安歡樂，燕 翀，徐 娜，宋雨陽，李彥忠，2

(1.草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，甘肅蘭州 730020; 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特 010010)

3種鐮刀菌對(duì)小扁豆生長(zhǎng)的影響

安歡樂1，燕 翀1，徐 娜1，宋雨陽1，李彥忠1，2

(1.草地農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，甘肅蘭州 730020; 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特 010010)

小扁豆(Lens culinaris)是甘肅中部地區(qū)普遍栽培的小雜糧之一，既是經(jīng)濟(jì)作物，又是輪作倒茬和肥地作物。會(huì)寧縣種植的小扁豆近年來死亡嚴(yán)重，為查明其死亡原因，開展了田間調(diào)查與病原物研究。2012年，當(dāng)?shù)匦”舛垢〉陌l(fā)病率為58.4%，死亡率為43.2%，從發(fā)病植株的根部分離出的真菌從形態(tài)學(xué)上鑒定為尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、銳頂鐮刀菌(F.acuminatum)和木賊鐮刀菌(F.equiseti)，分離率分別為55%、18%和9%，以ITS為引物擴(kuò)展真菌的DNA，測(cè)序后構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹支持以上形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果。接種試驗(yàn)結(jié)果顯示，此3種鐮刀菌均能顯著(P＜0.05)降低植株的根長(zhǎng)和干重，其中尖孢鐮刀菌的影響最大，其次為木賊鐮刀菌，此2種鐮刀菌還顯著降低植株的鮮重和株高，但3種鐮刀菌均未對(duì)出苗率和死亡率產(chǎn)生影響(P＞0.05)。在發(fā)病田間采集的土壤中播種小扁豆，與滅菌土壤中栽培的植株相比，未滅菌土壤中植株的根長(zhǎng)和根干重顯著降低。3種鐮刀菌對(duì)小扁豆菌有致病性，但致病性均不強(qiáng)，干旱可能是導(dǎo)致鐮刀菌在田間危害程度加大的主要原因。

小扁豆;鐮刀菌;鑒定;致病性測(cè)定

小扁豆(Lens culinaris)又名濱豆、雞眼豆、眉豆等，富含蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、纖維素、維生素和抗氧化物化合物，栽培歷史已有8 000～12 000年，是許多發(fā)展中國(guó)家主要的蛋白質(zhì)來源［1-2］。在我國(guó)，小扁豆是小雜糧作物的一種，主要栽培于陜西、甘肅、寧夏、山西、內(nèi)蒙古、云南和西藏等省(區(qū))［3］。甘肅省會(huì)寧縣有悠久的種植雜糧作物歷史，享有“中國(guó)小雜糧之鄉(xiāng)”的美稱。

世界上小扁豆的主要葉部病害有殼二孢葉枯病(Ascochyta lentils)、炭疽病(Colletotricum lindemuthianum)、葡萄孢灰霉病(Botrytis cinerea)、鏈格孢枯萎病(Alternaria alternata)等，小扁豆根腐病也是影響產(chǎn)量的重要病害，其病原菌有立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)、齊整小核菌(Sclerotium rolfsii)、鐮刀菌(Fusarium spp.)、核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)、豌豆根腐絲囊菌霉(Aphanomyces euteiches)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、根串珠霉(Thielaviopsis basicola)、甘薯絲核菌(Rhizoctonia bataticola)［4-6］。

