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        小檗堿對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響*

        2016-04-19 09:01:06
        四川生理科學(xué)雜志 2016年1期
        關(guān)鍵詞:藥理豚鼠離體

        仇 燚

        (四川省瀘州市中醫(yī)醫(yī)院,四川 瀘州 646000)

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        小檗堿對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響*

        仇燚

        (四川省瀘州市中醫(yī)醫(yī)院,四川 瀘州646000)

        摘要目的:研究小檗堿對卵白蛋白致敏的離體回腸平滑肌的影響。方法:采用體外離體器官實(shí)驗(yàn)法,觀察小檗堿(20~100 μg·ml(-1))對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響,以及對磷酸組織胺(His)和氯化乙酰膽堿(Ach)所致豚鼠離體回腸收縮的影響。結(jié)果:小檗堿(20~100 μg·ml(-1))能明顯抑制卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌收縮,對His和Ach所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮也有一定的抑制作用。結(jié)論:小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌有明顯的解痙作用。

        關(guān)鍵詞:小檗堿;豚鼠回腸平滑肌

        小檗堿(Berberine)又名黃連素,是從黃連根莖中提取的生物堿。小檗堿在臨床上主要利用其顯著的抑菌作用來治療細(xì)菌性痢疾和腸胃炎等疾病。有時(shí)臨床上也外用于治療一些皮膚過敏性疾病,如過敏性皮炎、嬰兒濕疹等。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示小檗堿的其藥理作用廣泛,具有抗菌、抗血小板聚集、抗心律失常、降血壓、免疫抑制等作用[1]。已有的研究文獻(xiàn)顯示小檗堿對胃腸道平滑肌有一定的解痙藥理活性,小檗堿對大鼠離體胃平滑肌有明顯的舒張作用,可明顯抑制5羥色胺所致的胃平滑肌收縮[2],能劑量依賴的抑制His和Ach所致的家兔離體回腸平滑肌收縮,其作用機(jī)制與其鈣拮抗有一定關(guān)系[3]。為進(jìn)一步研究,我們采用卵白蛋白所致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮模型,及組胺和乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮模型,探討小檗堿對豚鼠離體回腸平滑肌的影響,現(xiàn)報(bào)告如下。

        1材料與方法

        1.1材料

        1.1.1試驗(yàn)藥物

        鹽酸小檗堿,批號110713-200910,規(guī)格30 mg/瓶,中國藥品生物制品檢定所,含量97.9%。

        1.1.2動(dòng)物

        豚鼠,英國種,一級,60只,雌雄兼用,生產(chǎn)許可證號:SCXK(川)2008-14,由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場提供。

        1.1.3試劑

        組胺磷酸鹽,規(guī)格:5 g/瓶,批號:F20100319,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司,BR級;氯化乙酰膽堿,規(guī)格1 g/支,批號:20061130,上海三愛思試劑有限公司,CP級;卵白蛋白,含量≥98%,批號:040M7001V,Sigma公司。

        1.1.4儀器

        Powerlab/8sp生理記錄儀,澳大利亞AD 儀器公司。

        1.2方法

        1.2.1卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮

        按文獻(xiàn)方法[4],取體重150~200 g的健康豚鼠,于每只豚鼠兩后肢各注射5%卵白蛋白生理鹽水溶液0.4 ml,同時(shí)腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液1 ml。第5周取致敏的豚鼠,用鐵棒猛擊枕部致昏迷,立即剖開腹腔,從回盲交界處向上2 cm開始,取出回腸一段,制備成約2 cm長的腸段若干。置于盛有10 ml克氏液的浴槽中,通氧,負(fù)荷1 g,37℃平衡30 min。然后分別依次加入空白溶媒,小檗堿不同濃度進(jìn)行預(yù)處理,孵育約5 min后,加卵白蛋白0.2 mg(1 mg·ml-1卵白蛋白克氏液,0.2 ml)激發(fā)離體回腸收縮。用Powerlab生理信號儀記錄預(yù)處理前3 min和加入卵白蛋白后3 min的豚鼠回腸平滑肌肌條的活動(dòng)曲線,計(jì)算其平均收縮幅度,并以他們之間的差值作為效應(yīng)值。受試藥物的藥效亦可用回腸收縮幅度抑制率表示,抑制率=(1-受試藥物的效應(yīng)值/空白對照組的效應(yīng)值)×100%。

        1.2.2組胺、乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮

        取禁食不禁水24 h健康豚鼠,用鐵棒猛擊枕部致其昏迷,立即剖開腹腔,制備離體回腸平滑肌條(方法同前),置于盛有10 ml克氏液的浴槽中。充氧,負(fù)荷1 g,37℃保溫,平衡30 min,待基線穩(wěn)定后加入終濃度為2 μg·ml-1的激動(dòng)劑His或10 μg·ml-1的Ach,用克氏液洗3次。待回腸恢復(fù)正常狀態(tài)后,分別依次加入空白溶媒,鹽酸小檗堿不同濃度進(jìn)行預(yù)處理,孵育約5 min后,加入與前等劑量的His或Ach。記錄預(yù)處理前3 min和加入激動(dòng)劑后3 min的豚鼠回腸平滑肌肌條的活動(dòng)曲線,并計(jì)算其平均收縮幅度和抑制率,方法同上。

