◎ 顧菲菲，晉曉峰，程雪芬，吳媛霞

（國家銅鉛鋅及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，安徽 銅陵 244000）

黃酮類化合物廣泛存在于植物的根、皮、葉、果實中，通常以苷類的形式存在，是植物經(jīng)光合作用產(chǎn)生的一類天然物質(zhì)，屬于植物在長期自然選擇過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物。黃酮類化合物泛指兩個具有酚羥基的苯環(huán)（A-與B-環(huán)）通過中央三碳原子相互連結(jié)而成的一系列化合物，其基本母核為2-苯基色原酮[1]。目前黃酮類化合物可分為10多個類別，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的黃酮類化合物達(dá)4 000多種[2]。黃酮類化合物的作用極其廣泛，其藥理性作用有：調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)，對心腦、膽、肝等具有保護(hù)作用；抗炎調(diào)節(jié)免疫、防癌抗病毒作用。其生物性作用有：具有良好的抗氧化活性和清除氧自由基能力；改善皮膚過敏癥狀、吸收紫外輻射、預(yù)防骨質(zhì)疏松、祛痰、提高記憶力、活血化瘀等[3]。

牡丹屬毛茛科芍藥屬木本植物，有“花中之王”的美譽，是重要的景觀植物和資源植物。牡丹籽是牡丹植株的精華結(jié)晶，具有自身獨特的營養(yǎng)成分。牡丹籽油富含不飽和脂肪酸，是生產(chǎn)牡丹皮的副產(chǎn)品牡丹籽經(jīng)壓榨、脫色、脫臭等工藝制作而成。牡丹籽皮占牡丹籽質(zhì)量的1/3，是牡丹籽油生產(chǎn)過程中的中間產(chǎn)物，一般當(dāng)作垃圾處理，不僅污染環(huán)境，還造成資源浪費。但目前國內(nèi)對于牡丹籽皮的研究較少，其中牡丹籽皮總黃酮提取工藝的文獻(xiàn)鮮有報道。本課題采用超聲波提取法提取牡丹籽皮總黃酮，通過對影響因素進(jìn)行正交試驗，確定牡丹籽皮總黃酮的最佳提取工藝，本次實驗研究也為牡丹籽皮的綜合開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

原料為干燥的牡丹籽皮，由銅陵瑞璞牡丹產(chǎn)業(yè)發(fā)展有限公司提供；蘆?。˙R），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；亞硝酸鈉（AR），無錫市展望化工試劑有限公司；硝酸鋁（AR），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鈉（AR），無錫市展望化工試劑有限公司；乙醇（AR），煙臺市雙雙化工有限公司；UV1102紫外可見分光光度計，上海天美儀器公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

準(zhǔn)確稱取9.2 mg干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，置于50 mL容量瓶中，以50%的乙醇溶液配成濃度為0.184 mg/mL的溶液備用。

分別量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0 mL和4 mL于10 mL容量瓶中，并補加50%乙醇至5 mL。加入0.3 mL 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6 min后，加入0.3 mL 5%硝酸鋁溶液，搖勻，靜置6 min；加4 mL 4%氫氧化鈉溶液，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min后，于510 nm波長處測定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程為：

1.2.2 牡丹籽皮總黃酮的提取

黃酮類化合物常用的提取方法有水提取法、有機(jī)溶劑萃取法、微波萃取法、超聲波提取法和超臨界流體萃取法等[4-5]，本研究采用超聲波提取法。影響牡丹籽皮總黃酮提取的因素有很多，本方法應(yīng)用L9（33）正交表，對提取劑（A）、投料比（B）、提取時間（C）三因子在三水平上進(jìn)行優(yōu)選，因素水平見表1。

表 1 L9（33） 因素水平表

精密稱取1.0 g的牡丹籽皮樣品，置于50 mL三角瓶中，加入一定體積和濃度的乙醇溶液，提取一定時間，過濾，殘渣用50%乙醇洗滌2次，過濾，合并濾液，置于100 mL容量瓶中，以50%乙醇定容至100 mL作為樣品溶液待測。

1.2.3 牡丹籽皮總黃酮的測定

取上述待測樣品溶液1 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法進(jìn)行測定，得出牡丹籽皮中總黃酮濃度。樣品中黃酮含量按式（1）進(jìn)行計算。

其中，A為測定用樣液中總黃酮含量，mg；m為樣品質(zhì)量，g；V1為樣品配成溶液時的體積，mL；V2為測定用樣液體積，mL。

2 結(jié)果與討論

為全面考察影響牡丹籽皮總黃酮的提取因素，設(shè)計三因子三水平的正交試驗，結(jié)果見表2。

表2 正交試驗直觀分析結(jié)果表

由直觀分析結(jié)果可確定，超聲波提取牡丹籽皮總黃酮的最優(yōu)提取條件為：A1B2C2，即50%乙醇溶液，料液比1∶20，提取時間1.5 h。各因子對提取率的影響依次為：提取劑＞提取時間＞投料比。在最佳超聲提取條件下所得牡丹籽皮總黃酮提取物含量為7.8%。

目前市面上有許多產(chǎn)品為保持產(chǎn)品營養(yǎng)價值和提高產(chǎn)品穩(wěn)定性在食品中添加合成抗氧化劑，如特丁基對苯二酚（TBHQ）、丁基羥基茴香醚（BHA），這些抗氧化劑在保持產(chǎn)品質(zhì)量上有著顯著效果，但同時對人體的健康有著潛在的威脅。因此，天然抗氧化劑越來越為人所熟知和喜歡，牡丹籽皮總黃酮的提取也就存在著研究的意義。牡丹籽皮作為一種副產(chǎn)品，很具開發(fā)潛力。目前牡丹籽皮總黃酮的提取方法有很多，每種方法都有各自的優(yōu)點，但也存在著提取液量大、溶劑回收率低、成本高等缺點[6]。本研究采用超聲法提取牡丹籽皮總黃酮，提取速度快、耗能低、目標(biāo)成分提取效率高，為進(jìn)一步研究牡丹籽皮總黃酮的提取提供了理論依據(jù)，同時對于牡丹的資源化利用，牡丹籽皮的廢物利用，具有巨大的經(jīng)濟(jì)價值和環(huán)保價值。

參考文獻(xiàn)：

[1]竇勇博.牡丹花黃酮的抗氧化活性研究[J].中國果菜，2016（4）：23-36.

[2]PCH Hollman，MB Katan. Dictary Flavonoids: Intake,Health effects and Bioavailability[J].Food and Chemical Toxicology，1999（9-10）：937-942.

[3]朱 丹，袁 芳，孟 坤等.黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2007（6）：387-389.

[4]張 俞，劉婷婷，劉 洋，等.蒙古櫟種殼多酚的超聲輸助提取及抗氧化能力[J].植物研究，2010（5）：623-628.

[5]林 平，張 瑩，祖元剛，等.核桃楸葉片中總黃酮的最佳提取工藝研究[J].植物研究，2007（5）：616-618.

[6]孟慶煥，王 化，王洪政，等.牡丹種皮黃酮提取及對ABTS自由基清除作用[J].植物研究，2013（4）：504-507.