王　敬　王　琪　黃金秀，2　齊仁立，2?（.重慶市畜牧科學院，榮昌402460；2.農(nóng)業(yè)部養(yǎng)豬科學重點實驗室，榮昌402460）

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動物肌肉生長發(fā)育相關(guān)microRNAs的表達模式和調(diào)控機制

王敬1王琪1黃金秀1，2齊仁立1，2?
（1.重慶市畜牧科學院，榮昌402460；2.農(nóng)業(yè)部養(yǎng)豬科學重點實驗室，榮昌402460）

摘要:microRNAs（miRNA）是生物體內(nèi)自然存在的一種非編碼小RNA，能夠靶向調(diào)控眾多基因的表達，進而參與多種生命活動的調(diào)節(jié)。動物肌肉組織的生長發(fā)育是一個復(fù)雜的過程，受到諸多調(diào)控因子的精密控制。本文綜述了miRNA特別是一些肌特異性miRNA在動物肌肉生長發(fā)育過程中的表達模式和調(diào)控機制。

關(guān)鍵詞:micorRNAs；肌肉；肌細胞；肌特異性miRNA

肌肉是動物體內(nèi)一種極為重要的組織器官，肌肉的正常生長發(fā)育保障了機體運動系統(tǒng)的正常運作并維持能量代謝的平衡。除此以外，肌肉（肌纖維）的數(shù)量、類型和狀態(tài)對于動物肉產(chǎn)品品質(zhì)也有極為重要的影響。肌肉的形成和發(fā)育大概包括成肌細胞分化形成、成肌細胞遷移增殖和多核肌細胞/肌管形成3個階段［1］。肌細胞是肌肉的基本組成單元，在胚胎發(fā)育后期肌細胞數(shù)量趨于穩(wěn)定，動物出生以后則是肌細胞體積膨大和肌纖維數(shù)量增加［2］。此外，在動物的肌肉創(chuàng)傷修復(fù)過程中也存在肌細胞的大量增殖。

肌肉組織的生長發(fā)育是一個復(fù)雜的調(diào)控過程，肌前體細胞在大量調(diào)控因子的精密調(diào)控下生長分化為多核肌細胞（肌管）。堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白質(zhì)家族的生肌因子5（myofactor-5，Myf5）、成肌細胞的增殖和分化生肌決定因子（myogenicdeterminationgene，MyoD）、肌肉發(fā)生調(diào)控因子（muscleregulatoryfactors-4，Mrf4）和肌細胞生成素（myogenin，MyoG）等生肌調(diào)節(jié)因子或肌源性分化因子、MADS同源盒蛋白、鋅指蛋白和Wnt家族成員等基因的順序表達對肌細胞的形成、分化和肌組織形態(tài)的構(gòu)建起著重要作用［2-6］。

1　MicroRNAs（miRNA）的生成和調(diào)控

miRNA是一類廣泛存在于動植物體內(nèi)具有調(diào)控功能的非編碼小RNA。在真核生物的基因組上通常為基因間區(qū)或內(nèi)含子區(qū)的初級轉(zhuǎn)錄本miRNA （pri-miRNA），在Drosha（RNA酶Ⅲ家族成員之一）和其輔助因子Pasha［雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）結(jié)合蛋白］的作用下，轉(zhuǎn)變成長度約70 nt具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA（pre-miRNA）。然后，RNA-三磷酸鳥苷（GTP）和輸出蛋白5（exportin 5）將pre-miRNA輸送到細胞質(zhì)中，Dicer（RNA酶Ⅲ家族成員之一）將其剪切成為約22 nt長度的具有功能的miRNA成熟體。與長鏈非編碼RNA、環(huán)狀非編碼RNA和piRNA等其他非編碼RNA相比，miRNA的調(diào)控機制相對簡單。成熟體miRNA 5′端的2～8個核酸序列被稱為“種子序列”，能夠與靶基因的3′非翻譯區(qū)（3′UTR）互補結(jié)合，進而引導沉默復(fù)合體降解靶mRNA或阻遏靶mRNA的翻譯［7-8］。miRNA的生成和調(diào)控機制見圖1［9］。

