鄭亞秋， 耿勝男， 孟明靜， 杜鋼

河南大學藥學院 藥物研究所，河南 開封 475004

?

川烏對小鼠二階段皮膚乳頭狀瘤的抑制作用

河南大學藥學院 藥物研究所，河南 開封 475004

摘要：〔目的〕 評價川烏對小鼠二階段皮膚乳頭狀瘤的抑制作用以及在癌癥化學預防方面的作用。〔方法〕 本實驗誘發(fā)小鼠形成皮膚乳頭狀瘤的二階段致癌模型所采用的是經(jīng)典的DMBA/巴豆油方法，以灌胃的方式給一組小鼠川烏水煎液，以另一組灌蒸餾水的小鼠為對照，利用觀察和對比小鼠的動態(tài)，以及小鼠的荷瘤數(shù)、體質(zhì)量、體溫、自主活動的變化，來觀察和評價川烏在不同階段的抗化學致癌作用。〔結果〕 川烏對DMBA /巴豆油誘發(fā)的小鼠皮膚乳頭狀瘤的形成具有抑制作用?！步Y論〕 川烏具有較強的癌癥化學預防作用。

關鍵詞：川烏；皮膚乳頭狀瘤；化學預防；抗癌

惡性腫瘤是嚴重威脅人類健康的疾病之一[1]。癌癥的發(fā)病機制尚不明確，但是利用中醫(yī)學的一些理論可以說明癌癥發(fā)病時的一些臨床癥狀。癌癥發(fā)病時常有局部疼痛、局部腫塊、舌質(zhì)青紫、脈象沉細澀、面色晦暗等臨床特征，與“寒主收引、主凝滯、主痛”等中醫(yī)理論相符。故而中醫(yī)學理論認為，“陽虛寒凝”是惡性腫瘤的關鍵發(fā)病機制。中醫(yī)認為，癌毒多為陰邪之毒，而攻毒祛邪大多用辛溫大熱及有毒的藥物，以此達到溫陽拔毒、散結軟堅的功效[2]。中藥中的辛溫熱藥主要包括：單藥，有烏頭(川烏、草烏)、 附子、干姜、肉桂、吳茱萸、小茴香等；復方，有陽和湯、四逆湯、理中湯等，以及根據(jù)參附湯提取的參附注射液等。川烏為毛茛科烏頭屬植物烏頭carmichaeliDebx.的干燥主根(母根)。植物為多年生草本，由于主要產(chǎn)自四川而稱川烏。一般于栽培后第二年6月中旬采挖，除去莖葉，洗凈泥沙，將母根與子根分開。母根曬干稱“川烏”，子根習稱“泥附子”。川烏的根呈不規(guī)則圓錐形，表面有錐形瘤狀隆起的小支根(習稱“釘角”)。其性熱，味辛、苦，略有麻舌感，歸于心、肝、腎、脾經(jīng)，有大毒。能祛風除濕，溫經(jīng)止痛。用于風寒濕痹，關節(jié)疼痛，心腹冷痛，寒疝作痛，麻醉止痛[3]。但是，由于烏頭具有強烈的毒性，生品內(nèi)服宜甚，一般炮制后用，最好煎煮2 h以上，也可同干姜、甘草同用，可降低毒性。不宜與半夏、白蘞、白及、天花粉、貝母類、瓜蔞類同用。用量3～15 g。孕婦應忌用。 小鼠皮膚乳頭狀瘤形成實驗是由致癌劑DMBA啟動、巴豆油促癌所致的二階段誘癌模型,過程包括啟動和促癌兩階段。DMBA/巴豆油誘癌促癌是研究癌癥發(fā)生機制的最常用經(jīng)典模型之一, 現(xiàn)已成為評價化合物癌癥化學預防作用優(yōu)先選用的動物致癌模型[3]。我們采用該法來觀察和評價川烏的抗癌作用。

