戴　蕓，楊　林，朱莉萍*

（1.黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院），湖北黃石435000；2.腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北黃石435000）

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白芍總苷降尿酸實(shí)驗(yàn)研究

戴蕓1，2，楊林1，2，朱莉萍1，2*

（1.黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院），湖北黃石435000；2.腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北黃石435000）

摘要：目的：研究白芍總苷降尿酸作用。方法：采用60只雄性昆明種小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、高尿酸血癥模型對(duì)照組、別嘌醇組（40mg·kg(-1)）及白芍總苷低劑量組（2g·kg(-1)）和高劑量組（4g·kg(-1)），每組12只；20%酵母浸粉飼料喂養(yǎng)造模。于給藥15d后測(cè)定血清尿酸（uric acid，UA）、肌酐（creatinine，Cr）和尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）含量并測(cè)定肝臟組織中黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）和腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA）的活性。結(jié)果：與模型對(duì)照組比較，白芍總苷低劑量組和高劑量組小鼠血清的UA水平降低（P＜0.05）；白芍總苷低劑量組和高劑量組小鼠肝臟組織中XOD和ADA的活性降低（P＜0.05）。結(jié)論：白芍總苷對(duì)高尿酸血癥小鼠模型具有保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：白芍總苷；高尿酸血癥；小鼠；尿酸

白芍總苷（Total glucosides of paeony，TGP）來(lái)源于毛莨科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根[1]，主要成分包括芍藥苷（Paeoniflorin），羥基芍藥苷（Oxypaeoniflorin）、芍藥內(nèi)酯苷（Albiflorin）和苯甲酰芍藥苷（Benzoylpaeoniflorin）等苷類成分，其中芍藥苷含量最高[2]。本品為淺棕黃色至棕褐色的粉末，主要具有抗炎、鎮(zhèn)痛、催眠、抗驚厥和免疫調(diào)節(jié)作用。臨床廣泛用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、冠心病和婦科疾病等方面疾病的治療[3-5]。

近年來(lái)對(duì)白芍總苷的實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究逐步深入，其作用機(jī)制以及臨床應(yīng)用取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。本研究擬對(duì)白芍總苷對(duì)高尿酸血癥小鼠模型的保護(hù)作用進(jìn)行研究，對(duì)其進(jìn)一步的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1藥品與試劑

白芍總苷（含芍藥苷40%，寧波立華制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20054521）。別嘌醇片（海正輝瑞制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H33020771）；酵母膏（湖北興銀河化工有限公司）；尿酸（uric acid，UA）檢測(cè)試劑盒、肌酐（creatinine，Cr）檢測(cè)試劑盒、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）檢測(cè)試劑盒以及肝臟黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）檢測(cè)試劑盒、腺苷脫氨酶（adenosinedeaminase，ADA）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所）。其它生化試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2儀器

TBA-40FR（ACCUTE）全自動(dòng)生化分析儀（日本東芝公司）；Model 680型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-RAD公司）；Heraeus Biofuge Stratos冷凍離心機(jī)（德國(guó)Heraeus公司）；H-11041170電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性昆明種小鼠60只，購(gòu)自武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［許可證號(hào)：SCXK（鄂）2008-0004］，6～8周齡，體質(zhì)量（18±22）g。

1.4實(shí)驗(yàn)方法[ 6-9 ]

1.4.1動(dòng)物分組、模型建立及給藥小鼠正常水食適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，60只雄性昆明小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)均分為5組，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、別嘌醇組（40mg·kg-1）組、白芍總苷低劑量組（2g·kg-1）和白芍總苷高劑量組（4g·kg-1），每組12只。除正常對(duì)照組小鼠繼續(xù)飼喂正常水食外，其余各組給予含20%酵母浸粉飼料，造成血清尿酸水平升高的高尿酸血癥模型。造模2周后，各組開始分別給予相應(yīng)藥物，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予同體積純凈水，每天一次，連續(xù)給藥15d。除正常對(duì)照組外，其余各組繼續(xù)飼喂含20%酵母浸粉飼料。每3d稱重1次，根據(jù)體重變化，矯正給藥劑量。給藥第15d后，小鼠眼球取血致死，并仔細(xì)剝離肝臟，在每只小鼠肝臟的相同部位秤取肝組織0.2 g，以液氮速凍，保存于-80℃冰箱備用。

