劉　韻　權(quán)效珍　覃小敏　蘭艷麗

441021 湖北文理學(xué)院附屬襄陽市中心醫(yī)院

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卵巢癌新輔助治療對(duì)lncRNA差異表達(dá)的影響

劉韻權(quán)效珍覃小敏蘭艷麗

441021 湖北文理學(xué)院附屬襄陽市中心醫(yī)院

【摘要】目的探究卵巢癌新輔助治療對(duì)lncRNA差異表達(dá)的影響。方法采用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)分析lncRNA PVT1在卵巢癌和相鄰非腫瘤組織中的表達(dá)水平。Kaplan-Meier生存分析PVT1表達(dá)與患者生存率的相關(guān)性。單因素和多因素Cox回歸分析PVT1表達(dá)的預(yù)后意義。結(jié)果相比鄰近非腫瘤組織，PVT1在卵巢癌組織中的表達(dá)顯著增強(qiáng)。PVT1表達(dá)與臨床分期和N分級(jí)(P<0.05)有關(guān)。高PVT1表達(dá)水平患者總生存時(shí)間較短。單因素和多因素Cox回歸分析表明，PVT1可能是總體生存率較低患者的獨(dú)立預(yù)后因素(P<0.05)。結(jié)論lncRNA PVT1在卵巢癌組織中的表達(dá)與腫瘤進(jìn)展相關(guān)，PVT1可作為一個(gè)潛在的分子生物標(biāo)記物，用于預(yù)測(cè)卵巢癌患者的預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】卵巢癌；長(zhǎng)非編碼RNA；PVT1；預(yù)測(cè)

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:384～386)

卵巢癌，子宮頸癌以及子宮體癌是女性常見的3種惡性生殖器腫瘤。新輔助化療(neoadjuvant chemotherapy,NACT)治療晚期卵巢癌已有十余年歷史，并且其應(yīng)用日趨廣泛[1]。長(zhǎng)非編碼RNA(lncRNA)是1種RNA分子，其具有200多個(gè)核苷酸，并且不翻譯蛋白質(zhì)。IncRNAs往往表現(xiàn)在疾病，組織或發(fā)育階段，其特異性的方式使這些分子成為了治療靶。越來越多的證據(jù)表明lncRNAs 在腫瘤的發(fā)生過程中具有致癌或抑癌作用[2]。人類PVT1基因編碼lncRNA，且定位于染色體8q24上。最近的研究表明，lncRNA PVT1在胃癌，肝細(xì)胞癌和結(jié)腸直腸癌的表達(dá)上調(diào)，表明它在腫瘤的發(fā)展和進(jìn)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本文結(jié)合以上研究，旨在探究卵巢癌新輔助治療對(duì)lncRNA的差異表達(dá)的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1一般資料

回顧性分析2010年-2013年收治的卵巢腫瘤漿液性腺癌患者85例臨床資料，年齡29～78歲，平均53歲。采用新輔助化療+腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)。收集原發(fā)腫瘤和鄰近非腫瘤組織。腫瘤和非腫瘤組織由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理學(xué)家證實(shí)。存活患者中位隨訪時(shí)間為10.2個(gè)月。納入標(biāo)準(zhǔn)：確診卵為巢腫瘤漿液性腺癌；術(shù)后全程化療至少8個(gè)療程；無感染性疾病、糖尿??；高血壓；肝腎甲狀腺功能異常以及自身免疫性疾病等。本研究遵循第7版TNM惡性腫瘤的分期指導(dǎo)原則。

1.2治療方法

化療方案主要為PC方案和PT方案。PC方案為：順鉑75 mg/m2，環(huán)磷酰胺750 mg/m2，每3～4周重復(fù)。PT方案為：順鉑75 mg/m2，泰素135 mg/m2，每3～4周重復(fù)。NACT(neoaduvant chemotherapy,新輔助化療)組采用PC方案27例，PT方案24例，另3例開始采用PC方案，因療效不明顯而改用PT方案。用藥周數(shù)：術(shù)前3～6個(gè)周期，平均3.7個(gè)周期；術(shù)后2～6個(gè)周期，平均2.6個(gè)周期，總計(jì)用藥平均6.3個(gè)周期，化療取得滿意效果后采用減瘤術(shù)?；熗瓿膳c手術(shù)間隔時(shí)間1～4個(gè)月，平均1.3個(gè)月。

1.3定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QRT-PCR)

