仇　燚

(四川省瀘州市中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州　646000)

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小檗堿對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響*

仇燚

(四川省瀘州市中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州646000)

摘要目的：研究小檗堿對卵白蛋白致敏的離體回腸平滑肌的影響。方法：采用體外離體器官實(shí)驗(yàn)法，觀察小檗堿(20~100 μg·ml(-1))對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響，以及對磷酸組織胺(His)和氯化乙酰膽堿(Ach)所致豚鼠離體回腸收縮的影響。結(jié)果：小檗堿(20~100 μg·ml(-1))能明顯抑制卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌收縮，對His和Ach所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮也有一定的抑制作用。結(jié)論：小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌有明顯的解痙作用。

關(guān)鍵詞：小檗堿；豚鼠回腸平滑肌

小檗堿(Berberine)又名黃連素，是從黃連根莖中提取的生物堿。小檗堿在臨床上主要利用其顯著的抑菌作用來治療細(xì)菌性痢疾和腸胃炎等疾病。有時(shí)臨床上也外用于治療一些皮膚過敏性疾病，如過敏性皮炎、嬰兒濕疹等。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示小檗堿的其藥理作用廣泛，具有抗菌、抗血小板聚集、抗心律失常、降血壓、免疫抑制等作用[1]。已有的研究文獻(xiàn)顯示小檗堿對胃腸道平滑肌有一定的解痙藥理活性，小檗堿對大鼠離體胃平滑肌有明顯的舒張作用，可明顯抑制5羥色胺所致的胃平滑肌收縮[2]，能劑量依賴的抑制His和Ach所致的家兔離體回腸平滑肌收縮，其作用機(jī)制與其鈣拮抗有一定關(guān)系[3]。為進(jìn)一步研究，我們采用卵白蛋白所致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮模型，及組胺和乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮模型，探討小檗堿對豚鼠離體回腸平滑肌的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)藥物

鹽酸小檗堿，批號110713-200910，規(guī)格30 mg/瓶，中國藥品生物制品檢定所，含量97.9%。

1.1.2動(dòng)物

豚鼠，英國種，一級，60只，雌雄兼用，生產(chǎn)許可證號：SCXK(川)2008-14，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場提供。

1.1.3試劑

組胺磷酸鹽，規(guī)格：5 g/瓶，批號：F20100319，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司，BR級；氯化乙酰膽堿，規(guī)格1 g/支，批號：20061130，上海三愛思試劑有限公司，CP級；卵白蛋白，含量≥98%，批號：040M7001V，Sigma公司。

1.1.4儀器

Powerlab/8sp生理記錄儀，澳大利亞AD 儀器公司。

1.2方法

1.2.1卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮

按文獻(xiàn)方法[4]，取體重150~200 g的健康豚鼠，于每只豚鼠兩后肢各注射5%卵白蛋白生理鹽水溶液0.4 ml，同時(shí)腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液1 ml。第5周取致敏的豚鼠，用鐵棒猛擊枕部致昏迷，立即剖開腹腔，從回盲交界處向上2 cm開始，取出回腸一段，制備成約2 cm長的腸段若干。置于盛有10 ml克氏液的浴槽中，通氧，負(fù)荷1 g，37℃平衡30 min。然后分別依次加入空白溶媒，小檗堿不同濃度進(jìn)行預(yù)處理，孵育約5 min后，加卵白蛋白0.2 mg(1 mg·ml-1卵白蛋白克氏液，0.2 ml)激發(fā)離體回腸收縮。用Powerlab生理信號儀記錄預(yù)處理前3 min和加入卵白蛋白后3 min的豚鼠回腸平滑肌肌條的活動(dòng)曲線，計(jì)算其平均收縮幅度，并以他們之間的差值作為效應(yīng)值。受試藥物的藥效亦可用回腸收縮幅度抑制率表示，抑制率=(1-受試藥物的效應(yīng)值/空白對照組的效應(yīng)值)×100%。

1.2.2組胺、乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮

取禁食不禁水24 h健康豚鼠，用鐵棒猛擊枕部致其昏迷，立即剖開腹腔，制備離體回腸平滑肌條(方法同前)，置于盛有10 ml克氏液的浴槽中。充氧，負(fù)荷1 g，37℃保溫，平衡30 min，待基線穩(wěn)定后加入終濃度為2 μg·ml-1的激動(dòng)劑His或10 μg·ml-1的Ach，用克氏液洗3次。待回腸恢復(fù)正常狀態(tài)后，分別依次加入空白溶媒，鹽酸小檗堿不同濃度進(jìn)行預(yù)處理，孵育約5 min后，加入與前等劑量的His或Ach。記錄預(yù)處理前3 min和加入激動(dòng)劑后3 min的豚鼠回腸平滑肌肌條的活動(dòng)曲線，并計(jì)算其平均收縮幅度和抑制率，方法同上。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

