徐建中 楊紅韜 孫乙銘 俞旭平 王志安 羅頁(yè)思

摘要：目的 比較研究各益母草種質(zhì)資源的差異性，為品種選育提供優(yōu)良育種材料。方法 將收集自全國(guó)不同產(chǎn)地的20個(gè)野生益母草種質(zhì)資源在浙江衢州進(jìn)行同質(zhì)園試驗(yàn)，觀察其物候期、耐寒性及生境適宜性；測(cè)定初花期株高、鮮重和干重，并分別測(cè)定初花期和反季節(jié)栽培的益母草植株中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量。結(jié)果 綜合各種質(zhì)對(duì)浙江生境的適應(yīng)性、初花期藥材干產(chǎn)量及其中的鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿成分含量、反季節(jié)栽培益母草植株中上述2種成分的含量水平，河南靈寶、河南社旗和湖南桂東3個(gè)種質(zhì)較好，其中以河南靈寶種質(zhì)最佳，其初花期藥材干產(chǎn)量（30.6 g/株）、初花期植株中鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量（分別為1.31%和0.19%）及反季節(jié)栽培植株中有效成分鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量（分別為3.44%和0.37%）均較高，且能適應(yīng)在浙江種植。結(jié)論 河南靈寶種源可以作為品種選育的最佳候選材料。

關(guān)鍵詞：益母草；種質(zhì)；評(píng)價(jià)；鹽酸水蘇堿；鹽酸益母草堿

中圖分類號(hào)：R282 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2016）05-0078-05

Research on Evaluation of Different Germplasm of Leonurus japonicus XU Jian-zhong1，2， YANG Hong-tao3， SUN Yi-ming2， YU Xu-ping2， WANG ZHi-an2， LUO Ye-si1 （1. Zhejiang Chinese Medical University， Hangzhou 310053， China； 2. Zhejiang Research Institute of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou 310023， China； 3. Hangzhou Huadong Chinese Herbs Pieces Co.Ltd.， Hangzhou 311301， China）

Abstract： Objective To study the difference of Leonurus japonicus germplasm resources and provide good materials for breeding. Methods Totally 20 wild Leonurus japonicus germplasm resources from different places of China were collected. Experiment was conducted in homogeneous garden in Quzhou City of Zhejiang Province. Phenological phase， cold endurance and habitat adaptability were observed； the plant height， fresh weight and dry weight in early flowering were measured； the contents of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride were determined in early flowering and out-of-season cultivation. Results Considering the habitat adaptability， dry plant weight in early flowering， the contents of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride separately in early flowering and out-of-season cultivation， it was believed that the germplasms from Linbao County， Sheqi County in Henan Province and Guidong County in Hunan Province were better， in which Linbao germplasm was the best： the dry plant weight was 30.6 g， the content of stachydrine hydrochloride and leonurine hydrochloride were 1.31% and 0.19% respectively in early flowering， and were 3.44% and 0.37% respectively under anti-season cultivation， and it can be well adapted in Zhejiang Province. Conclusion The germplasm of Leonurus japonicas from Lingbao can be the best materials for breeding.

Key words： Leonurus japonicas； germplasm； evaluate； stachydrine hydrochloride； leonurine hydrochloride

益母草Leonurus japonicus Houtt.為唇形科一年

生或二年生草本植物，為婦產(chǎn)科要藥，具有調(diào)經(jīng)、行血生血、祛瘀、消水、安胎等功效。益母草含生物堿類、揮發(fā)油、二萜類、苯丙醇苷、環(huán)形多肽等，具有活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫、清熱解毒等功效，主要用于治療月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉、產(chǎn)后瘀痛、瘀血腹痛、跌打損傷、小便不利、水腫和癰腫瘡瘍等[1]，近年來(lái)還用于治療冠心病、急性腦梗死等血栓類疾病[2]。

2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》[3]規(guī)定本品入藥部位為益母草新鮮或干燥地上部分。鮮品于春季幼苗期至初夏花前期采割；干品于夏季莖葉茂盛、花開(kāi)或初開(kāi)時(shí)采割，曬干，或切段曬干。益母草傳統(tǒng)上以花前期采割地上部分入藥，但由于花前期益母草中水蘇堿和益母草堿含量非常低，基本達(dá)不到藥典規(guī)定，因此，目前很多生產(chǎn)廠家均以春季未開(kāi)花的鮮益母草或反季節(jié)種植的益母草作為原料。不同產(chǎn)地的益母草藥材中水蘇堿和益母草堿含量差異很大。本試驗(yàn)通過(guò)采集不同地區(qū)的野生益母草種源進(jìn)行同質(zhì)園試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)不同種源益母草對(duì)當(dāng)?shù)厣车倪m應(yīng)性、藥材產(chǎn)量和藥材質(zhì)量等情況，為益母草新品種選育提供優(yōu)良育種材料。

