尹茂山，許淑紅，王 燕，孫曉慧，梁 辰，李 杰，牟艷玲

（1.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，山東濟(jì)南 250062；2.濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東濟(jì)南 250062；3.中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇南京 211198）

2型糖尿病大鼠主動(dòng)脈Wnt/β-catenin信號(hào)通路的變化及SIRT1的調(diào)節(jié)作用

尹茂山1，2，許淑紅3，王 燕1，孫曉慧1，2，梁 辰1，2，李 杰1，牟艷玲1

（1.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，山東濟(jì)南 250062；2.濟(jì)南大學(xué)山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東濟(jì)南 250062；3.中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇南京 211198）

目的 檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白及沉默信息調(diào)節(jié)因子（SIRT1）在2型糖尿病大鼠主動(dòng)脈中的表達(dá)變化，探究SIRT1對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用，明確二者在糖尿病主動(dòng)脈病變發(fā)生發(fā)展中的作用。方法 高脂飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型，實(shí)驗(yàn)將大鼠分為空白對(duì)照組、糖尿病2、4、8和12周模型組，血清檢測(cè)空腹血糖（FBG），總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C），空腹胰島素（FINS），HE染色法觀察主動(dòng)脈病理結(jié)構(gòu)變化，RT-PCR法和Western blot法檢測(cè)主動(dòng)脈Wnt2、β-catenin、TCF4、SIRT1和sFRP2等相關(guān)蛋白基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)變化。結(jié)果 與正常組比較，2型糖尿病大鼠TC、TG、LDL-C水平明顯升高，HDL-C水平明顯降低，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，糖尿病大鼠各時(shí)間點(diǎn)模型組與2周模型組相比較，TC、TG、LDL-C水平升高越來越明顯，HDL-C水平降低更明顯，差異均具有顯著性（P＜0.01）；顯微鏡下糖尿病組大鼠主動(dòng)脈可見不同程度局灶性內(nèi)皮細(xì)胞空泡變性、甚至壞死。糖尿病組大鼠相對(duì)于正常對(duì)照組主動(dòng)脈Wnt2和β-catenin的表達(dá)在2周及4周明顯增加（P＜0.01），4周后維持在較高水平；而TCF4、SIRT1的表達(dá)與正常對(duì)照組相比表現(xiàn)為持續(xù)的增加（P＜0.01）；sFRP2的表達(dá)在持續(xù)的降低（P＜0.01）。結(jié)論 2型糖尿病大鼠主動(dòng)脈病變發(fā)生發(fā)展過程中，SIRT1通過調(diào)節(jié)sFRP2的表達(dá)來調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，參與糖尿病主動(dòng)脈損傷的發(fā)生發(fā)展過程，進(jìn)一步研究其在糖尿病主動(dòng)脈損傷中的作用機(jī)制可能為糖尿病主動(dòng)脈病找到新的治療靶點(diǎn)。