小扁豆生長(zhǎng)期間植株死亡，造成較大損失。但對(duì)其死亡原因研究較少，其中張彥梅和李敏權(quán)［7］于2007年報(bào)道甘肅省定西地區(qū)小扁豆死亡的原因?yàn)殓牭毒?Fusarium spp.)，優(yōu)勢(shì)種為尖孢鐮刀菌(F.oxysporum)。在甘肅中部地區(qū)，豌豆(Pisum sativum)在開花前后大量死亡的情況最早始于2000前，后來由于病害的發(fā)生，各地陸續(xù)減少了種植面積，目前已極少種植。近年來，在會(huì)寧等甘肅中部地區(qū)扁豆死亡的情況逐年加劇，已有不少農(nóng)民放棄了種植。對(duì)于甘肅豌豆死亡的原因，前人分析主要是由腐皮鐮孢(F.solani)、鏈孢粘帚霉(Gliocladium catenulatum)、豌豆根腐絲囊菌霉(A.euteiches)、根串珠霉、立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌(F.oxysporum)、腐霉(Pythium spp.)、殼二孢(Ascochyta spp.)等病原菌引起的［8-9］。由于我國(guó)記錄的小扁豆根腐病的病原種類較少，除鐮刀菌根腐病之外，其他均未報(bào)道。為確定小扁豆死亡的原因是否為病原菌所致，如果是病原菌，是何種病原菌，因此在甘肅會(huì)寧開展田間調(diào)查與病原菌的研究。

1 材料和方法

1.1研究地點(diǎn)

病害調(diào)查與標(biāo)本采集在甘肅省會(huì)寧縣翟所鄉(xiāng)觀音村楊岔社進(jìn)行，該地屬典型黃土高原地區(qū)。

1.2供試土壤和植物材料

用兩種土壤培養(yǎng)小扁豆幼苗供接種所用，其一取自甘肅省會(huì)寧縣小扁豆發(fā)病樣地，采用五點(diǎn)取樣，每點(diǎn)取0―10 cm的土約500 g，帶回實(shí)驗(yàn)室后用2 mm孔徑的篩子剔除植物秸稈和大塊土石，將細(xì)碎的土粒置于冷藏箱4℃保存?zhèn)溆?，其二為購自花市的土壤，按黑壤土、腐熟牛糞和植株腐殖質(zhì)7∶2∶1的比例混合而成。小扁豆種子為2012年在會(huì)寧當(dāng)?shù)夭墒账茫贩N不詳。

1.3田間調(diào)查與標(biāo)本采集

于2012年6月于小扁豆結(jié)莢中期在研究地按如下方法開展病害調(diào)查:選取3塊扁豆地，采用“Z”型調(diào)查，每塊地共調(diào)查5個(gè)點(diǎn)，每地選1 m2，統(tǒng)計(jì)植株總數(shù)和死亡植株數(shù)，按如下公式計(jì)算死亡率:

同時(shí)在各樣點(diǎn)上隨機(jī)挖取帶根的植株10株，將植株帶回室內(nèi)供分離病原。

1.4根腐植株統(tǒng)計(jì)與病原分離

1.4.1根腐植株統(tǒng)計(jì) 將帶回的小扁豆根部剪下，將根部在自來水下沖洗干凈，觀察根部是否變色腐爛，有變色者記為發(fā)生根腐病的植株，并計(jì)算根腐病的發(fā)病率:

1.4.2病原分離 將洗凈的根部，用70%酒精消毒1 min，然后用1%的次氯酸鈉消毒3 min，再用無菌水洗3次，用滅菌的濾紙吸干表面水分，將其切成0.5 cm長(zhǎng)的小段，均勻擺放在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上，在22℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d后統(tǒng)計(jì)組織小塊上長(zhǎng)出各種真菌的種類及數(shù)量，純化所有分離菌，于第7天再次統(tǒng)計(jì)一次，校正首次統(tǒng)計(jì)的結(jié)果，根據(jù)每種菌在組織小塊上出現(xiàn)的次數(shù)計(jì)算其分離率。PDA培養(yǎng)基的制作方法為:稱200 g去皮的土豆，加入1 000 mL蒸餾水，煮沸30 min，雙層紗布過濾，濾液清液中加入17 g瓊脂粉和20 g葡萄糖，緩緩加入蒸餾水然后定容1 000 mL，121℃下滅菌30 min，再將培養(yǎng)皿倒入培養(yǎng)皿(9 cm)中，每個(gè)培養(yǎng)皿中25 mL，制成平板［10］。