加入小檗堿不同劑量進(jìn)行預(yù)處理，其回腸平滑肌條收縮幅度效應(yīng)值均明顯低于空白對照組(P<0.01)，提示小檗堿(20~100 μg·ml-1)對卵白蛋白所致離體回腸平滑肌收縮有明顯的拮抗作用，在80 μg·ml-1濃度下即可完全抑制卵白蛋白所致的離體回腸平滑肌收縮，見表1。

表1　小檗堿對卵白蛋白致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD，n=6)

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2對組胺所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

加入不同劑量的小檗堿進(jìn)行預(yù)處理，其加入激動(dòng)劑磷酸組胺后的回腸平滑肌條收縮幅度均低于空白對照組(P<0.05或P<0.01)，提示鹽酸小檗堿在20~320 μg·ml-1濃度范圍內(nèi)對組胺所致離體回腸平滑肌收縮有拮抗作用。但其抑制作用不強(qiáng)，當(dāng)終濃度達(dá)到160 μg·ml-1時(shí)，其抑制率才達(dá)到60.2%，見表2。

表2　小檗堿對組胺致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD，n=10)

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2對乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

由表3可見，加入不同劑量的鹽酸小檗堿進(jìn)行預(yù)處理，在終濃度為80~320 μg·ml-1之間的劑量，對激動(dòng)劑氯化乙酰膽堿所致的離體回腸平滑肌收縮有抑制作用(P<0.05或P<0.01)，但其抑制作用也不強(qiáng)，當(dāng)終濃度達(dá)到160 μg·ml-1時(shí)，其抑制率僅41.5%。

3討論

本實(shí)驗(yàn)采用的試驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯儆贗gE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。試驗(yàn)?zāi)Ｐ筒捎寐寻椎鞍字旅綦嗍螅旅敉瓿珊筇幩离嗍?，并分離出已致敏的離體回腸平滑肌，當(dāng)已致敏的豚鼠離體回腸在抗原卵白蛋白的攻擊下，肥大細(xì)胞脫顆粒釋放出過敏介質(zhì)(主要是組胺)，使致敏的離體回腸平滑肌收縮，這稱為Schultz-Dale反應(yīng)。一般而言，本研究模型通常可作為抗過敏藥物的初篩模型，但解痙藥、局麻藥及擬交感神經(jīng)藥物在本模型也可以得到陽性結(jié)果，有時(shí)會(huì)干擾試驗(yàn)結(jié)果的判斷。因此在設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案時(shí)，我們也同時(shí)考察了小檗堿對組胺和乙酰膽堿所致的離體回腸收縮模型的影響。從我們的試驗(yàn)結(jié)果來看，20 μg·ml-1的小檗堿即可產(chǎn)生明顯的抑制作用(65.9%)，在80 μg·ml-1濃度下則可全部抑制卵白蛋白所致的致敏離體回腸平滑肌收縮。但是在組胺和乙酰膽堿所致的離體回腸收縮模型試驗(yàn)中，小檗堿的終濃度在80 μg·ml-1濃度時(shí)抑制作用很弱(40.9%和43.1%)，終濃度需達(dá)到320 μg·ml-1時(shí)才會(huì)產(chǎn)生比較明顯的抑制作用(78.5%和81.5%)。試驗(yàn)結(jié)果提示小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體平滑肌有明顯的解痙作用，可能具有抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的藥理活性，值得進(jìn)一步深入研究。

表3　小檗堿對乙酰膽堿致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD，n=8)

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

小檗堿在臨床上可以用于治療一些皮膚過敏性疾病[5-7]，但其機(jī)理不清。根據(jù)一些已報(bào)道的臨床前藥理研究文獻(xiàn)，小檗堿治療皮膚過敏性疾病的機(jī)理可能與其抗ⅳ型變態(tài)反應(yīng)藥理活性相關(guān)，如有文獻(xiàn)報(bào)道小檗堿能抑制二硝基氟苯(DNFB)所致的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH){8-10}，其機(jī)制涉及到抑制IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-2 等細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌[9]，降低T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力[10]。我們的研究結(jié)果顯示，小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌有較好的解痙作用，提示其治療皮膚過敏性疾病的機(jī)理也可能涉及到抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的藥理作用。

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Effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig*

Qiu Yi

(LuZhou TCM Hospital of Sichuan Province, Sichuan Luzhou 646000)

AbstractObjective：To study the effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig. Methods: The effects of berberine (20~100 μg·ml-1) on the contraction of ovalabumin sensitized ileum smooth muscle strips were observed by ex vivo evaluation methods, and the effects of berberine (20~320 μg·ml-1) on the contraction of ileum smooth muscle strips induced by His/Ach were also observed. Results: Berberine (20~100 μg·ml-1) could significantly inhibited the contractility of sensitized ileum smooth muscle, and partly inhibited the contraction induced by His/Ach. Conclusion: Berberine has significant antispasmodic activity on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig.

Key Words:Berberine; Isolated ileum smooth muscle strips

(收稿日期：2015-12-14)

作者簡介：仇燚，男，副主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)科臨床工作，Email：qiuyihaoren@163.com。

*基金項(xiàng)目：瀘州市衛(wèi)生科技項(xiàng)目(編號：2005-05)