李趙嘉　郭　冉　夏　輝　申　亮　解　偉　李垚垚　王美雪

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院，秦皇島066003)

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體外培養(yǎng)中硒對(duì)黃曲霉毒素B1損傷凡納濱對(duì)蝦肝胰腺細(xì)胞的影響

李趙嘉郭冉*夏輝申亮解偉李垚垚王美雪

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院，秦皇島066003)

摘要：本試驗(yàn)旨在研究體外培養(yǎng)中硒(Se)對(duì)凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)肝胰腺細(xì)胞抗氧化能力的影響以及對(duì)黃曲霉毒素B1(AFB1)毒性的緩解作用。在體外培養(yǎng)肝胰腺細(xì)胞的基礎(chǔ)上，設(shè)定含不同濃度(0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75 μg/mL)Se的培養(yǎng)液，研究Se對(duì)肝胰腺細(xì)胞抗氧化能力的影響；另用濃度為1 600 μg/L的AFB1侵染細(xì)胞，探究Se對(duì)AFB1毒性的緩解作用。結(jié)果表明：當(dāng)Se濃度處于0～0.45 μg/mL時(shí)，隨著Se濃度的增加，丙二醛(MDA)含量呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，但各個(gè)濃度之間并沒(méi)有顯著差異(P>0.05)，過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力隨著Se濃度的增加而增強(qiáng)，Se濃度為0.45 μg/mL時(shí)GSH-Px活力顯著高于其他濃度(除0.30 μg/mL)時(shí)(P<0.05)；當(dāng)Se濃度處于0.45～0.75 μg/mL時(shí)，隨著MDA含量升高的同時(shí)CAT、GSH-Px活力下降。當(dāng)細(xì)胞受到濃度為1 600 μg/L的AFB1侵染后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，MDA含量表現(xiàn)一直升高的趨勢(shì)，同時(shí)CAT、GSH-Px活力都有一定程度的下降；當(dāng)細(xì)胞受到濃度為1 600 μg/L的AFB1和濃度為0.45 μg/mL的Se共同作用后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，MDA含量有一定程度的改善，CAT、GSH-Px活力得到一定程度的恢復(fù)。由此可見(jiàn)，在體外培養(yǎng)條件下，濃度為0.45 μg/mL的Se有利于提高凡納濱對(duì)蝦肝胰腺細(xì)胞的抗氧化能力，且在一定程度上能緩解AFB1對(duì)肝胰腺細(xì)胞的毒性作用。

關(guān)鍵詞：硒；黃曲霉毒素B1；丙二醛；過(guò)氧化氫酶；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶

硒(Se)作為機(jī)體的一種必需微量元素，是谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的中心元素，因此適量的Se會(huì)提高該酶的活力，進(jìn)而提升機(jī)體的抗氧化能力，清除體內(nèi)因代謝而產(chǎn)生的過(guò)量氧離子，對(duì)細(xì)胞膜起到一定的保護(hù)作用[1]。近幾年有研究表明，含Se酶和含Se活性物質(zhì)等Se不同的功能形式，均可影響到機(jī)體的代謝、免疫調(diào)節(jié)、自由基清除等生理活動(dòng)[2]。機(jī)體對(duì)于腫瘤的抵抗能力主要是來(lái)自抗氧化系統(tǒng)的抗氧化能力[3]，癌癥患者因?yàn)轶w內(nèi)微量元素代謝的失調(diào)以及免疫功能的紊亂，機(jī)體組織便會(huì)因?yàn)槿毖?、器官衰變而產(chǎn)生大量的自由基與氧負(fù)離子，使抗氧化劑的活力受到一定的影響，特別是GSH-Px的表達(dá)將受到限制[2]，當(dāng)機(jī)體內(nèi)的活性氧自由基(ROS)超過(guò)自身清除的能力時(shí)，便會(huì)使機(jī)體進(jìn)入一種氧化應(yīng)激狀態(tài)[4]，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞受到自由基的氧化損傷，從而影響機(jī)體正常生理功能。研究認(rèn)為，GSH-Px可以使過(guò)氧化氫、游離的脂質(zhì)過(guò)氧化物發(fā)生降解，而Se又是GSH-Px的中心元素，因此Se對(duì)提高細(xì)胞的抗氧化損傷能力有著非常重要的作用[5-6]。有試驗(yàn)表明，Se可以減輕黃曲霉毒素B1(AFB1)對(duì)肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化作用的影響，進(jìn)而緩解由于脂質(zhì)過(guò)氧化作用造成的DNA損傷和AFB1的基因毒性[7]。