1.5菌株鑒定

1.5.1形態(tài)學(xué)鑒定 根據(jù)菌落和孢子及其產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)的形狀、顏色和大小鑒定菌種［11］。

1.5.2分子方法鑒定 用真菌DNA提取試劑盒(型號(hào)為D3195-1)提取3種菌的DNA，用引物ITS1 (AGGAGAGTCGTAACAAGGT )和ITS4 (TCCTCCGCTTATTGATATGC)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物委托上海生工生物有限公司測(cè)序。將測(cè)得的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)并用MEGA5.1軟件系統(tǒng)發(fā)育樹，確定其與所選的菌種的親緣關(guān)系［12］。

1.6分離出真菌的致病性測(cè)定

1.6.1接種幼苗的準(zhǔn)備 挑選顆粒飽滿的小扁豆種子，經(jīng)常規(guī)表面消毒后擺放在鋪有兩層滅菌濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿擺放100粒，加無菌水3～5 mL，放置在25℃下使之發(fā)芽，發(fā)芽后用于接種。

1.6.2孢子懸浮液的配制 將培養(yǎng)2周的分離物每皿加滅菌蒸餾水5 mL，用滅菌的載玻片輕輕刮下孢子，用雙層滅菌紗布過濾，將濾液搖勻制成孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板測(cè)量孢子的濃度，將孢子濃度調(diào)節(jié)為106·mL－1后用于接種之用。

1.6.3接種及接種后測(cè)定指標(biāo) 采用植物幼苗蘸真菌孢子懸浮液的接種方法，即將小扁豆的幼苗在真菌孢子懸浮液中浸泡30 min后移栽到裝有滅菌土壤的紙杯中。共接種3種真菌，每種真菌設(shè)5個(gè)重復(fù)(杯)，以幼苗蘸無菌水作為空白對(duì)照，對(duì)照5個(gè)重復(fù)(杯)。接種后移栽于裝有200 g滅菌土壤的紙杯中，每杯3株，紙杯口徑7 cm，底部開孔。接種后將幼苗放置在22℃的光照植物培養(yǎng)箱中。6周后觀察發(fā)病情況，并收獲植株，清洗每株植株的根部，測(cè)量株高和根長(zhǎng)，挑選部分植株用于接種菌的再分離，分離方法同1.4.2。稱鮮重后在65℃烘箱中烘24 h，稱干重。

1.7田間土壤帶菌試驗(yàn)

將采集于小扁豆死亡田間土壤分成兩部分，一部分在167℃的烘箱中滅菌4 h后播種小扁豆，另一部分土壤不經(jīng)滅菌直接播種小扁豆。設(shè)5個(gè)重復(fù)(紙杯)，每重復(fù)(紙杯)播種5粒小扁豆種子，播種后管理和測(cè)定指標(biāo)同1.6.3。

1.8數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0軟件對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，用平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤表示測(cè)定結(jié)果，分別對(duì)株高和根長(zhǎng)，烘干后測(cè)定單株干重進(jìn)行單因素方差分析，并用新復(fù)極差法對(duì)各測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，采用Excel 2003制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1田間發(fā)病癥狀、發(fā)病率與死亡率

在田間，小扁豆植株底部的葉片開始退綠變黃，并向上延伸至整個(gè)植株(圖1A)，發(fā)病植株的根部呈紅褐色至黑色，根瘤極少(圖1B)。大量植株死亡，死亡植株多發(fā)生于地塊邊緣(圖1C，D)。田間根腐病的平均發(fā)病率為58.4%，平均死亡率為43.2%。