1材料與儀器

1.1實驗動物

昆明種小鼠：健康雌鼠，由河南省醫(yī)學實驗動物中心提供(合格證號：豫動合字101號)。

1.2藥品及試劑

巴豆油，DMBA(美國sigma公司產(chǎn)品)，脫毛膏，川烏(購自開封市天濟大藥房)。

1.3實驗器材

電子天平(上海精密儀器有限公司)，電子體溫計(香港泰克曼電子儀器有限公司)，ZH-YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀(淮北正華生物儀器設備有限公司)，YN-ZD-2電熱蒸餾水器(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)，BD-400冰柜(河南冷柜廠)。

2方法

2.1準備階段

2.1.1分組取健康的昆明種雌鼠22只，隨機分為皮膚癌造模組和皮膚癌造模預防組：造模組10只，預防組12只。

2.1.2背部脫毛用蒸餾水將小鼠背部的皮膚潤濕(2 cm×2 cm左右的面積)，取脫毛膏適量均勻涂抹在小鼠背部。5 min之后，觀察到背毛已溶解時，輕輕用溫水擦掉殘留的脫毛膏和已溶解的背毛，然后用干毛巾將小鼠背部脫毛處擦干。

2.1.3制水煎液稱取生川烏10 g，加入20倍水煎煮0.5 h，共煎煮3遍。將3次的水煎液綜合，加溫濃縮至200 mL，使水煎液濃度為1 g/20 mL。

2.2誘癌階段

將DMBA配置成150 mg/0.2 L的丙酮液，共配置3次，分別在1 d、7 d、14 d將DMBA丙酮液滴于小鼠的背部。在滴藥時，用移液槍吸取DMBA丙酮液0.2 mL，緩緩滴于小鼠背部皮膚裸露處，注意DMBA的低溫保存及滴藥時的慢吸快打。

2.3促癌階段

將巴豆油配置成0.5 g/0.2 L的丙酮液。從第4周開始，每周2次，在小鼠背部與涂抹DMBA相同的部位涂抹巴豆油丙酮液。該階段共持續(xù)12周。

2.4給藥階段

皮膚癌造模組，每天用灌胃法給每只小鼠0.5 mL蒸餾水。皮膚癌造模預防組，每天用灌胃法以0.2 mL/10 g的劑量給小鼠1 g/kg的川烏水煎液。

2.5記錄數(shù)據(jù)

每日密切觀察兩組小鼠的情況，記錄數(shù)據(jù)。最后，進行數(shù)據(jù)的總結處理，將數(shù)據(jù)整理入Excel表格中，制作對比圖表，觀察兩組小鼠的差別。

2.5.1記錄體質(zhì)量觀察兩組小鼠的體質(zhì)量變化情況，每周記錄1次。

2.5.2觀察水、食變化觀察小鼠的飲食、飲水量，每周觀察3次。

2.5.3記錄體溫觀察小鼠的體溫及瘤溫(無瘤時測背溫)變化情況，每周記錄1次。

2.5.4記錄自主活動觀察小鼠的自主活動狀況，每周測1次，以此對比小鼠的活躍程度。

2.5.5觀察荷瘤小鼠數(shù)和小鼠荷瘤數(shù)觀察1次每組小鼠總個數(shù)、荷瘤小鼠數(shù)以及乳頭狀瘤的數(shù)目，每周觀察1次，對比預防組較造模組的抑瘤水平。荷瘤鼠數(shù)=每組產(chǎn)生乳頭瘤的小鼠數(shù)目，平均荷瘤數(shù)=每組小鼠產(chǎn)生乳頭狀瘤的總和/本組小鼠總數(shù)；小鼠腫瘤誘發(fā)率=(每組荷瘤鼠數(shù)/本組小鼠總數(shù)) ×100%，抑瘤率=〔(各組平均荷瘤數(shù)-對照組平均荷瘤數(shù))/對照組平均荷瘤數(shù)〕×100%[4]。

3結果

3.1對小鼠體質(zhì)量變化的影響

如圖1所示,造模組小鼠體質(zhì)量的增長趨勢不明顯，在DMBA丙酮促癌階段甚至有明顯的體質(zhì)量降低現(xiàn)象；預防組小鼠的體質(zhì)量基本保持在持續(xù)上升狀態(tài)，上升的趨勢比較造模組高。造模組：Y=0.021 X+29.50，R2=0.130；預防組：Y=0.060 X+29.39，R2=0.856。