近幾年，在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物方面，對(duì)Se提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的研究也有了一定的報(bào)道，例如：陳鋒等[8]將添加Se的飼料飼喂凡納濱對(duì)蝦，結(jié)果顯示對(duì)蝦血清中超氧化物歧化酶(SOD)、GSH-Px活力及總抗氧化能力(T-AOC)等抗氧化指標(biāo)均有升高趨勢(shì)；儲(chǔ)霞玲等[9]研究表明，飼料聯(lián)合添加Se和谷胱甘肽(GSH)后凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)要好于不添加組；田文靜[10]以含酵母硒的飼料飼喂中華絨螯蟹時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中Se含量的升高，中華絨螯蟹肝胰腺和血清中GSH-Px的活力呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，而脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量則是呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)；李小霞等[11]使用含有酵母硒的飼料飼喂凡納濱對(duì)蝦，結(jié)果顯示各個(gè)試驗(yàn)組對(duì)蝦肝胰腺中SOD活力、T-AOC均高于對(duì)照組，MDA含量均低于對(duì)照組，且當(dāng)飼料中Se含量為0.84 mg/kg時(shí)對(duì)蝦的增重率和特定生長(zhǎng)率最大；當(dāng)海鱸魚(yú)飼料中Se含量達(dá)到0.4 mg/kg時(shí)其肝臟和血清中GSH-Px的活力最高，且在0～0.4 mg/kg范圍內(nèi)逐漸升高[12]。以上研究結(jié)果表明，飼料中適量的Se可以在一定程度上提高機(jī)體的抗氧化能力。

Boonyaratpalin等[13]研究發(fā)現(xiàn)，AFB1可以使斑節(jié)對(duì)蝦肝胰臟中貯存細(xì)胞萎縮，用含100～2 500 μg/kg AFB1的飼料飼喂8周后，肝胰腺出現(xiàn)病變，先發(fā)生萎縮性變化，再傷害小管上皮細(xì)胞，導(dǎo)致其壞死，當(dāng)提高AFB1濃度時(shí)，肝小管則嚴(yán)重退化；有學(xué)者在25 μg/kg AFB1下觀察到了肝胰腺的組織病變損害現(xiàn)象，且隨AFB1濃度的升高該損害程度加重[14]；也有研究表明發(fā)病的嚴(yán)重與否和AFB1的作用劑量、時(shí)間有著密切的聯(lián)系，炎癥初期管腔間質(zhì)中會(huì)出現(xiàn)血細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)而會(huì)發(fā)展為纖維變性和組織壞死及其邊緣肝小管細(xì)胞壞死，并且會(huì)改變肝胰臟管道結(jié)構(gòu)，直接影響肝臟的吸收、貯存和分泌功能，結(jié)果導(dǎo)致臟器發(fā)生嚴(yán)重炎癥和萎縮，并失去正常機(jī)能[15]。AFB1屬于肝毒素，可以引起肝癌、肝細(xì)胞凋亡等，蝦體內(nèi)ROS的產(chǎn)生可以引起細(xì)胞的凋亡，而過(guò)氧化氫酶(CAT)、SOD等抗氧化酶可以通過(guò)清除ROS來(lái)阻止細(xì)胞的凋亡；同時(shí)，GSH含量常常和細(xì)胞凋亡呈負(fù)相關(guān)，而AFB1可以降低GSH含量，從而進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。AFB1引發(fā)細(xì)胞凋亡實(shí)質(zhì)是破壞細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，如近球上皮細(xì)胞、肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，AFB1裂解肝臟及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)信號(hào)通路中的網(wǎng)狀細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞縮水、膜水泡等形態(tài)變化[16]。

目前，AFB1對(duì)對(duì)蝦肝胰腺氧化損傷的研究大都停留在宏觀及現(xiàn)象觀察水平，對(duì)微觀水平的病理變化，特別是AFB1導(dǎo)致對(duì)蝦肝胰腺氧化損傷的機(jī)理研究，迄今為止，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)系統(tǒng)研究報(bào)道。因此，本試驗(yàn)著重從細(xì)胞水平研究AFB1對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺細(xì)胞抗氧化能力的影響，以便更好地控制AFB1導(dǎo)致的對(duì)蝦肝胰腺損傷，同時(shí)也力求找到飼料中適宜的Se含量，以緩解AFB1對(duì)對(duì)蝦的毒性作用。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)蝦的來(lái)源及飼養(yǎng)