Trizol試劑從組織中提取總RNA[Invitrogen生命技術(shù)公司，卡爾斯巴德，加利福尼亞州(CA)和美國(USA)]，采用隨機(jī)引物和莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(Invitrogen Life Technologies公司，CA，和美國)。實(shí)時(shí)PCR通過標(biāo)準(zhǔn)的SYBR Green PCR試劑盒進(jìn)行，PCR儀為美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)的7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。甘油醛-3-磷酸脫氫酶作為PVT1參照物。每個(gè)樣品一式三份進(jìn)行分析。2-ΔΔCT方法來測(cè)定基因表達(dá)水平的相對(duì)量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。Pearson卡方檢驗(yàn)和Spearman秩相關(guān)分析lncRNA PVT1表達(dá)與臨床病理特征之間的相關(guān)性。使Kaplan-Meier法評(píng)價(jià)患者生存率，并使用log-rank檢驗(yàn)比較。單因素和多因素Cox回歸分析生存數(shù)據(jù)。P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1臨床病理特征

組織學(xué)分級(jí)，臨床分期按照美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)推薦TNM分期系統(tǒng)進(jìn)行分級(jí)。研究數(shù)據(jù)顯示，Ⅰ期和Ⅱ期32例，Ⅲ期和Ⅳ期53例。7例高分化，78例中度分化或分化不佳。

2.2LncRNA PVT1表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

qRT-PCR法檢測(cè)85 例患者卵巢癌組織和鄰近非腫瘤組織的PVT1表達(dá)情況。PVT1表達(dá)在癌組織中表達(dá)高于相鄰的非腫瘤組織(P<0.05)。85例患者基于相對(duì)PVT1表達(dá)平均值(3.53)，分為兩組：高PVT1表達(dá)組(PVT1表達(dá)率≥3.53;n=67)和低PVT1表達(dá)組(PVT1表達(dá)率<3.53;n=18)。PVT1表達(dá)水平與臨床分期及N分期相關(guān)(P<0.05)。然而 PVT1表達(dá)與其他臨床特征，如年齡、性別、腫瘤大小、組織分化、T分類和肝臟轉(zhuǎn)移(P>0.05)無顯著相關(guān)性，見表1。

表1　PVT1表達(dá)與卵巢癌臨床病理特征相關(guān)性/例

2.3PVT1表達(dá)與患者總生存率的關(guān)系

高PVT1表達(dá)組總體生存率顯著低于低PVT1表達(dá)組(P<0.05)，見圖1。結(jié)果表明，PVT1表達(dá)可能與生存預(yù)后相關(guān)。Kaplan-Meier分析結(jié)果表明，高PVT1表達(dá)組患者與低PVT1表達(dá)組患者比較，存活時(shí)間均顯著縮短(P<0.05)。單因素Cox回歸分析表明，臨床分期和N分期及PVT1表達(dá)與患者的總生存期相關(guān)(P<0.05)，且PVT1表達(dá)是患者總生存期的一個(gè)獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。PVT1表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的分子標(biāo)志物，用于預(yù)測(cè)患者的總生存期(P<0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2，見表3。

圖1　PVT1表達(dá)與患者存活率的相關(guān)性

臨床病理特征危險(xiǎn)比95%CIP年齡1.1890.351～1.9160.274性別1.3020.571～2.0260.339腫瘤大小1.9730.574～2.9360.203分化1.4750.261～2.8470.537T分期2.6440.735～4.2860.161轉(zhuǎn)移3.1020.461～6.0190.215N分期3.1871.649～7.2470.019臨床分期2.5881.391～5.7110.008PVT13.3751.979～8.4350.007

表3　多因素分析患者的總生存期

3討論

長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的非編碼 RNA。研究表明,lncRNA 在劑量補(bǔ)償效應(yīng)(Dosage compensation effect)、表觀遺傳調(diào)控、細(xì)胞周期調(diào)控和細(xì)胞分化調(diào)控等眾多生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用，成為遺傳學(xué)研究熱點(diǎn)[3]。