圖1　小鼠體質(zhì)量變化

3.2對小鼠水食變化的影響

如圖2、圖3所示，兩組小鼠的飲水、飲食量都有較大起伏，但預防組的小鼠無論是飲食還是飲水都要少于造模組的小鼠，且預防組趨勢都高于造模組。預防組飲水量：Y=0.009 X+4.730，R2=0.017；造模組飲水量：Y=-0.000 X+6.704，R2=0.000。造模組飲食量：Y=-0.000 X+6.704，R2=0.000；預防組飲食量：Y=0.014 X+7.267,R2=0.095。

圖2　小鼠飲水變化

圖3　小鼠飲食變化

3.3對小鼠瘤(背)溫的影響

如圖4所示，雖然小鼠的體溫不斷變化，但是總體上預防組的小鼠體溫要高于造模組的體溫，且預防組趨勢略高于造模組。造模組：Y=0.006 X+31.68，R2=0.007；預防組：Y=0.008 X+31.87，R2=0.014。

圖4　小鼠瘤(背)溫變化

3.4對小鼠自主活動的影響

如圖5所示，造模組的小鼠的自主活動次數(shù)隨著實驗時間的增長而逐漸減少，而預防組的小鼠的自主活動次數(shù)雖有所下降，但是依舊較之于造模組要高。造模組：Y=0.408 X+112.3，R2=0.525；預防組：Y=-0.274 X+122.8，R2=0.882。

圖5　小鼠自主活動對比

3.5平均荷瘤數(shù)對比

在實驗第10周時，造模組的小鼠平均荷瘤數(shù)為8.57，預防組的小鼠平均荷瘤數(shù)為3.00，可算出川烏水煎液對小鼠的抑瘤率達到65.0%。證明川烏水煎液抑瘤效果較好。

如圖6所示，預防組小鼠的平均荷瘤數(shù)明顯低于造模組小鼠平均荷瘤數(shù)。造模組：Y=0.237 X-6.920，R2=0.683；預防組Y=0.094 X-3.141，R2=0.738。

圖6　小鼠平均荷瘤數(shù)

3.6荷瘤誘發(fā)率

如圖7所示，川烏水煎液可使小鼠長瘤時間延后，并且對小鼠荷瘤數(shù)有一定影響?？梢姡跛逡簩MBA /巴豆油誘發(fā)的小鼠皮膚乳頭狀瘤的形成具有抑制作用，并且對小鼠荷瘤后的抑制效果也較為顯著。

圖7　第10周兩組小鼠瘤生長情況

4討論

皮膚癌是皮膚惡性腫瘤的統(tǒng)稱，包括惡性黑色素瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌等。各國皮膚癌的發(fā)病率不同，但尤以白色人種發(fā)病率較高。皮膚癌產(chǎn)生的原因較為復雜，主要有紫外線、放射線、化學致癌物、個人因素等。由于近些年臭氧層的破壞，紫外線強度大幅度提高，皮膚癌的發(fā)病率逐年上升，皮膚癌的防治研究成為了熱點。

近年來，中藥得到了長足持續(xù)的發(fā)展，尤其是在抗腫瘤方面。國內(nèi)外的學者們通過研究發(fā)現(xiàn)，一些中藥有著很好的抗瘤、抑瘤作用，例如冬蟲夏草、紅豆杉、長春花、黃芪、三七等?？茖W家正在努力研究從中藥中提取有效成分，使其更好地造福人類。

在一些學者[4]的研究中，發(fā)現(xiàn)川烏也具有一定的抗腫瘤作用。在大量的實驗研究中，人們發(fā)現(xiàn)川烏對肝癌、胃癌、食管癌、肺癌、骨癌等一系列癌癥均有一定的抑制作用。我們通過實驗發(fā)現(xiàn)，川烏對誘發(fā)的皮膚癌也有一定的抑制作用。