凡納濱對(duì)蝦蝦苗購(gòu)自于河北省滄州市黃驊鑫海生物技術(shù)公司，用隨機(jī)抽樣方法選出長(zhǎng)勢(shì)良好且健壯無(wú)病、平均體重為(0.30±0.02) g的蝦苗，試驗(yàn)開(kāi)始前將所選凡納濱對(duì)蝦放入實(shí)驗(yàn)室的水族箱內(nèi)，以配合飼料作為飼料飼養(yǎng)8周后取肝胰腺細(xì)胞離體培養(yǎng)進(jìn)行試驗(yàn)研究。

1.2藥品及儀器

M199培養(yǎng)基(Gibco)、胎牛血清(Solarbio)、青鏈霉素(100×，Solarbio)、AFB1純品(Sigma)、磷酸鹽緩沖溶液(PBS)、亞硒酸鈉、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、顯微鏡、蒸汽滅菌鍋、制冰機(jī)、超凈工作臺(tái)等。

1.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)

培養(yǎng)液配制：在9 mL M199培養(yǎng)基中加入1 mL胎牛血清，再加入100 μL青鏈霉素，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌。

不同Se濃度對(duì)肝胰腺抗氧化系統(tǒng)的影響：設(shè)培養(yǎng)液中Se的濃度梯度為0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75 μg/mL，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)平行，即將每個(gè)Se濃度下處理的肝胰腺組織放入3個(gè)培養(yǎng)孔，每小時(shí)取1次樣品進(jìn)行測(cè)定。

Se對(duì)AFB1毒性的緩解作用：設(shè)對(duì)照組(培養(yǎng)液中僅添加AFB1)和試驗(yàn)組(培養(yǎng)液中同時(shí)添加AFB1和Se)，培養(yǎng)液中Se濃度為0.45 μg/mL，AFB1濃度為1 600 μg/L，并分別設(shè)置6個(gè)不同的時(shí)間梯度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h)，每個(gè)時(shí)間設(shè)置3個(gè)平行。

1.4肝胰腺細(xì)胞的培養(yǎng)

取個(gè)體大、體色透明、活動(dòng)力強(qiáng)的凡納濱對(duì)蝦，體表用75%酒精進(jìn)行消毒處理，解剖取肝胰腺并去除包膜放入培養(yǎng)皿中，再用適量的PBS清洗3次，加入青鏈霉素浸泡30 min，剪成小于1 mm3的細(xì)胞塊，加入少量培養(yǎng)液吹打至細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，使用微量移液器向24孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔中加4～5滴，然后加入1 mL M199培養(yǎng)基，按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)濃度添加Se或AFB1后，于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)[17]。以上操作均在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，且均為冰水浴環(huán)境。

1.5指標(biāo)測(cè)定方法

MDA含量采用硫代巴比妥酸法測(cè)定；CAT活力采用鉬酸銨可見(jiàn)光法測(cè)定；GSH-Px活力采用二硫代二硝基甲酸法測(cè)定，上述指標(biāo)測(cè)定所用試劑盒均購(gòu)自于南京建成生物工程研究所。

1.6統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用SPSS 17.0分析軟件，經(jīng)單因素方差分析(one-way ANOVA)后，若組間差異顯著，再采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，差異顯著性水平為P<0.05。

2結(jié)果

2.1不同濃度Se對(duì)抗氧化能力的影響

2.1.1對(duì)MDA含量的影響

由圖1可以看出，不同濃度的Se對(duì)MDA含量的影響無(wú)顯著差異(P>0.05)。Se濃度在0～0.45 μg/mL時(shí)MDA含量出現(xiàn)短暫增高后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，當(dāng)Se濃度大于0.45 μg/mL后MDA含量又出現(xiàn)回升趨勢(shì)。

2.1.2對(duì)CAT活力的影響

如圖2所示，Se濃度在0～0.45 μg/mL之間時(shí)，CAT活力隨著Se濃度的增加逐漸增加，但Se濃度在0.60～0.75 μg/mL范圍內(nèi)時(shí)，CAT活力則呈現(xiàn)出降低走勢(shì)，且0.75 μg/mL組與0.15～0.60 μg/mL組之間有顯著差異(P<0.05)，0.30～0.60 μg/mL組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)，以0.45 μg/mL組CAT活力表現(xiàn)為最高。