Wnt2；β-catenin；TCF4；SIRT1；sFRP2；2型糖尿??；主動(dòng)脈損傷

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）的發(fā)病率和死亡率呈逐年上升趨勢(shì)，心血管并發(fā)癥是DM患者死亡的主要原因。Wnt/β-catenin信號(hào)通路作為一條保守的信號(hào)傳導(dǎo)通路廣泛存在于各生物體中，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、分化等細(xì)胞發(fā)育過程。近年來研究表明，Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和分化［1］，在心血管疾病中起重要作用［2］。此外，Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異?？赡芤鸫x綜合征［3］。沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information-regulator1，SIRT1）為哺乳動(dòng)物Sirtuins家族成員之一，是一種依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）的去乙?；?，成人組織中廣泛表達(dá)。研究顯示［4－5］，SIRT1通過去乙?；嚓P(guān)因子調(diào)節(jié)作用Wnt/β-catenin在內(nèi)的多個(gè)細(xì)胞信號(hào)通路，參與血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用，但在糖尿病主動(dòng)脈病變過程中的作用仍不清楚。本文通過檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白及SIRT1在2型糖尿病大鼠主動(dòng)脈中的表達(dá)變化，探討SIRT1對(duì)該信號(hào)通路在DM主動(dòng)脈中的表達(dá)調(diào)節(jié)作用，為糖尿病主動(dòng)脈病變的治療提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型建立 健康♂SD大鼠50只，SPF級(jí)，體質(zhì)量150～180 g，購(gòu)自山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重均衡的原則隨機(jī)分為正常對(duì)照組（A）10只，糖尿病模型組（B）40只。A組始終飼以普通飲食，B組采用高脂流質(zhì)（豬油30％，膽固醇2.5％，脫氧膽酸鈉1％，常規(guī)飼料66.5％）灌胃，兩組動(dòng)物均自由飲水。5周后，B組大鼠禁食12 h，頸靜脈竇取血檢測(cè)血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）等生化指標(biāo)，確定形成高脂模型，誘導(dǎo)出大鼠胰島素抵抗（insulin resistance，IR）狀態(tài)，聯(lián)合鏈脲菌素造模。B組大鼠一次性腹腔注射1％鏈脲菌素（30 mg·kg－1，pH＝4.5檸檬酸－檸檬酸三鈉緩沖液，4℃配制，現(xiàn)配現(xiàn)用），A組正常大鼠注射同體積檸檬酸－檸檬酸三鈉緩沖液。造模后72 h尾靜脈采血檢測(cè)空腹血糖值（fasting blood glu-cose，F(xiàn)BG），以FBG≥11.1 mmol·L－1，胰島素敏感指數(shù)降低，認(rèn)為糖尿病大鼠模型成功。B組造模成功大鼠隨機(jī)分為2、4、8和12周模型組，繼續(xù)高脂飲食灌胃。A組繼續(xù)以普通飼料喂養(yǎng)4周。

1.2 材料與試劑 鏈脲佐菌素、戊巴比妥鈉（美國(guó)Sigma公司）；血糖試紙（強(qiáng)生中國(guó)醫(yī)療器材有限公司）；TG試劑盒、TC試劑盒、低密度脂蛋白－膽固醇（low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）試劑盒、高密度脂蛋白－膽固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）試劑盒（四川邁克生物科技股份有限公司）；胰島素（insulin，INS）試劑盒（Lengton生物上海公司）；生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG/小鼠IgG二抗試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；Western blot一抗、二抗去除液、Western blot細(xì)胞裂解液、Western blot轉(zhuǎn)膜液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）、SDS-PAGE凝膠配制試劑盒和SDS-PAGE電泳液均購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；ProS-ieve Color ptrotein makers（美國(guó)Lonza Rockland公司）；PVDF膜（0.45 μm；美國(guó)SERVA公司）；增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑（美國(guó)Millipore公司）；所用單克隆抗體為：Wnt2（美國(guó)Epitomics公司），β-catenin（美國(guó)Cell Signaling Technology公司），TCF4（英國(guó)Ab-cam公司），sFRP2（美國(guó)Cell Signaling Technology公司），β-actin（美國(guó)Ambobio公司）；PCR引物（中國(guó)BioSune）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)ThermoFisher公司）。

1.3 空腹血糖及胰島素檢測(cè) 高脂灌胃5周后，大鼠一次性腹腔注射鏈脲菌素后72 h，禁食12 h，頸靜脈竇取血，離心分離血清，檢測(cè)空腹血糖及胰島素（fasting insulin，F(xiàn)INS）水平，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitive index，ISI），檢測(cè)胰島素敏感性變化，公式為ISI＝ln［1/（FINS×FBG）］。

1.4 標(biāo)本收集 造模結(jié)束后，各模型組大鼠高脂灌胃，分別喂養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的2、4、8和12周。大鼠麻醉，仰位固定，開胸，腹主動(dòng)脈取血，5 ml/只，3 000 r ·min－1離心10 min，取上清，分裝，－20℃保存待測(cè)。生化儀檢測(cè)TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。迅速取出主動(dòng)脈，用預(yù)冷生理鹽水洗凈，濾紙吸干，剔除血管周圍脂肪組織，分為兩部分：一部分用4％多聚甲醛固定，經(jīng)脫水、透明、包埋，制成主動(dòng)脈組織石蠟塊；另一部分置于EP管，于液氮中保存待用。