2.2病原分離

從田間采集的小扁豆的根部主要分離出3種真菌，菌株編號(hào)分別為yanch1、yanch3和yanch2，分離率分別為55%、18%和9%(圖2)。

2.2.1形態(tài)學(xué)鑒定 根據(jù)形態(tài)特征初步鑒定分離出的3種真菌均為鐮刀菌。yanch1在PDA上生長(zhǎng)迅速，菌落灰白，絨狀且菌絲中間致密周圍稀疏，小型分生孢子數(shù)量較多，卵形或腎形，沒有隔膜，有厚垣孢子產(chǎn)生。yanch2在PDA上生長(zhǎng)迅速，氣生菌絲茂密，初生菌絲白色，隨著培養(yǎng)時(shí)間的不斷延長(zhǎng)菌絲顏色逐漸由白色變化為粉紅色，大型分生孢子為鐮刀形，沒有小型分生孢子。yanch3在PDA上生長(zhǎng)迅速，菌絲白色絮狀，不形成小型分生孢子;大型分生孢子較為彎曲，頂胞鉤狀，厚垣孢子團(tuán)狀或鏈狀。根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定，yanch1為尖孢鐮刀菌，yanch2為銳頂鐮刀菌(F.acuminatum)，yanch3為木賊鐮刀菌(F.equiseti)。

2.2.2分子鑒定 將3種鐮刀菌的序列與其它已有的鐮刀菌的序列用MEGA5.1進(jìn)行分析，做系統(tǒng)發(fā)育樹。系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果(圖3)顯示，yanch2與F.acuminatum聚在一個(gè)枝上，其自展值為84; yanch3 與F.equiseti聚在一個(gè)枝上，自展值為99; yanch1與F.oxysporum聚在一個(gè)枝上，自展值為82。故根據(jù)分子方法鑒定出3種鐮刀菌與形態(tài)學(xué)鑒定的結(jié)果相吻合。

2.3致病性測(cè)定

2.3.1 3種鐮刀菌致病性測(cè)定 接種3種鐮刀菌6周后，與對(duì)照相比較，接種的3種鐮刀菌的小扁豆植株無退綠變黃，根部并未出現(xiàn)明顯的變黑或者變褐等田間癥狀，但是其植株的高度和根系的形狀有所不同。從接種小扁豆植株的根部分離出接種菌，尖孢鐮刀菌、銳頂鐮刀菌、木賊鐮刀菌的再分離率分別為83.2%、8.4%和6.9%。

圖1 小扁豆田間發(fā)病癥狀和根部觀察Fig.1 Lentil field symptoms and root observation

圖2 小扁豆根部分離出真菌Fig.2 Fungi isolated from lentil roots

2.3.2對(duì)植株生長(zhǎng)的影響 尖孢鐮刀菌顯著降低植株鮮重(P＜0.05)，其次為木賊鐮刀菌，而接種銳頂鐮刀菌的植株的鮮重與對(duì)照之間差異不顯著(P＞0.05)(圖5)。接種3種鐮刀菌后，植株的干重顯著低于對(duì)照。木賊鐮刀菌和尖孢鐮刀菌均使植株的株高顯著降低，而接種銳頂鐮刀菌對(duì)株高無顯著影響。接種3種鐮刀菌均顯著降低植株的根長(zhǎng)，其中尖孢鐮刀菌影響最大，其次為木賊鐮刀菌，最后為銳頂鐮刀菌(圖4)。

2.4病土栽培

與滅菌土壤相比，未滅菌土壤植株的根長(zhǎng)(圖5)、根鮮重和根干重(表1)顯著(P＜0.05)降低，但株高、地上鮮重和地上干重未滅菌和滅菌土壤差異不顯著。