2.1.3對(duì)GSH-Px活力的影響

如圖3所示，Se濃度在0～0.75 μg/mL之間時(shí)，GSH-Px活力表現(xiàn)為先升高后降低趨勢(shì)，當(dāng)Se濃度為0.45 μg/mL時(shí)，GSH-Px活力最高，并顯著高于其他的濃度(除0.30 μg/mL)時(shí)(P<0.05)，其他濃度間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

數(shù)據(jù)柱(點(diǎn))標(biāo)注相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下圖同。

Value columns (points) with the same or no letters mean no significant difference (P>0.05), while with different letters mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1不同濃度Se對(duì)MDA含量的影響

Fig.1Effect on the MDA content by different

concentrations of Se

圖2　不同濃度Se對(duì)CAT活力的影響

圖3　不同濃度Se對(duì)GSH-Px活力的影響

2.2Se對(duì)AFB1毒性的緩解作用

2.2.1對(duì)MDA含量的影響

如圖4所示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，未添加Se的對(duì)照組MDA含量在0.5～2.0 h內(nèi)基本呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)，之后趨于穩(wěn)定，并且在2.0～3.0 h時(shí)顯著高于0.5 h時(shí)(P<0.05)；雖然添加0.45 μg/mL Se的試驗(yàn)組MDA含量在1.0 h時(shí)有少量增加，但在0.5～3.0 h內(nèi)其隨培養(yǎng)時(shí)間的增加并沒(méi)有產(chǎn)生顯著差異(P>0.05)。

圖4　MDA含量隨培養(yǎng)時(shí)間的變化

2.2.2對(duì)CAT活力的影響

如圖5所示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，對(duì)照組CAT活力表現(xiàn)為逐漸降低的趨勢(shì)，2.5、3.0 h時(shí)顯著低于0.5～1.5 h時(shí)(P<0.05)；而試驗(yàn)組CAT活力則先表現(xiàn)為逐漸升高的趨勢(shì)，在2.5 h時(shí)活力到達(dá)最高值，且與0.50～2.0 h時(shí)存在顯著差異(P<0.05)，在3.0 h時(shí)稍有下降，但與2.5 h時(shí)差異不顯著(P>0.05)。

圖5　CAT活力隨培養(yǎng)時(shí)間的變化

2.2.3對(duì)GSH-Px活力的影響

如圖6所示，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，對(duì)照組GSH-Px活力表現(xiàn)為逐漸降低，且在3.0 h時(shí)顯著低于0.5和1.0 h時(shí)(P<0.05)；而試驗(yàn)組GSH-Px活力則表現(xiàn)為先增加再降低，在1.5 h時(shí)活力到達(dá)最高值，但與其他時(shí)間點(diǎn)并不存在顯著差異(P>0.05)。

圖6　GSH-Px活力隨培養(yǎng)時(shí)間的變化

3討論

機(jī)體健康程度的一個(gè)重要的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)就是其自身抗氧化能力的強(qiáng)弱[18]。機(jī)體擁有一套完整的抗氧化系統(tǒng)，這套防御系統(tǒng)中最主要的便是酶促體系，CAT、GSH-Px又是這一酶促體系中2種主要的抗氧化酶，其活力的高低間接性地影響動(dòng)物體內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化作用的最終代謝產(chǎn)物MDA的含量[19]。因此，抗氧化酶活力的高低可以用來(lái)判斷機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱。

3.1Se對(duì)抗氧化能力的影響

Se作為機(jī)體的一種必需的微量元素，又是GSH-Px的中心元素，因此適量的Se會(huì)提高該酶的活力，從而提升機(jī)體的抗氧化能力。王宏偉[20]在飼料中添加不同濃度的Se來(lái)研究其對(duì)中華米蝦(Caridinadenticulatasinensis)抗氧化酶活力的影響，結(jié)果顯示當(dāng)飼料中Se濃度為0.45 μg/g時(shí)，添加Se組的米蝦細(xì)胞中SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活力要高于不添加Se組；韋宇[21]的試驗(yàn)同樣表明，飼料中Se濃度達(dá)到0.6 mg/kg時(shí)，各個(gè)試驗(yàn)組凡納濱對(duì)蝦細(xì)胞中CAT、GSH-Px等抗氧化酶的活力到達(dá)最大值，而此時(shí)MDA含量則為最小值。本次試驗(yàn)的結(jié)果同樣顯示，在一定的濃度范圍內(nèi)，Se可以提高細(xì)胞中CAT、GSH-Px等抗氧化酶的活力，并降低細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的含量，且最適的濃度為0.45 μg/mL，此結(jié)果與前人研究結(jié)果相符，可以說(shuō)明飼料中添加適量的Se可提高細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)的抗氧化能力，進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。