1.5 HE染色 取正常對(duì)照組及各時(shí)間點(diǎn)模型組主動(dòng)脈組織，制作石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水，蘇木精染色10 min，流水稍洗，體積分?jǐn)?shù)1％的鹽酸酒精分化，流水沖洗數(shù)分鐘，伊紅染色5 min，流水稍洗，梯度酒精常規(guī)脫水，中性樹膠封片。Eclipse TE 2000-S免疫熒光顯微鏡拍照（日本Nikon），觀察主動(dòng)脈組織病理結(jié)構(gòu)的改變。

1.6 Western blot 取正常組及各模型組大鼠主動(dòng)脈組織，制備組織勻漿，每20 mg組織加入100～200 μL含1 mmol·L－1PMSF的裂解液，4℃下14 000×g離心10 min，取勻漿上清，用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白濃度。20～50 μg總蛋白上樣量以濃度為8％的凝膠電泳進(jìn)行分離。冰浴下恒流（300 mA）濕法轉(zhuǎn)膜2 h，體積分?jǐn)?shù)5％的脫脂奶粉封閉1 h后與相應(yīng)一抗4℃共孵育過夜。TBS-T洗液洗滌，與辣根過氧化物標(biāo)記的二抗共孵育，用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行顯色，并利用灰度分析軟件定量分析。

1.7 逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR） 取各組主動(dòng)脈組織100～150 mg，均勻粉碎后按TRIzol提取程序（說明書）提取組織總RNA；按AMV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄后，4℃保存。各目的基因的擴(kuò)增引物序列，如Tab 1所示；擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性3 min，然后94℃變性30 s，55℃變性30 s，72℃延伸60 s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5 min，快速冷卻至4℃保存。2％瓊脂糖凝膠電泳后，凝膠成像儀觀察，用BandScan 5.0軟件測(cè)定條帶灰度值，將mRNA、分別與β-actin mRNA灰度值的比值作為觀察指標(biāo)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)以±s表示，組間差異比較采用方差分析及t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

Tab 1 Primers used for qRT-PCR

Tab 2 The general characteristics of rats after DM model established（±s）

Tab 2 The general characteristics of rats after DM model established（±s）

ΔBW＝Body Weight（after 2 wks）-Body Weight（before）；*P＜0.05，**P＜0.01 vs control

Group n ΔBW/g FBG/mmol·L－1 FINS/mU·L－1ISI Control 10 29.360±2.336 5.776±0.267 19.712±0.836 －4.735±0.465 DM Model 36 －3.552±0.426** 32.150±0.997** 29.545±1.342* －6.856±0.761**

Tab 3 Changes of biochemical parameters in DM rats（±s）

Tab 3 Changes of biochemical parameters in DM rats（±s）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control；△P＜0.05 vs 2 week DM

Group n FBG/mmol·L－1 TG/mmol·L－1 TC/mmol·L－1 HDL-C/mmol·L－1 LDL-C/mmol·L －1 .225 0.638±0.077 0.117±0.021 2 week DM 9 30.612±4.375** 1.211±0.076** 2.323±0.167* 0.555±0.109* 0.178±0.029**4 week DM 9 34.078±6.715**△ 1.299±0.098** 2.776±0.096**△ 0.506±0.023* 0.221±0.016**△8 week DM 9 36.676±6.112**△ 1.374±0.097** 2.998±0.116**△ 0.499±0.036* 0.240±0.009**△12 week DM 9 36.118±5.733**△ 1.394±0.108** 3.332±0.109**△ 0.421±0.034*△ 0.249±0.015 Control 10 5.776±0.2671 1.107±0.023 2.151±0**△

Fig 1 HE staining of aorta of DM rats（×400）

2.1 大鼠模型建立情況 實(shí)驗(yàn)期間，正常對(duì)照組大鼠狀態(tài)良好、健壯、皮毛油亮有光澤，自主活動(dòng)正常，對(duì)外界反應(yīng)靈敏，無死亡。與正常對(duì)照組大鼠相比較，DM組大鼠逐漸消瘦，精神萎靡，皮毛無光澤，腥臊臭味加重等；且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，多飲、多食、多尿和消瘦表現(xiàn)加重，大鼠生存狀態(tài)越來越差，造模成功大鼠36只，成功率為90％。