1 儀器與試藥

Agilent 1100系列高效液相色譜儀及Agilent化學(xué)工作站，配備Alhech2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。鹽酸水蘇堿對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110712-201010。鹽酸益母草堿對(duì)照品購(gòu)于成都曼斯特生物科技有限公司提供，批號(hào)11122602。乙腈為色譜純，辛烷磺酸鈉為高效液相色譜專用，其他試劑均為分析純，水為重蒸餾去離子水。

收集全國(guó)不同產(chǎn)地的20份野生益母草種質(zhì)資源，經(jīng)浙江省中藥研究所高級(jí)工程師俞旭平鑒定為益母草屬益母草Leonurus japonicus Houtt.，在浙江衢州市柯城區(qū)溝溪鄉(xiāng)斗目垅村建立益母草種質(zhì)資源圃。

2 方法與結(jié)果

2.1 種植方法

資源圃每個(gè)品種種植面積為20 m2，種植行距為25 cm，四周設(shè)保護(hù)行2.0 m。于8月26日播種，播種后分別觀察各種源益母草的物候期；在冬季分別觀察各種源益母草對(duì)低溫的耐受性；并在來(lái)年初花期每個(gè)種質(zhì)隨機(jī)取樣10株，分別測(cè)量各種質(zhì)的株高、株徑，稱量單株鮮重，于60 ℃烘箱中烘干后再稱量干重，計(jì)算折干率。反季節(jié)栽培于3月28日播種，于當(dāng)年7月12日采收并測(cè)定藥材中有效成分鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿的含量。施肥及其他田間管理等同常規(guī)。

2.2 鹽酸水蘇堿含量和鹽酸益母草堿含量測(cè)定

按2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》益母草項(xiàng)下含量測(cè)定方法進(jìn)行分析測(cè)定。

2.3 各種質(zhì)益母草物候期及生境適應(yīng)性表現(xiàn)

各種源益母草出苗時(shí)間差異不大，均在6～8 d。從耐寒性表現(xiàn)來(lái)看，不同種源益母草差異較大，一般來(lái)說(shuō)，長(zhǎng)江以南各省種源（湖南和湖北2個(gè)種源除外）益母草較適應(yīng)浙江冬季氣候，地上部基本不凍蔫而能安全入冬；長(zhǎng)江以北尤其是山東以北等省份益母草種質(zhì)均表現(xiàn)為冬季地上部部分或全部?jī)瞿瑁茨芑謴?fù)，待來(lái)年春季從根莖基部重新萌生新枝。具體見(jiàn)表1。

從初花期看，各種源益母草初花期大部分表現(xiàn)為南方種源益母草初花期較早，時(shí)間范圍從4月底至6月初，最早的是浙江衢州A（4月26日）和廣西桂林（4月28日），以云南陸良較晚（6月5日）；而北方種源初花期相對(duì)較南方稍遲，從5月中旬至7月上中旬，較早的是山東泗水（5月14日）和河北安國(guó)（5月15日），最遲的是山東臨朐（7月8日）和河南南陽(yáng)（7月10日）。尤其是山東臨朐和河南南陽(yáng)2個(gè)益母草種源，由于初花期在7月份，正值浙江夏季高溫季節(jié)，嚴(yán)重影響了這2個(gè)種源益母草的授粉和結(jié)實(shí)，致使結(jié)實(shí)不良，空癟種子多。具體見(jiàn)表1。

2.4 各種質(zhì)益母草初花期株高和株莖表現(xiàn)

各種質(zhì)益母草初花期株高差異較明顯，以河南南陽(yáng)和山東臨朐2個(gè)種質(zhì)初花期株高較高，均在250 cm以上，其余種質(zhì)株高均在200 cm以下，見(jiàn)圖1。

各種質(zhì)益母草株莖表現(xiàn)不一，也以山東臨朐和河南南陽(yáng)的種質(zhì)株莖較粗，兩者均在1.3 cm以上，株徑最細(xì)的是廣東清遠(yuǎn)種質(zhì)，僅為0.71 cm，見(jiàn)圖2。

