楊接來　程冬冬　朱斌　閆明霞　姚明　楊慶誠

200233，　　上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院骨科(楊接來、程冬冬、朱斌、楊慶誠)；200032，　　上海市腫瘤研究所(閆明霞、姚明)

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XBP1在氯化鈷誘導(dǎo)骨肉瘤細胞缺氧環(huán)境下抗凋亡作用實驗研究

楊接來程冬冬朱斌閆明霞姚明楊慶誠

200233，上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院骨科(楊接來、程冬冬、朱斌、楊慶誠)；200032，上海市腫瘤研究所(閆明霞、姚明)

【摘要】目的探討在氯化鈷誘導(dǎo)骨肉瘤細胞缺氧情況下，X盒結(jié)合蛋白1(XBP1)在骨肉瘤細胞中表達量的變化、其對細胞凋亡的影響及與低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系。方法通過氯化鈷誘導(dǎo)骨肉瘤MNNG、MG-63細胞達到模擬缺氧狀態(tài)，通過實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測不同時間、不同氯化鈷濃度下HIF-1α和XBP1的表達情況；采用流式細胞儀檢測骨肉瘤細胞凋亡率；采用siRNA干擾技術(shù)，下調(diào)XBP1。實驗將骨肉瘤細胞分為干擾組(經(jīng)XBP1 siRNA轉(zhuǎn)染骨肉瘤細胞)和空白對照組(未經(jīng)XBP1 siRNA轉(zhuǎn)染骨肉瘤細胞)。結(jié)果XBP1表達具有氯化鈷濃度和時間依賴性：一定范圍內(nèi)，隨著氯化鈷濃度增高和時間延長，XBP1表達升高；敲除XBP1后，干擾組骨肉瘤細胞凋亡率明顯高于對照組(P>0.05)；PCR檢測 HIF-1α及下游靶基因mRNA表達無明顯變化(P<0.05)。結(jié)論XBP1在氯化鈷誘導(dǎo)缺氧的骨肉瘤細胞中表達明顯增高，其對骨肉瘤細胞在缺氧環(huán)境下抗凋亡有明顯作用，其抗凋亡作用與HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路無直接關(guān)聯(lián)，具體機制有待進一步研究。

【關(guān)鍵詞】骨肉瘤；X盒結(jié)合蛋白1；低氧誘導(dǎo)因子-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路；氯化鈷；缺氧

惡性腫瘤的形成原因為腫瘤細胞無限增殖，細胞增殖過快必將導(dǎo)致局部組織營養(yǎng)不足。腫瘤細胞產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，激活各種適應(yīng)性通路，其中由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜感受器肌醇需要酶(IRE)1及其下游底物X盒結(jié)合蛋白(XBP)1介導(dǎo)的未折疊蛋白系統(tǒng)或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)為非常重要的適應(yīng)性通路[1]。XBP1參與多種生理、病理過程，如脂肪形成和脂質(zhì)代謝，在調(diào)控未折疊蛋白方面發(fā)揮重要作用[2]。XBP1在某些腫瘤形成過程中也起著重要作用[3-4]。缺氧為導(dǎo)致實體瘤內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的常見因素之一。多項研究[5]表明，腫瘤缺氧預(yù)示著更高的局部復(fù)發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率，以及更低的遠期生存率。抗腫瘤藥物的療效與缺氧密切相關(guān)：一方面，藥物在缺氧缺血組織中很難達到有效濃度，對腫瘤細胞的殺傷力下降；另一方面，缺氧環(huán)境能夠濾出惡性程度更高和轉(zhuǎn)移潛能更大的腫瘤細胞，進而使腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥性。研究[4]表明，XBP1可通過低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進腫瘤形成，在三陰性乳腺癌中，XBP1與HIF-1α不直接發(fā)生作用，兩者在細胞內(nèi)共同表達，共同作用于HIF-1α下游的靶分子，進而發(fā)揮相應(yīng)的促癌作用。近年來，關(guān)于HIF-1α在促腫瘤增殖、腫瘤轉(zhuǎn)移、血管形成、耐藥等方面的研究較多。作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的應(yīng)激分子，XBP1在缺氧環(huán)境下對腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要作用，但XBP1在骨肉瘤中的作用及參與的調(diào)節(jié)機制尚未闡明。本文旨在通過氯化鈷化學(xué)誘導(dǎo)骨肉瘤MNNG、MG-63細胞缺氧研究XBP1在骨肉瘤細胞缺氧狀態(tài)下的抗凋亡作用，進而探討相應(yīng)作用機制。