2.2 造模后大鼠體重變化及FBG、FINS、ISI情況注射STZ造模72 h后，正常對(duì)照組大鼠體重增加，糖尿病組大鼠糖尿病模型組大鼠與對(duì)照組大鼠比較血清FBG、FINS明顯升高，ISI下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明2型糖尿病大鼠造模成功。見Tab 2。

2.3 大鼠血生化指標(biāo)檢測(cè) 與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中FBG、TG、TC、LDL-C明顯升高（P ＜0.05）。而4、8周模型組與2周DM模型組相比較，大鼠血清TG含量略有升高，HDL-C略有降低，二者之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），8周和12周DM模型組各生化指標(biāo)變化不大；FBG、TC、LDL-C繼續(xù)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見Tab 3。

2.4 大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮病理觀察結(jié)果 正常對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常，內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞核均勻分布，無變性、壞死等病理結(jié)構(gòu)改變。DM組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核由正常的圓形或橢圓形不同程度的出現(xiàn)變?yōu)殚L(zhǎng)桿狀，排列紊亂，8周和12周DM大鼠內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)局部的細(xì)胞變性、細(xì)胞空泡化，甚至壞死（Fig 1）。

2.5 Wnt/β-catenin信號(hào)通路及SIRT1相關(guān)蛋白在大鼠主動(dòng)脈中的表達(dá) Westem blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，糖尿病組大鼠相對(duì)于正常對(duì)照組主動(dòng)脈Wnt2 和β-catenin的表達(dá)在2周及4周明顯增加（P＜0.01），4周后維持在較高水平，8周及12周相關(guān)蛋白表達(dá)變化差異沒有顯著性（P＞0.05）；糖尿病大鼠從2周到12周過程中，TCF4、SIRT1蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組相比表現(xiàn)為持續(xù)的增加（P＜0.05），sFRP2蛋白的表達(dá)在持續(xù)的降低（P＜0.01）（Fig 2、3）。

2.6 Wnt/β-catenin信號(hào)通路及SIRT1 mRNA在大鼠主動(dòng)脈中的轉(zhuǎn)錄水平 正常組大鼠主動(dòng)脈組織細(xì)胞有一定量的Wnt2、β-catenin、TCF4及SIRT1 mRNA的表達(dá)，但表達(dá)量不隨時(shí)間的變化而變化（P ＞0.05），而sFRP2 mRNA始終維持在較高的轉(zhuǎn)錄水平。與正常組相比，各糖尿病組大鼠主動(dòng)脈組織中Wnt2，β-catenin mRNA明顯增高（P＜0.01），且各模型組中，2周和4周組mRNA表達(dá)持續(xù)增加，8周和12周組維持在高表達(dá)水平，二者之間差異沒有顯著性（P＞0.05）；與此同時(shí)，各模型組中SIRT1和TCF4 mRNA的表達(dá)持續(xù)增高，sFRP2 mRNA表達(dá)水平持續(xù)降低，各組別之間差異也具有顯著性（P＜0.05）。見Fig 4。

Fig 2 The protein levels of Wnt2，β-catenin and TCF4 in total protein extracts of aorta from control and DM rats analyzed by Western blot（±s，n＝9）

3 討論

糖尿病可引起機(jī)體多個(gè)臟器的損害，主動(dòng)脈等大血管疾病是2型糖尿病致死或致殘的主要原因。糖尿病主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞病變的發(fā)病機(jī)制及相關(guān)信號(hào)通路的研究也較少，探索血管內(nèi)皮功能異常的病理生理機(jī)制，并有效改善血管內(nèi)皮功能，可能是防治2型糖尿病心血管事件的靶點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)采用了高脂飲食聯(lián)合鏈脲佐菌素建模方法［6］，建立2型DM大鼠模型，與正常對(duì)照組相比，DM大鼠血清TC、TG、LDL-C值有明顯升高，并呈現(xiàn)持續(xù)的高血糖，胰島素抵抗出現(xiàn)，糖尿病狀態(tài)形成。本研究中，DM大鼠FBG明顯升高，體重明顯低于正常對(duì)照組，DM大鼠主動(dòng)脈出現(xiàn)局灶性內(nèi)皮細(xì)胞空泡變性、甚至壞死，表明DM大鼠主動(dòng)脈出現(xiàn)不同程度的大血管損傷。