3.2AFB1對(duì)抗氧化系統(tǒng)的影響

機(jī)體內(nèi)普遍存在著抗氧化劑和助氧化劑，且兩者之間處在動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，以維持正常的機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、免疫競(jìng)爭(zhēng)、抗應(yīng)激等生理現(xiàn)象。但是，有報(bào)道稱(chēng)，霉菌毒素可以打破這一平衡，當(dāng)體內(nèi)攝入霉菌毒素后，肝臟內(nèi)GSH的含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，并且降低助氧化劑的濃度[22]。研究顯示，AFB1感染體外培養(yǎng)的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞致其中毒并導(dǎo)致GSH的消耗[16]；有人用大鼠做過(guò)試驗(yàn)，當(dāng)大鼠攝入AFB1并在體內(nèi)消耗后，其血液中GSH-Px的活力會(huì)降低[23]；同時(shí)，當(dāng)使用2 mg/kg的AFB1對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射，測(cè)得其肝臟中CAT、GSH-Px等抗氧化酶的活力都有降低的趨勢(shì)[24]；芮小麗等[25]對(duì)肉雞的研究表明，飼喂含有AFB1的飼料可以使肉雞肝臟中MDA的含量顯著提高，并且伴隨著GSH-Px等抗氧化酶活力的顯著降低。本試驗(yàn)中，當(dāng)加入高濃度的AFB1后，細(xì)胞中CAT、GSH-Px等抗氧化酶活力均有了不同程度的降低，同時(shí)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的含量卻有增加的趨勢(shì)，可見(jiàn)，此時(shí)細(xì)胞的抗氧化系統(tǒng)受到了AFB1毒性的影響。

3.3Se對(duì)AFB1損傷的緩解作用

近年的報(bào)道表明，飼料中添加Se后可以減緩AFB1對(duì)動(dòng)物機(jī)體的毒性作用，例如：王鐘翊等[26]研究表明Se對(duì)AFB1具有較好的拮抗作用，可以很好的改善動(dòng)物的生長(zhǎng)性能；符晨星等[27]指出Se可以通過(guò)影響AFB1在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)代謝的關(guān)鍵酶的活力來(lái)改善機(jī)體的新陳代謝，從而緩解AFB1的毒性；郭劍英[28]同樣使用Se來(lái)緩解AFB1對(duì)肉雞的毒性作用，結(jié)果顯示Se可以使肝組織中的總超氧化物歧化酶(T-SOD)、CAT等酶的活力升高，使脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的含量顯著下降；Chen等[29]研究表明，肉雞飼糧中添加亞硒酸鈉后可以阻止因AFB1誘導(dǎo)而產(chǎn)生的體液免疫功能的損傷，增加法氏囊相對(duì)重量以及血清中免疫球蛋白數(shù)量，改善組織病理學(xué)損傷狀況；Parveen等[30]指出，硒代蛋氨酸可以減緩AFB1給腎細(xì)胞帶來(lái)的氧化應(yīng)激壓力，當(dāng)硒代蛋氨酸濃度在1～4 mg/kg之間時(shí)，細(xì)胞中MAD含量顯著減少，同時(shí)GSH含量和GSH-Px活力顯著增加；芮小麗等[25]的研究同樣表明，在含有AFB1的飼料中加入適量的Se時(shí)，機(jī)體的抗氧化酶CAT、GSH-Px等的活力增強(qiáng)且表達(dá)增多，MDA的含量降低，機(jī)體的抗氧化能力也隨之增強(qiáng)。本次試驗(yàn)的結(jié)果表明，當(dāng)加入適量的Se后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞中MDA含量有一定程度的改善，抗氧化酶CAT、GSH-Px的活力得到一定水平的恢復(fù)。由此可以推斷，適量的Se可以較好的緩解AFB1對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺細(xì)胞的毒性作用。