1材料與方法

1.1材料

細胞株、試劑和主要儀器：骨肉瘤細胞株MNNG、MG-63細胞(上海中科院細胞庫)；Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)液(DMEM)、新生胎牛血清(美國Hyclone公司)；氯化鈷六水合物(美國Sigma公司)；實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)試劑盒(日本TaKaRa公司)；FACSort 流式細胞儀(美國BD公司)。

siRNA 試劑：純化siRNA(上海拓然生物科技有限公司)。XBP1轉(zhuǎn)染組siRNA序列：正義鏈5′-CACCCUGAAUUCAUUGUCUdTdT-3′，反義鏈5′-AGACAAUGAAUUCAGGGUGdTdT-3′。對照組siRNA序列：正義鏈5′-UAGCGACUAAA-CACAUCAAUU-3′，反義鏈5′-UUGAUGUGU-UAGUCGCUAUU-3′。

1.2實驗分組

對照組：未經(jīng)XBP1 siRNA轉(zhuǎn)染的MNNG細胞和MG-63細胞。

實驗組：即干擾組，經(jīng)XBP1 siRNA轉(zhuǎn)染的MNNG細胞和MG-63細胞。

1.3方法

1.3.1細胞培養(yǎng)

在5%CO2、37℃的培養(yǎng)箱中用含10%胎牛血清和雙抗DMEM培養(yǎng)液(青霉素100 U/mL、鏈霉素100 U/mL)進行細胞培養(yǎng)。采用0.25%的胰酶消化、傳代。

1.3.2氯化鈷誘導(dǎo)細胞缺氧

培養(yǎng)液中加入不同濃度氯化鈷(50、150、200、400 uM)，培養(yǎng)細胞24 h，檢測目的分子XBP1及HIF-1α表達量變化。在最佳濃度(MNNG細胞為200 uM, MG-63細胞為50 uM)下取不同時間段(6、12、18、24、48 h)檢測目的分子表達。

1.3.3定量和純度檢測

實時定量PCR Trizol法提取總RNA，用分光光度計進行定量和純度檢測。①逆轉(zhuǎn)錄：將逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)反應(yīng)液充分混勻，放置于PCR儀上，反應(yīng)條件為37℃、15 min，85℃、5 s,將得到的cDNA儲存于-20℃條件下備用。②逆轉(zhuǎn)錄PCR：將逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA原液以1∶10的比例稀釋，采用SYBR Premix Ex Taq Kit(寶生物染料法熒光定量試劑盒),各基因引序列見表1。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性10 s，共1個循環(huán)；95℃、5 s，60℃、31 s，共40個循環(huán)。③定量：以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參照，采用2-△△Ct法，計算每個基因的相對表達量。對溶解曲線進行分析，確定擴增產(chǎn)物為單一的目的片段。實驗重復(fù)3次。

表1　各基因引物序列

1.3.4siRNA轉(zhuǎn)染

①鋪板：將骨肉瘤細胞按每孔2×105個鋪于六孔板，待細胞貼壁。②稀釋：使用進口無菌槍頭及離心管，吸出完全培養(yǎng)液，每孔加入1.5 mL純DMEM培養(yǎng)液。取5 μL siRNA用250 μL純DMEM孵育。另取5 μL lipo 2000轉(zhuǎn)染試劑加入250 μL純DMEM培養(yǎng)液。③轉(zhuǎn)染：將上面2種孵育培養(yǎng)液均勻混合，靜置20 min，滴至六孔板，輕輕搖勻。④換液：轉(zhuǎn)染后6 h更換新鮮完全培養(yǎng)液，培養(yǎng)48 h，缺氧處理(MNNG細胞為200 uM, MG-63細胞為50 uM)24 h后進行下一步實驗。