2.5 各種質(zhì)益母草初花期株均鮮重、干重和折干率

各種質(zhì)益母草初花期株均鮮重差異較大，最多的是云南陸良（180.0 g），其次是浙江金華婺城（170.0 g）、河北安國(guó)（140.0 g）、浙江義烏（135.0 g）、浙江衢州A和山東臨朐（均為130.0 g）、河南南陽(yáng)（120.0 g）等，而廣西桂林（65.0 g）和廣東清遠(yuǎn)（50.0 g）最少。

各種質(zhì)益母草初花期株均干重差異較大，從多到少依次為山東臨朐（49.4 g）、云南陸良（46.8 g）、河南南陽(yáng)（46.1 g）、浙江金華婺城（38.4 g）、浙江衢州A（33.0 g）、浙江義烏（32.5 g）、河北安國(guó)（32.0 g）、浙江金華白龍橋（28.7 g）等，最少的是廣西桂林（13.9 g）和廣東清遠(yuǎn)（10.7 g）種質(zhì)。最多的山東臨朐和最少的廣西桂林相比，單株干重差異達(dá)4倍多。

反映在折干率上，各種質(zhì)表現(xiàn)差異也較大。折干率以河南南陽(yáng)和山東臨朐2個(gè)種質(zhì)較高，分別為38.4%、38.0%，折干率最低的是湖南桂東（16.7%）和江西修水（16.0%）。詳見(jiàn)圖3。

2.6 各種質(zhì)益母草初花期有效成分含量

不同種質(zhì)益母草初花期鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量差異很大。從鹽酸水蘇堿含量來(lái)看，除浙江衢州B種質(zhì)含量（0.49%）低于藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（≥0.50%）外，其余種質(zhì)鹽酸水蘇堿含量均在0.50%以上，其中含量超過(guò)藥典規(guī)定最低標(biāo)準(zhǔn)1倍以上的有河南南陽(yáng)（1.32%）、河南靈寶（1.31%）、山東臨朐（1.21%）和河南社旗（1.01%）4個(gè)種質(zhì)。從鹽酸益母草堿含量來(lái)看，低于藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（≥0.05%）的有湖北孝感（未測(cè)出）、山東泗水（0.01%）、浙江衢州B（0.02%）、浙江義烏和浙江金華婺城（0.02%）、河北安國(guó)（0.04%）6個(gè)種質(zhì)，含量超過(guò)藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)1倍以上的有山東臨朐（0.25%）、河南南陽(yáng)（0.21%）、河南靈寶（0.19%）、河南社旗（0.18%）、浙江金華白龍橋和湖南桂東（0.10%）?？梢钥闯?，鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量均以北方種質(zhì)較高，如河南南陽(yáng)、山東臨朐和河南靈寶，而南方種質(zhì)普遍較低，見(jiàn)表2。

2.7 反季節(jié)栽培益母草中有效成分含量表現(xiàn)

不同種質(zhì)反季節(jié)栽培益母草中鹽酸水蘇堿含量差異較大，其中以云南陸良較低（1.99%），其余種質(zhì)含量均在2.0%以上，鹽酸水蘇堿含量>3.0%者從高到低依次為河南靈寶（3.41%）>金華婺城（3.28%）>河北安國(guó)（3.18%）>山東臨朐和浙江衢州A（3.13%）>湖南桂東（3.09%）>浙江義烏（3.06%）>河南社旗（3.00%）。從鹽酸益母草堿含量來(lái)看，各種質(zhì)之間差異更大。除湖北孝感種源在檢測(cè)范圍內(nèi)依然未檢測(cè)到鹽酸益母草堿外，其余種質(zhì)鹽酸益母草堿含量均在藥典規(guī)定最低標(biāo)準(zhǔn)以上。其中含量超過(guò)藥典規(guī)定最低限量標(biāo)準(zhǔn)（≥0.05%）1倍以內(nèi)者為浙江衢州B（0.09%）、浙江衢州A（0.08%）和浙江金華婺城（0.07%）3個(gè)種質(zhì)，含量超過(guò)藥典最低標(biāo)準(zhǔn)4倍者從高到低依次為山東臨朐（0.54%）>河南靈寶（0.37%）>河南南陽(yáng)（0.35%）>湖南桂東（0.34%）>浙江金華白龍橋（0.25%）>江西修水（0.22%），尤其是山東臨朐品種，鹽酸益母草堿含量超出藥典含量規(guī)定最低標(biāo)準(zhǔn)10倍多。詳見(jiàn)表3。