Wnt/β-catenin信號(hào)通路在大血管損傷中的作用也被廣泛關(guān)注［7］。Dabernat等［8］研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常會(huì)引起糖代謝的異常，增加2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)，參與高糖介導(dǎo)的腎上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程［9］。Xi等［10］在對(duì)1型糖尿病大鼠模型的研究中發(fā)現(xiàn)，DM狀態(tài)下，大鼠心肌Wnt/β-catenin信號(hào)通路被激活。因此，我們推測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路可能在DM主動(dòng)脈損傷中起重要作用。

Fig 3 The protein levels of SIRT1 and sFRP2 in total protein extracts of aorta from control and DM rats analyzed by Western blot（±s，n＝9）

SIRT1可以通過調(diào)節(jié)FOXOs、NF-κB、AMPK等相關(guān)信號(hào)通路，對(duì)多種心血管疾病的病理生理過程產(chǎn)生重要影響，發(fā)揮保護(hù)心肌、舒張血管、抑制動(dòng)脈粥樣硬化等作用［6］。Takeda等［11］認(rèn)為，在單核－巨噬細(xì)胞中，SIRTl失活條件下，mTOR通路介導(dǎo)NF-κB信號(hào)激活，進(jìn)而誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生。Yang等［12］研究發(fā)現(xiàn)，Sirtl過表達(dá)時(shí)，去乙?；⒓せ頛KB1，隨后AMPK的去磷酸化水平升高，進(jìn)而正向調(diào)節(jié)細(xì)胞壽命和能量平衡，從而保護(hù)主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，降低了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。另有研究［13］顯示，肝缺血－再灌注損傷中，SIRT1通過調(diào)節(jié)抑制Wnt信號(hào)通路，減少氧化損傷和細(xì)胞凋亡來保護(hù)肝細(xì)胞。而Zhou等［14］在研究間充質(zhì)干細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)，SIRT1可以通過調(diào)節(jié)sFRP2的表達(dá)來調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號(hào)通路。但是，SIRT1在心血管系統(tǒng)對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)節(jié)還不清楚。

Fig 4 The mRNA expression of Wnt/β-catenin signaling，SIRT1 andsFRP2 in total RNA extracts of aortic tissue from control and DM rats using qRT-PCR（±s，n＝9）

Wnt/β-catenin信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，Wnt蛋白與細(xì)胞膜上的跨膜受體結(jié)合，促使β-catenin降解復(fù)合體軸蛋白/結(jié)腸腺瘤樣息肉蛋白/糖原合成酶激酶3β（Axin/APC/GSK-3β）解聚而失活，抑制β-catenin的磷酸化及降解，促進(jìn)β-catenin發(fā)生核轉(zhuǎn)移，與核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活下游靶基因啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄［15］。本研究中Western blot及RT-PCR結(jié)果表明2周和4周DM大鼠心肌Wnt2的表達(dá)增加，促進(jìn)β-catenin發(fā)生核轉(zhuǎn)移，核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子TCF4的表達(dá)增加，顯示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路的激活；與此同時(shí)，早期DM大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的空泡變性、晚期甚至出現(xiàn)壞死等病變。而SIRT1表達(dá)持續(xù)增加，Wnt/β-catenin信號(hào)通路內(nèi)源性抑制劑sFRP2在DM早期高表達(dá)，持續(xù)期表達(dá)下降；可能是因?yàn)樵贒M早期，主動(dòng)脈組織中Wnt/β-catenin信號(hào)通路的迅速激活，體內(nèi)廣泛存在的SIRT1合成增加，直接調(diào)節(jié)sFRP2抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路的β-catenin的表達(dá)；高血糖狀態(tài)持續(xù)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路持續(xù)激活狀態(tài)，sFRP2則隨之降低。而SIRT1如何作用于sFRP2而發(fā)揮作用的，還需要進(jìn)一步研究。