1.3.5檢測細胞凋亡率

采用Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡率，具體步驟如下。①鋪板：骨肉瘤細胞按每孔4.0×105個鋪于六孔板，待細胞貼壁。②消化：胰酶消化貼壁的MNNG及MG-63細胞，用1 mL磷酸鹽緩沖液(PBS)吹打MNNG及MG-63細胞并轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管，以2000 rpm離心5 min，棄PBS。③染色：每管加100 μL結(jié)合液吹打細胞，各加 5 μL Annexin V 及 5 μL PI染液，室溫孵育15 min，避光操作。④流式檢測：各管加 400 μL結(jié)合液，吹打混勻，轉(zhuǎn)移至流式管檢測凋亡率。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

2結(jié)果

2.1氯化鈷誘導(dǎo)缺氧后HIF-1α mRNA變化

HIF-1α mRNA在常氧下表達較低，接受氯化鈷誘導(dǎo)缺氧后其相對表達量發(fā)生變化(圖1)。

圖1氯化鈷誘導(dǎo)缺氧后HIF-1α mRNA變化a. MNNG細胞在氯化鈷濃度為200 uM情況下，隨時間推移，其HIF-1α表達量變化b. MG-63細胞在氯化鈷濃度為50 uM情況下，隨時間推移，其HIF-1α表達量變化c. MNNG細胞經(jīng)不同濃度氯化鈷處理24 h，隨氯化鈷濃度增加，其HIF-1α表達量變化d. MG-63細胞經(jīng)不同濃度氯化鈷處理24 h，隨氯化鈷濃度增加，其HIF-1α表達量變化

2.2氯化鈷誘導(dǎo)缺氧后XBP1 mRNA變化

相比于HIF-1α，缺氧導(dǎo)致的XBP1變化相對滯后，對缺氧引起變化的閾值更高,且MG-63細胞對氯化鈷誘導(dǎo)的缺氧更敏感(下頁圖2)。

2.3對比結(jié)果

流式細胞儀檢測缺氧條件下抑制XBP1表達對細胞凋亡的影響結(jié)果顯示：在氯化鈷導(dǎo)致缺氧處理24 h后，干擾組凋亡率明顯低于對照組(P<0.05，下頁圖3)。圖3a、3b、3d、3e為細胞流式凋亡圖，采用PI和Annexin V雙染色法，G1象代表壞死細胞，G2象代表中晚期凋亡細胞，G3象代表正?；罴毎?，G4代表早期凋亡細胞。圖3c為MNNG細胞各象比例的柱狀圖，其中干擾組的中晚期凋亡率(G2)明顯高于對照組；圖3f為MG-63細胞各象比例的柱狀圖，其中干擾組的中晚期凋亡率(G2)明顯高于對照組。

圖2氯化鈷誘導(dǎo)缺氧后XBP1 mRNA變化a. MNNG細胞在氯化鈷濃度為200 uM情況下，隨時間推移，其XBP1表達量變化b.MG-63細胞在氯化鈷濃度為 50 uM情況下，隨時間推移，其XBP1表達量變化c. MNNG細胞經(jīng)不同濃度氯化鈷處理24 h，隨氯化鈷濃度增加，其XBP1表達量變化d. MG-63細胞經(jīng)不同濃度氯化鈷處理24 h，隨氯化鈷濃度增加，其XBP1表達量變化

圖3MNNG細胞和MG-63細胞凋亡情況a. 對照組MNNG細胞凋亡情況b. 干擾組MNNG細胞凋亡情況c. MNNG細胞各象比例的柱狀圖d. 對照組MG-63細胞凋亡情況e. 干擾組MG-63細胞凋亡情況f. MG-63細胞各象比例的柱狀圖