3 討論與結(jié)論

國(guó)內(nèi)外已有研究的小扁豆上的鐮刀菌有尖孢鐮刀菌、銳頂鐮刀菌、木賊鐮刀菌、燕麥鐮刀菌(F.avenaceum)、黃色鐮刀菌(F.culmorum)、腐皮鐮刀菌、串珠鐮刀菌7種［7，13］。張彥梅和李敏權(quán)［7］曾對(duì)甘肅省定西的小扁豆根腐病進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，其病原菌為尖孢鐮刀菌、茄鐮刀菌、串珠鐮刀菌和木賊鐮刀菌，其中尖孢鐮刀菌為優(yōu)勢(shì)種，本試驗(yàn)分離的鐮刀菌為尖孢鐮刀菌、銳頂鐮刀菌、木賊鐮刀菌。鐮刀菌為土壤習(xí)居菌，普遍存在于土壤中，所分離到的鐮刀菌與國(guó)內(nèi)外有所不同，故當(dāng)?shù)厥欠翊嬖谄渌牭毒杏写M(jìn)一步研究。

本研究分離出的3種鐮刀菌在室內(nèi)接種試驗(yàn)中均未造成小扁豆死亡，但對(duì)小扁豆的株高、根長(zhǎng)、單株鮮重及單株干重都有一定影響。病土栽培試驗(yàn)中，土壤中的鐮刀菌對(duì)小扁豆的根系生長(zhǎng)有影響。在根腐病發(fā)病率統(tǒng)計(jì)時(shí)，觀察到小扁豆根系較小，幾乎觀察不到根瘤。試驗(yàn)結(jié)果說明當(dāng)?shù)赝寥乐械溺牭毒鷮?duì)小扁豆具有侵染力，但致病性較弱，影響了植株的生長(zhǎng)卻未造成植株死亡，故田間小扁豆死亡不是鐮刀菌單因素引起的，可能還有其他因素的影響。

圖3 基于小扁豆根部分離出鐮刀菌構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree based on Fusarium spp.isolated from lentil root

圖4 分離出的3種鐮刀菌對(duì)小扁豆生長(zhǎng)的影響Fig.4 Effects of 3 fusariums isolated to lentils growth

圖5 采集田間病土栽培結(jié)果Fig.5 The result of cultivation in field soil with pathogen

研究［14］表明，低溫、干旱、高溫、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)毒性等都是小扁豆非生物脅迫的主要因素，其中水分和溫度被認(rèn)為是最主要的脅迫因素，包括是過度干旱、土壤水分過多、溫度過低、溫度過高等［15］。小扁豆適宜于年降水量155～483 mm的地區(qū)［16-17］，而會(huì)寧縣的四季分明，晝夜溫差大，夏季炎熱高溫，日照較強(qiáng)，年平均氣溫12.15℃，7月份平均氣溫24℃，年降水量?jī)H在340 mm左右，且分布不均勻，主要集中在7－9月，年蒸發(fā)量卻高達(dá)1 800 mm［18］。據(jù)此，增加根部深度可以作為減少干旱脅迫的一種方式［14］。會(huì)寧當(dāng)?shù)? －7月小扁豆處于開花結(jié)莢期，消耗水分多，但此時(shí)降雨少、氣溫高、光照強(qiáng)，可引起小扁豆代謝水分的機(jī)能下降。就鐮刀菌而言，干旱反而有利于其生長(zhǎng)，因?yàn)橥寥乐械溺牭毒鷮俸醚跣偷模诟稍锏耐寥拉h(huán)境中生長(zhǎng)比較活躍，土壤干燥比土壤濕潤(rùn)更有利于該菌生存［19］。Stover［20］研究6種鐮刀菌最適合生長(zhǎng)的土壤條件為土壤水分飽和度的15%。在會(huì)寧小扁豆根部的鐮刀菌中，尖孢鐮刀菌為優(yōu)勢(shì)種，該菌是世界范圍內(nèi)小扁豆萎蔫病的主要菌種，可發(fā)生于小扁豆的整個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期。據(jù)報(bào)道，20～25℃的土壤溫度有利于該菌生長(zhǎng)，但較強(qiáng)光照和較高溫度增強(qiáng)了植株的蒸騰作用，故夏季高溫是決定癥狀的關(guān)鍵因素［21］。