糖尿病主動(dòng)脈病變是糖尿病心血管嚴(yán)重并發(fā)癥的重要組成部分，明確其發(fā)生發(fā)展機(jī)制，進(jìn)而阻滯其發(fā)展成為研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)揭示W(wǎng)nt/β-catenin信號(hào)通路的激活與SIRT1的調(diào)節(jié)作用，共同參與DM主動(dòng)脈的損傷過程，我們將進(jìn)一步研究二者在DM主動(dòng)脈病變發(fā)展過程中的作用機(jī)制，以期為糖尿病主動(dòng)脈病變的治療找到新的靶點(diǎn)。

（致謝：本實(shí)驗(yàn)全部由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室牟艷玲老師課題組獨(dú)立完成，感謝我的導(dǎo)師牟艷玲老師在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路上提出的建議和意見及實(shí)驗(yàn)技術(shù)上給予的指導(dǎo)。）

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Alteration of Wnt/β-catenin signaling pathway in type2 diabetic rats’aorta and regulation of SIRT1

YIN Mao-shan1，2，XU Shu-hong3，WANG Yan1，SUN Xiao-hui1，2，LIANG Chen1，2，LI Jie1，MU Yan-ling1
（1.Institute of Materia Medica，Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250062，China；2.School of Medicine and Life Sciences，University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences，Jinan 250062，China；3.China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，China）

Aim To investigate the alteration of Wnt/β-catenin signaling and sirtuins 1in type 2 diabetic rats’aorta and clarify its role in the development of di-abetes aortic disease.Methods The type 2 diabetes rat model was established by injection of streptozocin after five-week of high fat diet.The rats were randomly divided into control group，DM model group of 2 weeks，4 weeks，8 weeks and 12 weeks.Fasting blood glucose（FBG），total cholesterol（TC），triglyceride （TG），high density lipoprotein-cholesterol（HDL-C），low density lipoprotein-cholesterol（LDL-C）and fast-ing insulin（FINS）levels were tested.HE staining was used to observe the pathological changes of aortal struc-tures.The alteration of Wnt2，β-catenin，TCF4，SIRT1 and sFRP2in aortawas determined by Western blot and RT-PCR.Results Compared with control group，TC，TG，LDL-C levels of type 2 diabetic rats were significantly increased，HDL-C levels were signif- icantly reduced（P＜0.01）.Aortic histological analy-sis revealed that DM induced aortic endothelial cell vacuolar degeneration and necrosis.The expression of Wnt2 and β-catenin level increased significantly in the first 4 weeks of diabetic groups compared to control group，and that in model group of 8 weeks and 12 weeks kept in the high level and showed no significant alteration（P＞0.05）.But the expression of TCF4 and SIRT1was enhanced continuously in DM compared with control group while sFRP2 decreased in the duration of DM development.Conclusions Wnt/β-catenin signa-ling pathway was activated in diabetic aortal injury by regulation of SIRT1 via sFRP2.Further researches on its mechanism of actionin DM aorta injury may find a new therapeutic target for the disease.

Wnt2；β-catenin；TCF4；SIRT1；sFRP2；type 2 diabetes；aorta injury

時(shí)間：2016－2－26 10：20 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160226.1020.018.html

10.3969/j.issn.1001－1978.2016.03.009

A

1001－1978（2016）03－0337－06

R-332；R322.121；R341；R394.2；R587.1

2015－11－18，

2015－12－28

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No 30701022）；山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎(jiǎng)勵(lì)基金計(jì)劃（No BS2013SW008）

尹茂山（1987－），男，碩士生，研究方向：心血管藥理學(xué)，E-mail：maoshanyin＠126.com；牟艷玲（1975－），女，博士，副研究員，研究方向：心腦血管藥理學(xué)，通訊作者，E-mail：myling501＠hotmail.com