*表示P<0.05

2.4氯化鈷抑制XBP1 mRNA表達對HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上下游的影響

逆轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果顯示，氯化鈷處理24 h后，干擾組和對照組HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的靶基因表達量無明顯差異(P>0.05，圖4、5)。下調(diào)MNNG細胞中XBP1表達(圖4a)，對照組和干擾組HIF-1α相對表達量無明顯變化，HIF-1α下游分子PDK1、VEGFA、CAIX、PGK1相對表達量變化不明顯(圖4b～4f)。下調(diào)MG-63細胞中XBP1表達(圖5a)，對照組和干擾組HIF-1α相對表達量無明顯變化,HIF-1α下游分子PDK1、VEGFA、CAIX、PGK1相對表達量的變化不明顯(圖5b～5f)。

圖4　氯化鈷抑制XBP1 mRNA表達對MNNG細胞中HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上下游的影響

*表示P<0.05

圖5　氯化鈷抑制XBP1 mRNA表達對MG-63細胞中HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上下游的影響

*表示P<0.05

3討論

骨肉瘤是最常見的好發(fā)于青少年的骨惡性腫瘤之一，其發(fā)生與腫瘤微環(huán)境改變、癌基因突變等因素有關(guān)，但具體機制尚未明確[6]。XBP1作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的未折疊蛋白，在許多細胞正常代謝及病理過程中都發(fā)揮重要作用。正常情況下，XBP1的持續(xù)表達對漿細胞分化、脂質(zhì)代謝等活動起重要作用[2,7]；病理狀態(tài)下，XBP1對動脈粥樣硬化、缺血性疾病及癌癥的發(fā)生發(fā)展起重要作用[1]。研究[3,8]表明，在骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)中XBP1高表達對破骨細胞生成有重要作用；而多發(fā)性骨髓瘤的重要成分為BMSC，因此XBP1過表達對多發(fā)性骨髓瘤具有促進作用，其有望成為多發(fā)性骨髓瘤的有效治療靶點。其他腫瘤如肝癌和結(jié)腸癌中，也存在XBP1的激活及其促癌作用的報道，但具體機制尚不清楚[9]。

研究[10]表明，XBP1可通過磷酸酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/糖原合酶激酶-3β/E2F轉(zhuǎn)錄因子2(P13k/Akt-1/GSK3β/E2F2)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進內(nèi)皮細胞增殖和新生血管形成。另一項研究[11]表明，XBP1可與組蛋白去乙酰(HDAC)3一起通過核因子紅細胞衍生物(Nrf)-2介導(dǎo)的血紅素加氧酶(HO)-1和哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)依賴的Akt-1蛋白，調(diào)控內(nèi)皮細胞抵抗氧化應(yīng)激。在骨代謝方面，XBP1能夠調(diào)節(jié)侏儒相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Runx2，對成骨細胞和軟骨細胞分化起作用[12]。雖然以上研究均針對正常細胞，但可為XBP1在腫瘤中的研究提供更多思路。

HIF-1α對多種腫瘤具有促進作用，尤其在骨肉瘤中的作用已有報道[13-14]。HIF-1α對于腫瘤應(yīng)對缺氧環(huán)境起著非常重要的作用，同樣作為應(yīng)激相關(guān)分子，XBP1在細胞缺氧、缺糖等條件下應(yīng)激反應(yīng)表達也會增加。早期研究[15]表明，XBP1對人纖維肉瘤細胞的生長必不可少，且缺氧環(huán)境下XBP1可減少細胞凋亡，對腫瘤細胞具有保護作用。腫瘤細胞單憑HIF-1α升高不足以抵抗缺氧等應(yīng)激反應(yīng)，只有與XBP1協(xié)同作用，抵抗應(yīng)激作用才會增強。缺氧環(huán)境下XBP1和HIF-1α的表達均升高，以往研究認為兩者是獨立的，可能通過不同機制通路發(fā)揮作用，但近期研究表明，XBP1與HIF-1α在三陰性乳腺癌中存在一定交集。

