張小明

(廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院健康體檢部，廣州 510260)

老年人是腫瘤的高發(fā)人群，其腫瘤發(fā)病特點為發(fā)病率高，轉(zhuǎn)移率高，死亡率高，且早期診斷率低，多數(shù)患者就診時已處于進展期，腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移是治療失敗的主要原因[1]。多數(shù)老年患者患病后初次就診已經(jīng)伴有廣泛的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者遠端的轉(zhuǎn)移，已處于該病的晚期，失去手術(shù)根治的機會，耽誤了治療的最佳時機，早期診斷對疾病的及時發(fā)現(xiàn)及治療具有重要的臨床意義[1-3]。大樣本多中心的研究發(fā)現(xiàn)很多基因參與了老年人腫瘤發(fā)生。尋找老年人腫瘤發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)基因，了解老年腫瘤的分子遺傳學機制，為老年腫瘤的診斷和治療提供理論基礎(chǔ)是目前的研究熱點。通過利用更特異的基因?qū)W標志及與其相關(guān)的表型改變，闡述癌前細胞的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸將有助于更好地了解癌前病變的分子生物學機制。這樣的標志物必將有助于識別老年腫瘤高危人群，使早期發(fā)現(xiàn)、化學預防、早期治療成為可能[4,5]。廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院通過聯(lián)合檢測癌胚抗原(carcino-embryonic antigen, CEA)、糖類抗原211(carbohydrate antigen 211, CA211)、前列腺特異抗原(prostate specific antigen,PSA)的表達程度探討了CEA、CA211、PSA基因在老年人腫瘤篩查中的作用及其作為老年人腫瘤早期診斷篩查分子指標的可能性。本研究搜集病例樣本共計3685例，其中96例證實為老年人腫瘤樣本，旨在進一步了解其篩查效果。

1 臨床資料

從所搜集的3685例病例中篩查出我院2012年1月至2015年1月老年腫瘤手術(shù)切除患者的病例樣本共計96例，通過病理診斷分析均為原發(fā)性老年腫瘤，所有患者均為初診，術(shù)前未進行任何放療、化療及分子靶向治療等。其中男性74例，女性22例，年齡為65～88(71.34±1.13)歲。收集標本前該臨床試驗研究通過了醫(yī)院倫理委員會的批準，且所有病例患者均簽訂知情同意書。在術(shù)中取材之后，腫瘤的位置以病理組織報告為標準，將樣本立即放置入液氮罐中保存，轉(zhuǎn)入-80℃冰箱長期保存，在實驗前取出，提取老年患者腫瘤組織的RNA，同時進行病理學監(jiān)測，對老年患者腫瘤組織的病理學進行分型，腫瘤的浸潤程度按照國際抗癌聯(lián)盟標準分類[7]， 淋巴分化以及轉(zhuǎn)移采用世界衛(wèi)生組織(WHO)的診斷標準[7]進行分析判斷。

試劑：Platinum SYBR Green qPCR SuperMix-UDG(Invitroge公司，美國)，TaqMix(東盛生物科技有限公司，廣州)，PCR試劑盒、TaqMan RNA試劑盒(Santa Cruz公司，美國)，RNA提取試劑盒(Sigma公司，美國)，DEPC(碧云天生物技術(shù)有限公司，上海)，乙醇、異丙醇、氯仿(碩盟生物科技有限公司，上海)。儀器：高速冷凍離心機(BiofugeStratos，德國)，-80℃及-4℃冰箱(松下，日本)，PCR儀(Rotor-gene，澳大利亞)，紫外分光光度儀(Beckman Coulter公司，美國)。