3 討論

從全生育期觀察結(jié)果來(lái)看，除山東臨朐和河南南陽(yáng)2個(gè)種質(zhì)外，其余的18個(gè)益母草種質(zhì)均能適應(yīng)浙江的生境，均能完成正常的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。由于山東臨朐和河南南陽(yáng)2個(gè)種質(zhì)的開(kāi)花期均在7月上旬，此時(shí)期正值浙江地區(qū)的夏季高溫季節(jié)，可能高溫影響了2個(gè)種質(zhì)益母草的正常開(kāi)花和授粉，主要表現(xiàn)為花期長(zhǎng)達(dá)2個(gè)多月，空癟種子多，種子多不成熟，說(shuō)明這2個(gè)種質(zhì)不太適宜在浙江種植。

藥材的單株干重情況直接反映了藥材收獲后的產(chǎn)量。從初花期不同種質(zhì)益母草的株均干重表現(xiàn)來(lái)看，產(chǎn)量比較高的種質(zhì)為山東臨朐、云南陸良、河南南陽(yáng)、浙江金華婺城等，產(chǎn)量較低的為廣西桂林和廣東清遠(yuǎn)等，產(chǎn)量最高的山東臨朐和最低的廣西桂林相比，單株干重差異達(dá)4倍多。

從初花期益母草中有效成分鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量來(lái)看，不同種質(zhì)益母草中2種成分含量差異很大。其中，鹽酸水蘇堿含量超過(guò)藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)1倍以上的為河南南陽(yáng)、河南靈寶、山東臨朐和河南社旗4個(gè)種質(zhì)；從鹽酸益母草堿含量來(lái)看，含量超過(guò)藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)1倍以上的為山東臨朐、河南南陽(yáng)、河南靈寶、河南社旗、浙江金華白龍橋和湖南桂東種質(zhì)。鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量一般均以北方的種質(zhì)較高，如河南南陽(yáng)、山東臨朐和河南靈寶等品種，而南方種質(zhì)普遍較低。

反季節(jié)栽培益母草植株中，鹽酸水蘇堿含量>3.0%的為河南靈寶、金華婺城、河北安國(guó)、山東臨朐、浙江衢州A、湖南桂東、浙江義烏和河南社旗種質(zhì)。鹽酸益母草堿含量超過(guò)藥典最低限量標(biāo)準(zhǔn)4倍的種質(zhì)有山東臨朐、河南靈寶、河南南陽(yáng)、湖南桂東、浙江金華白龍橋和江西修水6個(gè)種質(zhì)，尤其是山東臨朐品種，鹽酸益母草堿含量超出藥典規(guī)定的10倍多；而湖北孝感種源在檢測(cè)范圍內(nèi)依然未檢測(cè)到鹽酸益母草堿。益母草具有活血化瘀功效，其含有的益母草堿還具有保護(hù)心血管、保護(hù)中樞系統(tǒng)、抗糖尿病等作用，尤其是治療腦梗死有顯著效果[4-6]。因此鹽酸益母草堿含量的高低可能會(huì)直接反映到藥材的臨床療效上。

綜合各種質(zhì)對(duì)浙江生境的適應(yīng)性、初花期藥材干產(chǎn)量及其中的鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿成分含量、反季節(jié)栽益母草植株中上述2種成分的含量水平，我們認(rèn)為河南靈寶、河南社旗和湖南桂東等益母草種質(zhì)其綜合性狀和藥材品質(zhì)等方面均較佳，也比較適應(yīng)在浙江的種植。其中，尤其以河南靈寶種質(zhì)最佳，不僅初花期有效成分鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量（分別為1.31%和0.19%）均較高，其反季節(jié)栽培植株中上述2種生物堿成分含量（分別為3.44%和0.37%）也較高，而且單株干重（30.6 g）也較多，因此可以將河南靈寶種質(zhì)作為品種選育的最佳候選材料。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：61-66.

[2] 韋海紅，潘小姣.益母草抗血栓作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，18（1）：80-84.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：272.

[4] 賀春暉，趙懿清，李霞，等.益母草堿藥理作用的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2013，18（12）：1419-1423.

[5] 熊鶯，楊解人.益母草堿對(duì)大鼠急性心肌缺血損傷心肌肌鈣蛋白T的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（2）：21-24.

[6] 錢(qián)海兵，徐玉平，羅魁.益母草堿對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的降脂作用[J].華西藥學(xué)雜志，2012，27（5）：528-530.