盡管XBP1在腫瘤中有一定研究，但在骨肉瘤中的報道卻較少[16]。本研究采用氯化鈷構(gòu)建骨肉瘤缺氧模型，在通過不同氯化鈷濃度和不同時間處理后，發(fā)現(xiàn)XBP1 mRNA的表達明顯升高，與HIF-1α升高趨勢相仿，雖然XBP1 mRNA對缺氧的敏感性遜于HIF-1α，但其升高后維持時間長于HIF-1α，推測XBP1在骨肉瘤細胞中應(yīng)對極度缺氧環(huán)境時更具優(yōu)勢。凋亡實驗表明，XBP1干擾組的凋亡率明顯高于對照組，推測XBP1對骨肉瘤細胞在缺氧環(huán)境中具有保護作用。

為了進一步闡述XBP1在骨肉瘤細胞中抵抗缺氧的相關(guān)機制，探討其與HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系，在缺氧模擬的骨肉瘤細胞中下調(diào)XBP1 ,結(jié)果并未發(fā)現(xiàn)HIF-1α及下游靶基因有明顯變化，推測骨肉瘤細胞在應(yīng)對缺氧等應(yīng)激時，XBP1和HIF-1α升高可能是一個獨立過程，與之前在其他腫瘤的報道一致，單憑HIF-1α激活不足以抵抗缺氧等應(yīng)激反應(yīng)，XBP1在骨肉瘤應(yīng)對缺氧時發(fā)揮的作用機制可能與HIF-1α信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路無直接關(guān)聯(lián)。其他信號通路如Nrf-2/Ho-1、P13k/Akt等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在內(nèi)皮細胞中有所報道，但是否在骨肉瘤細胞中起作用，還有待驗證。

綜上所述，缺氧環(huán)境下XBP1在骨肉瘤細胞中的表達明顯升高，且對骨肉瘤細胞抵抗缺氧具保護作用，推測XBP1可促進骨肉瘤發(fā)展，有望為臨床骨肉瘤靶向治療提供一種新思路。

參考文獻

[ 1 ]Jiang D, Niwa M, Koong AC. Targeting the IRE1α-XBP1 branch of the unfolded protein response in human diseases[J]. Semin Cancer Biol, 2015, 33:48-56.

[ 2 ]Cho YM, Kwak SN, Joo NS, et al. X-box binding protein 1 is a novel key regulator of peroxisome proliferator-activated receptor γ2[J]. FEBS J, 2014, 281(22):5132-5146.

[ 3 ]Xu G, Liu K, Anderson J, et al. Expression of XBP1s in bone marrow stromal cells is critical for myeloma cell growth and osteoclast formation[J]. Blood, 2012, 119(18):4205-4514.

[ 4 ]Chen X, Iliopoulos D, Zhang Q, et al. XBP1 promotes triple-negative breast cancer by controlling the HIF1α pathway[J]. Nature, 2014, 508(7494):103-107.

[ 5 ]Zeng W, Liu P, Pan W, et al. Hypoxia and hypoxia inducible factors in tumor metabolism[J]. Cancer Lett, 2015, 356(2 Pt A):263-267.

[ 6 ]韓修國，湯亭亭. 腫瘤微環(huán)境對骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的影響[J]. 國際骨科學(xué)雜志, 2015, 36(3):168-171.

[ 7 ]Bettigole SE, Lis R, Adoro S, et al. The transcription factor XBP1 is selectively required for eosinophil differentiation[J]. Nat Immunol, 2015, 16(8):829-837.

[ 8 ]Mimura N, Fulciniti M, Gorgun G, et al. Blockade of XBP1 splicing by inhibition of IRE1α is a promising therapeutic option in multiple myeloma[J]. Blood, 2012, 119(24):5772-5781.

[ 9 ]Kim H, Bhattacharya A, Qi L. Endoplasmic reticulum quality control in cancer: friend or foe[J]. Semin Cancer Biol, 2015, 33:25-33.