對96例老年患者腫瘤組織采用RNA提取試劑盒進行RNA提取，采用TaqMan RNA試劑盒檢測CEA、CA211、PSA的相對表達量。采用RNU6作為內(nèi)參進行校正。對CEA、CA211、PSA的表達水平采用二步法進行檢測：第一步是通過莖環(huán)引物來合成互補DNA，再通過RNA的逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)對10 ng RNA進行逆轉(zhuǎn)錄，在PCR管加入10 μl的逆轉(zhuǎn)錄緩沖液，總RNA濃度調(diào)整到2 mg/L，最后加入5 μl的逆轉(zhuǎn)錄引物，在冰上混勻之后反應(yīng)5 min，接著進行梯度變性反應(yīng)，94℃、30 s，60℃、30 s，72℃、60 s，72℃、7 min遞減；第二步采用Platinum SYBR Green qPCR的反應(yīng)體系，反應(yīng)體系為2×的 PCR Taqman Universal的混合液以及Taqman RNA的特異性引物，通過逆轉(zhuǎn)錄體系進行反應(yīng)，cDNA共5 μl加入到RNA去酶水當中，將體積擴增至20 μl，通過循環(huán)反應(yīng)94℃、30 s，60℃、30 s，72℃、60 s，72℃、7 min遞減，擴張40個循環(huán)之后，對實驗結(jié)果進行分析。采用熒光實時定量反應(yīng)，按照PCR操作說明，Ct的檢測值不在20～32范圍時需要進行第2次檢測。應(yīng)用⊿Ct=CtCEA、CA211、PSA-CtRNU6的計算公式計算CEA、CA211、PSA的相對表達量。

所有采集的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行處理。依據(jù)CEA、CA211、PSA表達水平分為兩組：低表達組(<平均值)和高表達組(>平均值)。通過分析CEA、CA211、PSA的表達水平高低與發(fā)病相關(guān)因素，以逐步回歸法篩選有統(tǒng)計學意義的變量，對臨床病理因素之間的風險情況采用logistic回歸分析，組間均數(shù)比較采用t檢驗或方差分析，組間率的比較用卡方檢驗。運用Kaplan-Meier的生存曲線對腫瘤切除術(shù)后患者的生存情況進行分析， 闡明CEA、CA211、PSA表達的高低與生存率之間的關(guān)系，統(tǒng)計檢測采用雙尾的檢測方法，應(yīng)用Mann-whitneyU檢驗法進行數(shù)據(jù)之間兩兩比較。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

表1 CEA、CA211、PSA的相對表達量與臨床病理特征之間的相關(guān)性

CEA:carcino-embryonic antigen; CA211: carbohydrate antigen 211; PSA: prostate specific antigen

表2 CEA、CA211、PSA相對表達量的高低與臨床病理因素之間的關(guān)系

CEA:carcino-embryonic antigen; CA211: carbohydrate antigen 211; PSA: prostate specific antigen

研究結(jié)果表明，96例老年腫瘤組織的CEA、CA211、PSA的平均相對表達量分別為1.53±0.34，1.53±0.41和1.63±0.39。CEA、CA211、PSA相對表達量與患者的年齡、性別及瘤組織大小并不存在相關(guān)性(P>0.05)；而在淋巴受累、腫瘤分期和分化程度方面，CA211、CEA、PSA相對表達量差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05；表1)。

logistic回歸分析顯示CA211、CEA、PSA相對表達量的上升增加了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風險，調(diào)整之后風險的OR=5.16，95%CI為1.27～20.83，P=0.03(表2)。

2 討 論

2011年世界腫瘤統(tǒng)計報告表明，2008年全球共有989 600例老年腫瘤新發(fā)病例，占所有癌癥新發(fā)病例的8%，占癌癥總死亡人數(shù)的10%[8]。2003至2007年我國老年腫瘤發(fā)病率和死亡率仍處于較高水平[9]。近幾年老年腫瘤的發(fā)病率有逐年增高的趨勢，雖然隨著治療手段的進步，患者的生存率有所提高，但轉(zhuǎn)移和復發(fā)仍然是其死亡的主要原因[10]。近年來國內(nèi)外學者對老年腫瘤的研究主要集中在病因?qū)W中遺傳基因的研究、早期診斷方法的研究、手術(shù)方法改進的研究、放射、化學治療的研究等方面，且取得了一定進展，但老年腫瘤的發(fā)病率及死亡率無明顯下降，說明上述研究的深度不夠，一些研究結(jié)果尚未用于臨床[11]。由于惡性腫瘤是威脅老年人生命的主要疾病，因此進一步研究和尋找有關(guān)老年腫瘤轉(zhuǎn)移和復發(fā)的早期生物標志物及敏感特異的診斷手段，是老年腫瘤有效治療、改善預后和提高生存率的關(guān)鍵所在。研究老年腫瘤的病因，做好老年腫瘤發(fā)病的預防，減少其發(fā)病率，仍是今后研究的主要方向[12]。