隨著Se的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值被人類(lèi)發(fā)現(xiàn)之后，對(duì)其的研究愈發(fā)深入，特別是在關(guān)于動(dòng)物黃曲霉毒素中毒防治方面，由于GSH-Px的活力中心為硒半胱氨酸，同時(shí)又是細(xì)胞膜上一種重要的酶，因此Se可能通過(guò)對(duì)GSH-Px活力的影響來(lái)保護(hù)細(xì)胞膜的完整性與流動(dòng)性，同時(shí)降低或消除AFB1對(duì)細(xì)胞的毒性，保護(hù)肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及功能免遭AFB1的損害[31]；同時(shí)，GSH-Px作為細(xì)胞內(nèi)酶性抗氧化系統(tǒng)的主要成分，可催化過(guò)氧化脂質(zhì)分解，防止脂質(zhì)過(guò)氧化作用所引起的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的損害。因此，通過(guò)添加外源Se可以提高凡納濱對(duì)蝦機(jī)體對(duì)于AFB1毒性的緩解，并增強(qiáng)其抗氧化系統(tǒng)的抗氧化能力，修復(fù)毒素的損傷，上述研究結(jié)論無(wú)論是在理論指導(dǎo)上還是在實(shí)踐養(yǎng)殖中都具有很好的意義。

4結(jié)論

適量的Se可以改善凡納濱對(duì)蝦肝胰腺細(xì)胞的抗氧化能力，且最適的濃度為0.45 μg/mL；同時(shí)，0.45 μg/mL的 Se可以使得經(jīng)AFB1侵染的肝胰腺細(xì)胞中CAT、GSH-Px等抗氧化酶活力得到一定水平的恢復(fù)，并在一定程度上改善細(xì)胞中MDA含量，緩解AFB1對(duì)細(xì)胞的毒害。

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(責(zé)任編輯菅景穎)

Effects of Selenium on Hepatopancreas Cells Damaged by Aflatoxin B1ofLitopenaeusvannameiinVitro

LI ZhaojiaGUO Ran*XIA HuiSHEN LiangXIE WeiLI YaoyaoWANG Meixue

(Ocean College, Agricultural University of Hebei, Qinhuangdao 066003, China)

Abstract:The effects of selenium (Se) on antioxidant capacity and relieving toxicity of aflatoxin B1(AFB1) of Litopenaeus vannamei hepatopancreas cells were evaluated in vitro. A total of 6 concentrations of Se were prepared on the basis of hepatopancreas cells in vitro, which were 0, 0.15, 0.30, 0.45, 0.60 and 0.75 μg/mL, respectively, to evaluate the antioxidant capacity of hepatopancrease cells of shrimp. The same treatment was conducted to the infected cells by 1 600 μg/L AFB1, to observe the relieving toxicity effect of Se. The results showed that malondialdehyde (MDA) content showed a decreased trend with Se concentration increased from 0 to 0.45 μg/mL, but there was no significant difference in all concentrations (P>0.05). The activities of catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-Px) were strengthen with the Se element concentration increased from 0 to 0.45 μg/mL, and the activity of GSH-Px in 0.45 μg/mL was significantly higher than in other concentrations except 0.30 μg/mL (P<0.05). As the MDA content increased, the CAT and GSH-Px activities declined, when the concentrations of Se were in 0.45 to 0.75 μg/mL. When cells were infected with 1 600 μg/L AFB1, the content of MDA had a rising trend, and the activities of CAT and GSH-Px had a downward trend with the culture time prolonged. When cells were subjected to the interaction of 1 600 μg/L AFB1 and 0.45 μg/mL Se, the content of MDA had a certain degree of improvement, and the activities of CAT and GSH-Px to restore a certain level with the culture time prolonged. So, 0.45 μg/mL of Se is the optimal concentration, which can improve the antioxidant capacity of Litopenaeus vannamei hepatopancreas cells in vitro. And to a certain extent, 0.45 μg/mL Se can alleviate toxicity effect of AFB1 on hepatopancreas cells in vitro.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(1)：274-280]

Key words:selenium; aflatoxin B1; malondialdehyde; catalase; glutathione peroxidase

*Corresponding author, professor, E-mail: toguoran@163.com

中圖分類(lèi)號(hào)：S917；S963

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-267X(2016)01-0274-07

作者簡(jiǎn)介：李趙嘉(1989—)，男，河北唐山人，碩士研究生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料學(xué)。E-mail: tofriendzhaojia@163.com*通信作者：郭冉，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: toguoran@163.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(31202010)；河北省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃重點(diǎn)基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(14967117D)

收稿日期：2015-07-18

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.01.035