局部浸潤(rùn)，復(fù)發(fā)率高，而且化療和放療反應(yīng)欠佳可能導(dǎo)致患者不良預(yù)后結(jié)果。因此，早期診斷有助于改善卵巢癌預(yù)后。更好地理解這種疾病和發(fā)現(xiàn)有用的生物標(biāo)志物來預(yù)測(cè)卵巢癌的進(jìn)展和預(yù)后可能改善其診斷和結(jié)果[4]。先前已經(jīng)證明，50%以上的轉(zhuǎn)錄RNA沒有編碼蛋白的潛能。研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)鏈非編碼 RNA 的表達(dá)或功能異常與人類疾病的發(fā)生密切相關(guān),其中就包括癌癥、退行性神經(jīng)疾病在內(nèi)的多種嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病,具體表現(xiàn)為長(zhǎng)鏈非編碼 RNA 在序列和空間結(jié)構(gòu)上的異常、表達(dá)水平的異常、與結(jié)合蛋白相互作用的異常等[5]。lncRNAs失調(diào)被證明與許多不同的癌癥發(fā)展相關(guān)，其可用作生物標(biāo)志物和預(yù)后因素子[6]。最近的研究表明，PVT1表達(dá)可能與癌癥細(xì)胞的生長(zhǎng)，增殖和存活有關(guān)。Cao等[7]研究發(fā)現(xiàn)lncRNA PVT1 在胃癌組織中的表達(dá)水平明顯高于非腫瘤組織。Wang等[8]發(fā)現(xiàn)lncRNA PVT1促進(jìn)細(xì)胞增殖和循環(huán)，并捕獲干細(xì)胞就像在肝細(xì)胞癌(HCC)細(xì)胞的穩(wěn)定NOP2蛋白質(zhì)的性質(zhì)。lncRNA PVT1/NOP2通路調(diào)控在肝癌治療中具有積極的效果。Takahashi等[9]證明，大腸癌組織的PVT1表達(dá)水平高于非腫瘤組織，且高PVT1表達(dá)患者有顯著預(yù)后不良，此外，抑制PVT1表達(dá)可以促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的凋亡。Tseng等[10]指出，在原發(fā)性人類腫瘤中，PVT1 RNA和髓細(xì)胞增生(MYC)蛋白相關(guān)，PVT1的復(fù)制增加常伴隨著MYC-復(fù)制增加。然而，PVT1表達(dá)與臨床病理特征和患者預(yù)后相關(guān)。本研究包括85例卵巢癌組織，發(fā)現(xiàn)lncRNA PVT1的在癌組織中的表達(dá)水平高于相鄰非腫瘤組織。PVT1表達(dá)與臨床病理特征分析表明，研究發(fā)現(xiàn)，高PVT1表達(dá)與晚期臨床分期及高N-分期相關(guān)。這些數(shù)據(jù)表明，PVT1的過度表達(dá)可能在卵巢癌進(jìn)展中起關(guān)鍵作用。然后，PVT1表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果表明高PVT1表達(dá)組的總體生存率顯著差比低PVT1表達(dá)組。單因素和多因素分析證明，高PVT1表達(dá)可以獨(dú)立預(yù)測(cè)患者預(yù)后較差。

綜合以上討論，本研究認(rèn)為，lncRNA PVT1在癌組織中表達(dá)增加，可作為獨(dú)立預(yù)后因素預(yù)測(cè)總體生存率。然而，這項(xiàng)研究有一定的局限性。首先，擴(kuò)大樣本，才能確認(rèn)lncRNA PVT1表達(dá)的預(yù)后價(jià)值。第二，lncRNA對(duì)腫瘤細(xì)胞惡性表型的影響，需要進(jìn)一步闡明。

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(編輯：吳小紅)

Effect of Neoadjuvant Chemotherapy On Difference of Expression of IncRNA In Ovarian Cancer Patients

LIUYun,QUANXiaozhen,QINXiaomin,etal.

XiangyangCentralHospitalAffiliatedtoHubeiCollegeofArtsandScience,Xiangyang,441021

【Abstract】ObjectiveTo explore the effect of adjuvant chemotherapy on lncRNA difference of expression in ovarian cancer patients.MethodsQuantitative real-time polymerase chain reaction analysis was used to detect the lncRNA PVT1 expression levels in non-tumor tissues and adjacent ovarian cancer.Correlation of PVT1 expression and survival of patients was detected by Kaplan-Meier survival analysis.Prognostic significance of PVT1 expression was analyzed by univariate and multivariate Cox regression analysis.ResultsCompared with the adjacent non-tumor tissues,PVT1 expression significantly increased in ovarian cancer tissues.PVT1 expression and clinical stage and N-grade(P<0.05) were related.Overall survival in patients with high expression levels of PVT1 was short.Univariate and multivariate Cox regression analysis showed that PVT1 may be an independent prognostic factor for patients with poor overall survival(P<0.05).ConclusionlncRNA PVT1 in ovarian cancer tissues is associated with tumor progression,and PVT1 can be a potential molecular biomarker for predicting the prognosis of patients with ovarian cancer.

【Key words】Ovarian cancer;lncRNA;PVT1;Prediction

(收稿日期2015-05-22修回日期 2016-01-26)

中圖分類號(hào)：R737.31

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2016)03-0384-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.03.011

通訊作者：蘭艷麗

基金項(xiàng)目：襄陽市科技計(jì)劃研究與開發(fā)項(xiàng)目(編號(hào)：2011zd002)