分子生物學檢測技術(shù)對老年腫瘤的早期診斷和篩查已顯現(xiàn)出好的應(yīng)用前景，但還沒有一種切實有效的方法能準確無誤地做出臨床前診斷和篩查。一是目前使用的新技術(shù)、新方法存在特異度差、敏感度不高、可能出現(xiàn)假陽性或假陰性的不足；二是目前研究的分子標志物都是腫瘤相關(guān)性而非特異性。此外，任何腫瘤的篩查和早期診斷均不是靠完全單一的方法就能完成，目前國內(nèi)外多采用多項指標聯(lián)合檢測以提高老年腫瘤篩查和早期診斷的水平。CEA是新發(fā)現(xiàn)的一種促癌基因，通過促進FAK信號通路的磷酸化阻止透明質(zhì)酸誘導分泌而抑制腫瘤細胞的浸潤轉(zhuǎn)移，是臨床上常采用的腫瘤標志物[13,14]；CA211主要通過識別各種內(nèi)外源性的誘變因子造成的DNA的損害，發(fā)生自動磷酸化進而快速激活CA211激酶，CA211的表達水平與腫瘤細胞的浸潤及其對組織的損傷的情況具有相關(guān)性[15,16]；PSA可通過非P53依賴途徑上調(diào)P21WAF1/CIP1信號促進細胞增殖，從而促進細胞周期素以及細胞周期蛋白活性，研究發(fā)現(xiàn)PSA在多種癌組織中存在著表達增強機制[17,18]。

本研究通過對老年腫瘤組織CEA、CA211、PSA聯(lián)合檢測以了解其臨床意義，并探討了其在老年腫瘤篩查中的意義，結(jié)果顯示，CA211、CEA、PSA相對表達量的上升，提示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風險增加，組間比較差異均具有統(tǒng)計學意義。綜上所述，CEA、CA211、PSA的聯(lián)合檢測有助于提高老年腫瘤檢出率，有助于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的篩查及預測。

【參考文獻】

[1] Siegel R, Naishadham D, Jemal A,etal. Cancer statistics, 2012[J]. CA Cancer J Clin, 2012, 62(1): 10-29.

如果說進步社團、報紙期刊與先進知識分子在馬克思主義中國化過程中影響還是局部的，沒有形成全國性的影響，那么發(fā)生在中國共產(chǎn)黨歷史上的思想解放運動，則是馬克思主義中國化的重大舉措。它不僅使馬克思主義中國化得到廣泛接受，而且在此基礎(chǔ)上最終形成了馬克思主義中國化的理論成果。

[2] Paoletti X, Oba K, Burzykowski T,etal. Benefit of adjuvant chemotherapy for resectable gastric cancer:a meta-analysis[J]. JAMA, 2010, 303(17): 1729-1737.

[3] Zhou Y,Yin X,Ying J. Golgi protein 73versusalpha fetoprotein as a biomarker for hepatocellular carcinoma: a diagnostic meta-analysis[J]. BMC Cancer, 2012, 12(1): 17.

[4] Society of Laboratory Medicine of Chinese Medical Association, National Center of Clinical Laboratories, Editorial Board of Chinese Journal of Laboratory Medicine,etal. Recommendations on clinical applications of tumor markers[J]. Chin J Lab Med, 2012, 35(2): 103-116.[中華醫(yī)學會檢驗分會,衛(wèi)生部臨床檢驗中心,中華檢驗醫(yī)學雜志編輯委員會,等. 腫瘤標志物的臨床應(yīng)用建議[J].中華檢驗醫(yī)學雜志, 2012, 35(2): 103-116.]

