成相關，GIST淋巴管生成機制可能與VEGF-C有關。

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(收稿日期:2015-11-06)

中圖分類號：R735

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)13-0040-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.015

基金項目：江蘇省衛(wèi)生職業(yè)技術教育研究項目(J201102)。