[10]Zeng L, Xiao Q, Chen M, et al. Vascular endothelial cell growth-activated XBP1 splicing in endothelial cells is crucial for angiogenesis[J]. Circulation, 2013, 127(16):1712-1722.

[11]Martin D, Li Y, Yang J, et al. Unspliced X-box-binding protein 1 (XBP1) protects endothelial cells from oxidative stress through interaction with histone deacetylase 3[J]. J Biol Chem, 2014, 289(44):30625-30634.

[12]Liberman M, Johnson RC, Handy DE, et al. Bone morphogenetic protein-2 activates NADPH oxidase to increase endoplasmic reticulum stress and human coronary artery smooth muscle cell calcification[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2011, 413(3):436-441.

[13]Hu T, He N, Yang Y, et al. DEC2 expression is positively correlated with HIF-1 activation and the invasiveness of human osteosarcomas[J]. J Exp Clin Cancer Res, 2015, 34:22.

[14]Yang QC, Zeng BF, Dong Y, et al. Overexpression of hypoxia-inducible factor-1alpha in human osteosarcoma: correlation with clinicopathological parameters and survival outcome[J]. Jpn J Clin Oncol, 2007, 37(2):127-134.

[15]Romero-Ramirez L, Cao H, Nelson D, et al. XBP1 is essential for survival under hypoxic conditions and is required for tumor growth[J]. Cancer Res, 2004, 64(17):5943-5947.

[16]Fan Q, Hu Y, Pang H, et al. Melittin protein inhibits the proliferation of MG63 cells by activating inositol-requiring protein-1α and X-box binding protein 1-mediated apoptosis[J]. Mol Med Rep, 2014, 9(4):1365-1370.

(收稿：2015-11-18；修回：2015-12-14)

(本文編輯：李昱霏)

Experimental study of the anti-apoptosis effect of XBP1s on osteosarcoma cells under CoCl2-induced hypoxic conditionYANGJie-lai1,CHENGDong-dong1,ZHUBin1,YANMing-xia2,YAOMing2,YANGQing-cheng1.

DepartmentofOrthopaedics,theSixthPeople’sHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversity1,Shanghai200233,China；ShanghaiCancerInstitute2,Shanghai200032,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression level, anti-apoptotic effect and association with hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α) signaling of X-box binding protein 1 (XBP1s) in osteosarcoma cells under CoCl2-induced hypoxic condition. Methods CoCl2 was used to simulate hypoxic environment for MNNG and MG-63 cells. The expression of XBP1s and HIF-1α mRNA of osteosarcoma cells were detected by real-time polymerase chain reaction (PCR) for treatment of different CoCl2 concentration and time span. Flow cytometry was utilized to measure the apoptotic rate of osteosarcoma cells. The siRNA interfering technique was used to reduce the expression of XBP1s. The osteosarcoma cells were divided into the XBP1s-siRNA transfected group and the un-transfected group. Results XBP1s expression was CoCl2-concentration and time-dependent, which increased with the raised CoCl2 concentration and prolonged time in a certain range. After knockdown of XBP1s, the cell apoptotic rate of osteosarcoma cells in the hypoxic group was significantly higher than that in the control group (P>0.05). However, the PCR results showed that there was no significant changes of HIF-1α and its downstream targeted genes after knockdown of XBP1s (P<0.05). Conclusion XBP1s could be increased remarkably in osteosarcoma cells after CoCl2-induced hypoxic treatment. It has anti-apoptotic effects on osteosarcoma cells under hypoxic condition. However, there is little relationship between XBP1s and HIF-1α signaling pathway. The specific mechanism for XBP1s acting as an anti-apoptotic gene in osteosarcoma is needed further deeper investigation.

【Key words】Osteosarcoma; X-box binding protein 1;Hypoxia inducible factor-1α signaling pathway; CoCl2; Hypoxic

Corresponding author:YANG Qing-chenE-mail: tjyqc@163.com

DOI：10.3969/j.issn.1673-7083.2016.02.013

通信作者：楊慶誠E-mail: tjyqc@163.com