癌癥的發(fā)生和發(fā)展是多階段、多病因及多基因相互作用的過程,一般要經(jīng)歷3個階段,即始發(fā)階段、促癌階段和演進階段[5]。其中促癌階段是始發(fā)突變細胞克隆后連續(xù)過度增殖的過程, 此階段需時較長且可逆,是癌癥預防理想的靶點[6]。

通過實驗得知，利用川烏的有效成分可以抑制部分腫瘤的生長。而且利用川烏治療疾病，具有療效確切、操作簡便、費用低廉等優(yōu)點。但其整體的循證醫(yī)學研究并不徹底，潛在的作用靶點尚未完全明確，對于有效成分的提取和統(tǒng)一也缺乏一整套的質(zhì)量標準體系[7]。另外，川烏自身也存在著較大的毒性，安全性較差，所以，對于川烏臨床上用于抗癌的方案還有待進一步的研究與探索。在今后，我們可以利用更加先進的提取技術，將川烏中的有效成分更多地分離出來，利用合理的劑型或者更安全合適的配伍以及復方，將川烏對人的毒性降到最低并且發(fā)揮最大的生物利用度，以此來增加川烏對癌癥以致各種疾病的療效。

參考文獻：

[1] Ora Nakash, Itzhak, Levav,et al,Comorbidity of common mental disorders with cancer and their treatment gap: Findings from the World Mental Health Surveys[J]. Psychooncology, 2014,23(1):40-51.

[2] 朱京紅，霍介格. 溫熱藥抗腫瘤機制研究進展 [J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2012,21(12):1364-1366.

[3] 圖雅，張貴君，王淑敏，等. 草烏在中醫(yī)和蒙醫(yī)中應用概述[J]. 世界科學技術：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2008,10(1):113-116.

[4] 白向陽. 川烏的毒性與抗腫瘤作用概述[J]. 實用中醫(yī)藥雜志， 2005,21(2):125-126.

[5] Bertram J S, KoloneI L M, Meyskens F L. Rationale and strategies for chemoprevention of cancer in humans[J]. Cancer Res, 1987,47(11):3012.

[6] 葛化冰，付招娣，孫正，等. 螺旋藻對DMBA/巴豆油誘導小鼠皮膚腫瘤預防作用的研究[J]. 北京口腔醫(yī)學，2004,12(3):135-137.

[7] 王少明，阮君山. 小春花對小鼠二階段皮膚乳頭狀瘤的抑制作用[J]. 中藥材，2008,31(3):418-420.

[責任編輯時 紅]

The inhibitory effect of Radix Aconite on mice two-phase skin papilloma

Intitute of Pharmacy, Pharmaceutical College of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

Abstract:〔Objective〕To evaluate the inhibitory effect of radix aconite two-phase in mice skin papilloma and the role of the radix aconite in cancer chemoprevention. 〔Methods〕Using the classic approach of DMBA/croton oil to induce mice skin papiloma formation of two-phase model. To give a group of mice intragastric administration of radix aconite decoction liquid , compared with another group of mice to infuse distilled water, observe and appraise the change of dynamics, tumor-burdened number, weight, body temperature, autonomic activities, in order to observe and evaluate the chemical carcinogenesis of radix aconite in the different stages. 〔Results〕Radix aconite have inhibiting effect on mice evoked skin papiloma by DMBA/croton oil. 〔Conclusion〕Radix aconite has a strong role in cancer chemoprevention.

Key words:radix aconite; skin papiloma; chemoprevention; anticancer

中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：A

作者簡介：鄭亞秋(1990-)，女，河南商丘人，碩士研究生，從事中藥抗腫瘤藥理學研究工作。 通信作者：杜鋼軍(1971-)，男，河南開封人，博士，教授，從事中藥抗腫瘤藥理學研究工作。

基金項目：國家自然科學基金項目(81173094)；河南省高校青年骨干教師項目(2010GGJS-025)

收稿日期：2015-10-12

文章編號：1672-7606(2016)01-0005-04