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        2結(jié)果

        2.1對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

        加入小檗堿不同劑量進(jìn)行預(yù)處理,其回腸平滑肌條收縮幅度效應(yīng)值均明顯低于空白對照組(P<0.01),提示小檗堿(20~100 μg·ml-1)對卵白蛋白所致離體回腸平滑肌收縮有明顯的拮抗作用,在80 μg·ml-1濃度下即可完全抑制卵白蛋白所致的離體回腸平滑肌收縮,見表1。

        表1 小檗堿對卵白蛋白致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD,n=6)

        注:與空白對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        2.2對組胺所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

        加入不同劑量的小檗堿進(jìn)行預(yù)處理,其加入激動(dòng)劑磷酸組胺后的回腸平滑肌條收縮幅度均低于空白對照組(P<0.05或P<0.01),提示鹽酸小檗堿在20~320 μg·ml-1濃度范圍內(nèi)對組胺所致離體回腸平滑肌收縮有拮抗作用。但其抑制作用不強(qiáng),當(dāng)終濃度達(dá)到160 μg·ml-1時(shí),其抑制率才達(dá)到60.2%,見表2。

        表2 小檗堿對組胺致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD,n=10)

        注:與空白對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        2.2對乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動(dòng)的影響

        由表3可見,加入不同劑量的鹽酸小檗堿進(jìn)行預(yù)處理,在終濃度為80~320 μg·ml-1之間的劑量,對激動(dòng)劑氯化乙酰膽堿所致的離體回腸平滑肌收縮有抑制作用(P<0.05或P<0.01),但其抑制作用也不強(qiáng),當(dāng)終濃度達(dá)到160 μg·ml-1時(shí),其抑制率僅41.5%。

        3討論

        本實(shí)驗(yàn)采用的試驗(yàn)?zāi)P蛯儆贗gE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。試驗(yàn)?zāi)P筒捎寐寻椎鞍字旅綦嗍螅旅敉瓿珊筇幩离嗍?,并分離出已致敏的離體回腸平滑肌,當(dāng)已致敏的豚鼠離體回腸在抗原卵白蛋白的攻擊下,肥大細(xì)胞脫顆粒釋放出過敏介質(zhì)(主要是組胺),使致敏的離體回腸平滑肌收縮,這稱為Schultz-Dale反應(yīng)。一般而言,本研究模型通常可作為抗過敏藥物的初篩模型,但解痙藥、局麻藥及擬交感神經(jīng)藥物在本模型也可以得到陽性結(jié)果,有時(shí)會(huì)干擾試驗(yàn)結(jié)果的判斷。因此在設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案時(shí),我們也同時(shí)考察了小檗堿對組胺和乙酰膽堿所致的離體回腸收縮模型的影響。從我們的試驗(yàn)結(jié)果來看,20 μg·ml-1的小檗堿即可產(chǎn)生明顯的抑制作用(65.9%),在80 μg·ml-1濃度下則可全部抑制卵白蛋白所致的致敏離體回腸平滑肌收縮。但是在組胺和乙酰膽堿所致的離體回腸收縮模型試驗(yàn)中,小檗堿的終濃度在80 μg·ml-1濃度時(shí)抑制作用很弱(40.9%和43.1%),終濃度需達(dá)到320 μg·ml-1時(shí)才會(huì)產(chǎn)生比較明顯的抑制作用(78.5%和81.5%)。試驗(yàn)結(jié)果提示小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體平滑肌有明顯的解痙作用,可能具有抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的藥理活性,值得進(jìn)一步深入研究。

        表3 小檗堿對乙酰膽堿致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD,n=8)

        注:與空白對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

        小檗堿在臨床上可以用于治療一些皮膚過敏性疾病[5-7],但其機(jī)理不清。根據(jù)一些已報(bào)道的臨床前藥理研究文獻(xiàn),小檗堿治療皮膚過敏性疾病的機(jī)理可能與其抗ⅳ型變態(tài)反應(yīng)藥理活性相關(guān),如有文獻(xiàn)報(bào)道小檗堿能抑制二硝基氟苯(DNFB)所致的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH){8-10},其機(jī)制涉及到抑制IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-2 等細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌[9],降低T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力[10]。我們的研究結(jié)果顯示,小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌有較好的解痙作用,提示其治療皮膚過敏性疾病的機(jī)理也可能涉及到抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的藥理作用。

        參考文獻(xiàn)

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        4徐叔云 主編. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第三版)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2005, 1411-1411.

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        9呂燕寧,邱全瑛. 小檗堿對小鼠DTH及其體內(nèi)幾種細(xì)胞因子的影響[J]. 中國免疫學(xué)雜志, 2000, 16(3): 139-141.

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        Effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig*

        Qiu Yi

        (LuZhou TCM Hospital of Sichuan Province, Sichuan Luzhou 646000)

        AbstractObjective:To study the effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig. Methods: The effects of berberine (20~100 μg·ml-1) on the contraction of ovalabumin sensitized ileum smooth muscle strips were observed by ex vivo evaluation methods, and the effects of berberine (20~320 μg·ml-1) on the contraction of ileum smooth muscle strips induced by His/Ach were also observed. Results: Berberine (20~100 μg·ml-1) could significantly inhibited the contractility of sensitized ileum smooth muscle, and partly inhibited the contraction induced by His/Ach. Conclusion: Berberine has significant antispasmodic activity on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig.

        Key Words:Berberine; Isolated ileum smooth muscle strips

        (收稿日期:2015-12-14)

        作者簡介:仇燚,男,副主任醫(yī)師,主要從事中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)科臨床工作,Email:qiuyihaoren@163.com。

        *基金項(xiàng)目:瀘州市衛(wèi)生科技項(xiàng)目(編號:2005-05)

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