1.4.2血清UA、Cr和BUN水平測(cè)定小鼠血液經(jīng)室溫靜置30min后，3000rpm離心15min取上層血清，參照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定UA、Cr和BUN的濃度。

1.4.3肝臟酶活力測(cè)定取0.2g肝組織，加入1.8mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.85%的生理鹽水，制備成10%的肝組織勻漿，3000rpm離心15min，取上層清液，參照試劑盒說(shuō)明書分別測(cè)定肝臟XOD、ADA酶活力。其中，XOD的酶活力單位定義為每克組織蛋白在37℃每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol的底物所需的酶量；ADA的酶活力單位定義為每毫克蛋白在37℃和底物作用60min產(chǎn)生1μg氨所需的酶量。參照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定酶活力。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 18.0軟件，計(jì)數(shù)資料以±s表示，組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)方法。P小于0.05視差異為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果與討論

2.1白芍總苷對(duì)小鼠血清UA、Cr和BUN水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠血清UA升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P小于0.05），Cr和BUN沒(méi)有顯著改變；與模型對(duì)照組比較，白芍總苷低劑量組和高劑量組均可降低小鼠UA水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P小于0.05），以白芍總苷高劑量組作用更為明顯。白芍總苷對(duì)于小鼠血清Cr和BUN沒(méi)有顯著影響，見(jiàn)表1。

表1　白芍總苷對(duì)高尿酸血癥小鼠UA、Cr和BUN的影響（±s，n=12）Tab.1　Effect of total glucosides of paeony on UA, Cr and BUN in hyperuricemia mice（±s, n=12）

表1　白芍總苷對(duì)高尿酸血癥小鼠UA、Cr和BUN的影響（±s，n=12）Tab.1　Effect of total glucosides of paeony on UA, Cr and BUN in hyperuricemia mice（±s, n=12）

與正常對(duì)照組比較：△P小于0.05；與模型組比較：*P小于0.05。

組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組別嘌醇組白芍總苷低劑量白芍總苷高劑量劑量/g·kg-10.04 2 4 UA/μmol·L-1129.62±35.72 276.25±88.96△112.77±36.34*203.76±40.63*188.91±35.20*Cr/μmol·L-1550.21±46.20 534.60±58.94 560.82±47.36 544.23±69.33 528.66±53.45 BUN/mmol·L-13.35±0.28 3.42±0.33 3.29±0.25 3.39±0.13 3.41±0.22

2.2白芍總苷對(duì)小鼠肝臟XOD、ADA酶活力的影響

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠肝臟XOD 和ADA活性明顯升高（P小于0.05）。與模型對(duì)照組比較，白芍總苷低劑量組和白芍總苷高劑量組小鼠肝臟XOD和ADA活性顯著降低（P小于0.05）。結(jié)果顯示，白芍總苷能抑制高尿酸血癥小鼠模型肝臟XOD和ADA活性，見(jiàn)圖1、2。

圖1　白芍總苷對(duì)高尿酸血癥小鼠XOD活性的影響（±s，n=12）Fig.1　Effect of total glucosides of paeony on activity of XOD in hyperuricemia mice（±s, n=12）

與正常對(duì)照組比較：△P小于0.05；與模型對(duì)照組比較：*P小于0.05。

圖2　白芍總苷對(duì)高尿酸血癥小鼠ADA活性的影響（±s，n=12）Fig.2　Effect of total glucosides of paeony on activity of ADA in hyperuricemia mice（±s，n=12）