表1 病土對(duì)小扁豆生長(zhǎng)影響Table 1 Effects of filed soil with pathogen to lentils growth

鐮刀菌不僅影響小扁豆植株的生長(zhǎng)，而且影響根瘤菌的形成，使病株根部的根瘤數(shù)量下降，從而影響植株的生長(zhǎng)和產(chǎn)量［22-23］。研究表明，根瘤菌通過其固氮作用、根瘤菌和苜蓿共生免疫作用、對(duì)植物自身組成變換或其生理應(yīng)答機(jī)制進(jìn)行改變從而提高苜蓿的抗旱、耐鹽、抗高溫及非機(jī)械損傷等非生物脅迫能力［24］。本試驗(yàn)觀察到小扁豆根系上根瘤菌的數(shù)量很少，故根瘤菌的不正常生長(zhǎng)影響小扁豆抗逆性和氮素的固定。根瘤菌可以提供小扁豆生長(zhǎng)的3 /4的氮素，也通過共生作用能增強(qiáng)植物抗逆性［25］，根瘤菌結(jié)瘤受到阻礙，小扁豆的氮素供應(yīng)不足并且抗逆性減弱，影響小扁豆有機(jī)物的積累及根系的生長(zhǎng)，進(jìn)而影響其在干旱條件下吸收深層土壤的水分，同時(shí)利于病原菌的侵入。

本研究對(duì)甘肅省會(huì)寧縣小扁豆的死亡進(jìn)行調(diào)查研究結(jié)果顯示，所分離到的3種鐮刀菌對(duì)小扁豆致病性弱，對(duì)小扁豆生長(zhǎng)有影響，病土栽培試驗(yàn)及小扁豆根部根瘤菌的生長(zhǎng)狀況進(jìn)一步印證鐮刀菌對(duì)小扁豆根部有影響，但是鐮刀菌并未造成小扁豆死亡。會(huì)寧當(dāng)?shù)貧夂驐l件適宜土壤中鐮刀菌的生長(zhǎng)，對(duì)小扁豆的生長(zhǎng)存在脅迫因素，同時(shí)鐮刀菌的生長(zhǎng)抑制根瘤菌的生長(zhǎng)，從而減弱了植株的抗逆性。病原菌和干旱共同作用下小扁豆遇到高溫天氣可能是導(dǎo)致當(dāng)?shù)匦”舛垢“l(fā)生的原因，這還需要進(jìn)一步的研究驗(yàn)證。

References)

［1］Taylor P，Lindbeck K，Chen W，F(xiàn)ord R.Lentil Diseases.Germany: Springer Netherlands，2007: 291-313.

［2］陳喜明，高克昌，韓云麗，趙隨堂，趙壯芳，趙力.小扁豆特征特性及高產(chǎn)栽培技術(shù).中國(guó)農(nóng)業(yè)信息，2011(4) : 31-31.Chen X M，Gao K C，Han Y L，Zhao S T，Zhao Z F，Zhao L.Lentils characteristics and high yield cultivation techniques.China Agricultural Information，2011(4) : 31-31.(in Chinese)

［3］葉靜淵.《馬首農(nóng)言》中的"扁豆"考辨.中國(guó)農(nóng)史，1995，14(1) : 13-18.Ye J Y.Study“Lentils”in《Ma Shounong words》.Agriculture History of China，1995，14(1) : 13-18.(in Chinese)

［4］Beniwal S，Bayaa B，Weigand S，Makkouk K，Saxena M.Field Guide to Lentil Diseases and Insect Pests.Aleppo: International Center for Agricultural Research in the Dry Areas，1993: 5-106.

［5］Datta S，Choudhary R，Shamim M，Singh R，Dhar V.Molecular diversity in indian isolates of Fusarium oxysporum f.sp.lentis inciting wilt disease in lentil (Lens culinaris Medik).African Journal of Biotechnology，2011，10(38) : 7314-7323.