[5] Li ML, Zhang JC, Li SG,etal. Characteristic gene expression profiles in the progression from normal gastric epithelial cells to moderate gastric epithelial dysplasia and to gastric cancer[J].Chin Med J (Engl), 2012, 125(10): 1777-1783.

[6] Yan HL, Gong YZ. Research progress in relationship of oxidative stress and p16 and p53/p21 with cellular aging[J].Med Rev, 2011, 17(5): 682-685.[閆海龍, 龔勇珍. 氧化應(yīng)激及p16和p53/p21與細胞衰老關(guān)系的研究進展[J]. 醫(yī)學綜述, 2011, 17(5): 682-685.]

[7] Leja M, Wex T, Malfertheiner P. Markers for gastric cancer premalignant lesions: where do we go[J]? Dig Dis, 2012, 30(3): 268-276.

[8] Sangodkar J, Shi J, DiFeo A,etal. Functional role of the KLF6 tumour suppressor gene in gastric cancer[J]. Eur J Cancer, 2009, 45(4): 666-676.

[9] Migdalska-Sek M,Pastuszak-Lewandoska D, Brzezianska E. MSI and LOH in the development and prognosis of follicular cell-derived thyroid tumors[J]. Endokrynol Pol, 2012, 63(2): 126-136.

[10] Sarkar S, Goldgar S, Byler S,etal. Demethylation and reexpre-ssion of epigenetically silenced tumor suppressor genes: sensitization of cancer cells by combination therapy[J]. Epigenomics, 2013, 5(1): 87-94.

[11] Ehlert T, Simon P, Moser DA. Epigenetics in sports[J]. Sports Med, 2013, 43(2): 93-110.

[12] Dominissini D, Moshitch-Moshkovitz S, Amariglio N,etal. Adenosine-to-inosine RNA editing meets cancer[J].Carcinogenesis, 2011, 32(11): 1569-1577.

[13] Liu YF, Lai CY, Su ZX,etal. Research progress in diagnostic marker for prostate cancer[J].Mod Genitourin Oncol, 2012, 4(4): 242-244.[劉玉峰, 賴彩永, 蘇澤軒, 等. 前列腺癌診斷標志物的研究進展[J].現(xiàn)代泌尿生殖腫瘤雜志, 2012, 4(4): 242-244.]

[14] Cheng ZY, Guo XL, Li SH,etal. Effect of CEA-FAK signaling pathway on the leukemia cell migration and invasion[J]. Chin J Hematol, 2009, 30(1): 115.[成志勇, 郭曉玲, 李世輝, 等. CEA-FAK信號傳導通路在自血病細胞遷移、侵襲中的作用[J]. 中華血液學雜志, 2009, 30(1): 115.]

[15] Xu CA, Li L, Xing LL,etal. Studies of serum carcino-embryonic antigen and CYFRA21-1 in predicting chemotherapeutic effect and prognostic value in advanced non-small cell lung cancer patients[J]. Chin Gen Pract, 2012, 15(2): 411-413.[許崇安, 李 琳, 邢麗麗, 等. 血清癌胚抗原和CYFRA21-1預測晚期非小細胞肺癌患者化療療效及預后的價值研究[J]. 中國全科醫(yī)學, 2012, 15(2): 411-413.]

[16] Chu XY, Hou XB, Song WA,etal.Diagnostic values of SCC, CEA, Cyfra21-1 and NSE for lung cancer in patients with suspicious pulmonary masses: a single center analysis[J].Cancer Biol Ther, 2011, 11(12): 995-1000.

[17] Chiam K,Ryan NK, Ricciardelli C,etal. Characterization of the prostate cancer susceptibility gene KLF6 in human and mouse prostate cancers[J]. Prostate, 2013, 73(2): 182-193.

[18] Guo MY, Chen Y, Luo YY,etal. Value of different serum tumor markers examination in diagnosis of lung cancer in the elderly[J]. Chin Med J Gerontol, 2010, 29(8): 677-678.[郭滿盈, 陳 揚, 羅媛燁, 等. 不同血清腫瘤標志物聯(lián)合檢查在老年人肺癌診斷中的價值[J]. 中華老年醫(yī)學雜志, 2010, 29(8): 677-678.]