與正常對(duì)照組比較：△P小于0.05；與模型對(duì)照組比較：*P小于0.05

2.3討論

高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂導(dǎo)致的尿酸含量從而引發(fā)的疾病[10]。其發(fā)病原因主要與尿酸的生成和排泄這兩個(gè)復(fù)雜的代謝過(guò)程有關(guān)，是由嘌呤代謝特異性酶活性的異?；蛉笔б穑硗膺€可以由腎臟病變、內(nèi)分泌疾病、機(jī)體用藥等導(dǎo)致尿酸排泄障礙?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)高尿酸血癥的治療途徑主要為減少內(nèi)源性尿酸的生成以及促進(jìn)尿酸排出，前者主要通過(guò)有效的抗氧化抑制核酸氧化分解同時(shí)抑制嘌呤代謝為尿酸，后者可通過(guò)適度堿化尿液來(lái)實(shí)現(xiàn)。同時(shí)采用藥物或手術(shù)治療，并注意調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)[11,12]。

目前，常用化學(xué)藥物治療高尿酸血癥，不良反應(yīng)較多，停藥后復(fù)發(fā)率較高[13 ]，而中醫(yī)藥在高尿酸血癥的治療方面有一定的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，其起效溫和，作用持久，不良反應(yīng)發(fā)生率較低。中醫(yī)多將高尿酸血癥歸屬痹證、白虎歷節(jié)、痛風(fēng)、淋證或水腫等范疇，其病因病機(jī)較為復(fù)雜，辨證分型尚不統(tǒng)一[14]，因此，在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下，確定高尿酸血癥辨證分型和發(fā)現(xiàn)療效確切的中藥顯得尤為重要。

3　結(jié)論

本研究采用白芍總苷探討其對(duì)高尿酸血癥小鼠模型的保護(hù)作用。研究發(fā)現(xiàn)白芍總苷可降低小鼠血清UA水平（P小于0.05），降低小鼠肝臟XOD和ADA活性（P小于0.05），對(duì)小鼠血清Cr和BUN水平影響不大。初步判斷白芍總苷對(duì)高尿酸血癥小鼠模型具有一定的保護(hù)作用，主要通過(guò)降低血清UA水平以及抑制肝臟XOD和ADA活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步探討，本研究結(jié)果對(duì)于白芍總苷研究利用奠定了一定的基礎(chǔ)。

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Experimental study of total glucosides of paeony on reducing the level of uric acid

DAI Yun1，2，YANG Lin1，2，ZHU Li-ping1，2*
（1.Huangshi Central Hospital, Affiliated Hospital of Hubei Polytechnic University, Huangshi 435000, China；2.Hubei Key Laboratory of Kidney Disease Pathogenesis and Intervention, Huangshi 435000, China）

Abstract：The effect of total glucosides of paeony on reducing the level of uric acid were studied. 60 male mice were randomly divided into normal control group, model control group, Allopurinol group（40mg·kg(-1)）and total glucosides of paeony groups（2g·kg(-1)and 4g·kg(-1)）, with 12 mice in each group. The mice fed with 20% yeast powder were used to establish the hyperuricemia model. The levels of uric acid（UA）, creatinine（Cr）and blood urea nitrogen（BUN）were detected at 15th day. In addition, xanthine oxidase（XOD）and adenosine deaminase （ADA）activity in mice liver were determined for the mechanism preliminarily. Compared with model group, the level of UA, XOD and ADA activity decreased in total glucosides of paeony groups. The total glucosides of paeony had protection effect on Hyperuricemia mice model.

Key words：total glucosides of paeony；hyperuricemia；mice；uric acid

通訊作者：朱莉萍（1971-），女，本科，副主任藥師。

作者簡(jiǎn)介：戴蕓（1974-），女，主管藥師，1997年畢業(yè)于中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)專業(yè)，大專學(xué)歷，研究方向：臨床藥學(xué)。

收稿日期：2015-11-11

DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tq. 20160368

中圖分類號(hào)：R965

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A