［6］Jermyn W A.Guidelines for Growing Lentils.Lincoln: Crop Research Division，1982.

［7］張彥梅，李敏權(quán).甘肅定西小扁豆鐮刀菌根腐病病原鑒定及致病性測(cè)定.雜糧作物，2007，27(3) : 235-237.Zhang Y M，Li M Q.Identification and pathogenicity test of pathogenic of lentil root diease in Dingxi of Gansu Province.Rain Fed Crops，2007，27(3) : 235-237.(in Chinese)

［8］王華.定西豌豆根腐病的發(fā)生流行與綜防意見.甘肅農(nóng)業(yè)科技，1995(6) : 32-33.Wang H.Epidemic and integrated control opinion of pea root rot in Dingxi.Gansu Agriculture Science and Technology，1995(6) : 32-33.(in Chinese)

［9］伍克俊，謝正團(tuán)，李秀君.甘肅中部地區(qū)豌豆根腐病病原研究.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，27(3) : 225-231.Wu K J，Xie Z T，Li X J.Study on the pathogens of root rot of pea in the central region of Gansu Province.Journal of Gansu Agricultural University，1992，27(3) : 225-231.(in Chinese)

［10］方中達(dá).植病研究方法.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版，1998: 46.Fang Z D.Methodology for Plant Pathology.Beijing: China Agricultural Press，1998: 46.(in Chinese)

［11］John F L，Summerell B A.The Fusarium Laboratory Manual.England: Blackwell Publishing Professional，2006: 274-275.

［12］龔弘強(qiáng).西藏地區(qū)青稞籽粒鐮孢屬真菌及其致病性研究.西安:西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文，2006.Gong H X.Studies on isolation and pathogenicity of Fusarium ssp.from highland barley kernels in Tibet.Master Thesis.Yangling: Northwest Agriculture and Forestry University，2006.(in Chinese)

［13］Fletcher J，Broadhurst P，Bansal R.Fusarium avenaceum: A pathogen of lentil in New Zealand.New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science，1991，19(2) : 207-210.

［14］Muehlbauer F J，Cho S，Sarker A，McPhee K E，Coyne C J，Rajesh P，F(xiàn)ord R.Application of biotechnology in breeding lentil for resistance to biotic and abiotic stress.Euphytica，2006，147(1-2) : 149-165.

［15］Webb C，Hawtin G.Lentils.Farnham Royal: Commonwealth Agricultural Bureaux，1981: 216.

［16］Rathore R，Khandwe R，Khandwe N，Singh P.Effect of irrigation schedules，phosphorus levels and phosphate solublizing organism on lentil yield.Lens，1992，19: 17-19.

［17］Saraf C S，Baitha.Effect of varying soil moisture regimes and phosphorus levels on growth，yield and consumptive use of water by lentils planted on different dates under llelhi condition.LENS Newsletter，1979(6) : 1-7.

［18］李曼.氣候變化對(duì)會(huì)寧縣糧食作物單產(chǎn)的影響研究.蘭州:蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文，2011.Li M.The impact of climate change on cereal crop unit yield in Huining.Master Thesis.Lanzhou: Lanzhou University，2011.(in Chinese)

［19］Cook R，Papendick R.Influence of water potential of soils and plants on root disease.Annual Review of Phytopathology，1972，10(1) : 349-374.

［20］Stover R.The effect of soil moisture on Fusarium species.Canadian Journal of Botany，1953，31(5) : 693-697.

［21］Stoilova T，Chavdarov P.Evaluation of lentil germplasm for disease resistance to Fusarium wilt (Fusarium oxysporum f.sp.lentis).Journal of Central European Agriculture，2006，7(1) : 121-126.

［22］Hwang S，Howard R，Chang K，Park B，Burnett P.Etiology and severity of fusarium root rot of lentil in Alberta.Canadian Journal of Plant Pathology，1994，16(4) : 295-303.

［23］Hwang S，Gossen B，Turnbull G，Chang K，Howard R，Thomas A.Effect of temperature，seeding date，fungicide seed treatment and inoculation with Fusarium avenaceum on seedling survival，root rot severity and yield of lentil.Canadian Journal of Plant Science，2000，80(4) : 899-907.

［24］楊培志.紫花苜蓿根瘤菌共生對(duì)干旱及鹽脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究.楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué)博士學(xué)位論文，2012. Yang P Z.Mechanism Involved in drought/dalt tolorance improvement in anfalfa due to symbiotic interaction with rhizobium.PhD Thesis.Yangling: Northwest Agriculture and Forestry University，2012(in Chinese)

［25］Tickoo J，Sharma B，Mishra S，Dikshit H.Lentil (Lens culinaris) in India: Present status and future perspectives.Indian Journal of Agricultural Science，2005，75(9) : 539-562.

(責(zé)任編輯 王芳)

Effects of three Fusarium spp.on the growth of lentil in Huining County，Gansu Province

An Huan-le1，Yan Chong1，Xu Na1，Song Yu-yang1，Li Yan-zhong1，2
(1.College of Pastoral Agriculture Science and Technology，Lanzhou University，State Key Laboratory of Grassland Agro-ecosystems，Lanzhou 730020，China; 2.Institution of Grassland Research of CAAS，Hohhot 010010，China)

Lentil is one of the widely planted crops in the center areas of Gansu Province as economic，rotation and soil-fertilized plant.However，death of lentil is very serious in Huining County in recent years.The field investigation，isolation and identification of causal agent were conducted to determine the reasons of plant death.In 2012，incidence of lentil root rot was 58.4%，and mortality was 43.2%.Fungi isolated from the roots of diseased plants were morphologically identified as Fusarium oxysporum，F(xiàn).acuminatum and F.equiseti，which were consistent with the phylogenetic tree based on ITS sequence.Isolation frequency of these fungi was 55%，18% and 9%，respectively.In the inoculation experiment，the root length and root dry weight of host inoculated with all 3 fungi significantly (P ＜0.05) decreased in which the host with F.oxysporum decreased most and the host with F.equiseti decreased more.The fresh weight and plant height of host inoculated with F.oxysporum and F.equiseti also decreased.However，the emergence and survival rates of host inoculated with all 3 fungi were not affect (P＞0.05).The soils were collected from lentils fields in Huining as plants growth medium.Compared with plants grown in autoclaved soil，root length and root dry weight of plant grown in no-autoclaved soil significantly (P＜0.05) decreased.In conclusion，3 Fusarium species were weak pathogenic to lentils.Drought possible was the main reason for these Fusarium species causing serious death on lentils.

Lens culinaris; Fusarium spp.; identification; pathogenicity

Li Yan-zhong E-mail: liyzh@ lzu.edu.cn

S520.8; S435.2

A

1001-0629(2016) 1-0067-08*

10.11829/j.issn.1001-0629.2015-0038

安歡樂，燕翀，徐娜，宋雨陽，李彥忠.3種鐮刀菌對(duì)小扁豆生長(zhǎng)的影響.草業(yè)科學(xué)，2016，33(1) : 67-74.

An H L，Yan C，Xu N，Song Y Y，Li Y Z.Effects of three Fusarium spp.on the growth of lentil in Huining County，Gansu Province.Pratacultural Science，2016，33(1) : 67-74.

2015-01-16 接受日期: 2015-11-03

國(guó)家自然科學(xué)基金(31272496) ;公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(201303057) ;國(guó)家牧草產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-35)

安歡樂(1989-)，女，陜西永壽人，在讀碩士生，主要從事植物病理學(xué)研究。E-mail: anhl13@ lzu.edu.cn

李彥忠(1969-)，男，甘肅會(huì)寧人，教授，博士，主要從事植物病理學(xué)研究。E-mail: liyzh@ lzu.edu.cn

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