目前在動物上發(fā)現(xiàn)和確認的miRNA在不斷增多，miRBASE數(shù)據(jù)庫（v21.0）已經(jīng)收錄了1 920個小鼠、430個豬和1 009個雞的miRNA成熟體。這些數(shù)量龐大的miRNA既可以單獨發(fā)揮作用，也可以由數(shù)個miRNA組成協(xié)同調(diào)控網(wǎng)。值得注意的是，許多miRNA基因在染色體上成簇排列形成基因群（稱為miRNA簇），它們常位于一個多順反子內(nèi)，通過共表達在胚胎發(fā)育、細胞周期和細胞分化等諸多方面發(fā)揮協(xié)同調(diào)控的功能［10］。通常，1 個miRNA可以調(diào)控多達數(shù)百個靶mRNA，而1個基因也可能同時受到多個miRNA的影響［11］。憑借對大量靶基因的調(diào)控，miRNA參與機體內(nèi)的多種生命活動，包括細胞的增殖、分化、死亡、應(yīng)激反應(yīng)、胞內(nèi)代謝和信號傳導［11-12］。

圖1　miRNA的生成和調(diào)控機制Fig.1 The production and regulatory mechnism of miRNA［9］

2　miRNA的表達模式

miRNA的表達具有組織特異性。Babak等［13］使用基因芯片檢測了小鼠17個不同的組織器官中miRNA的表達情況，檢測到的78個miRNA中至少有1/2存在組織特異性分布。Liang等［14］檢測了345個miRNA在40個人類器官中的表達情況，通過聚類分析把miRNA分為8個組織特異性表達組，分別是肌肉、胃腸道/上皮細胞、腦、腦/外周血單核細胞、心臟、肝臟、胎盤和睪丸。miRNA的表達模式還具有時空特異性，在成年小鼠［15］和豬［14］的肌肉組織中檢測到100多種miRNA的穩(wěn)定表達，它們中的多數(shù)在胚胎期和生長早期表達水平較低，隨著動物的生長，其表達水平顯著升高，但有少部分miRNA則表現(xiàn)出相反的表達趨勢。此外，還有一些miRNA則隨時間延長呈現(xiàn)波浪式的表達［16］。

miRNA的正常表達對肌肉的形成和生長是必不可少的。Dicer是哺乳動物體內(nèi)miRNA成熟體加工過程中所必需的核酸內(nèi)切酶。在條件性敲除Dicer后，小鼠的骨骼肌發(fā)育受阻，表現(xiàn)出增生不全［17］，表明miRNA對于骨骼肌的發(fā)育有重要意義。另外，心肌和骨骼肌肥大、肌肉萎縮以及心力衰竭等與肌肉相關(guān)的疾病都伴隨著明顯的miRNA異常表達［17-19］。

肌細胞特有表達或者高表達一些miRNA，它們被認為是肌特異性（muscle-specific）的miRNA，例如骨骼肌特異性的miR-1、miR-133和miR-206以及心肌特異性的miR-208a/ b等。多數(shù)肌特異性miRNA都可以直接或間接作用于Myf5和MyoD等生肌基因，進而影響肌細胞的增殖、分化和凋亡。此外，肌細胞中一些非肌特異性miRNA也被確認參與了分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，影響著肌細胞的生長。這些miRNA或直接靶向調(diào)控肌細胞增殖分化調(diào)控因子，或通過參與細胞內(nèi)信號傳導和轉(zhuǎn)錄分子調(diào)控間接參與肌細胞的生命活動。此外，miRNA的正常表達不但對于胚胎期肌細胞的形成發(fā)揮重要作用，對于成年期肌肉損傷后的修復(fù)也有重要影響。

隨著高通量測序和基因芯片等新技術(shù)的快速發(fā)展，越來越多參與肌肉生長調(diào)節(jié)的miRNA被發(fā)現(xiàn)和確認。許多miRNA除了在不同組織器官具有表達特異性外，在不同類型的肌肉中也都存在明顯的差異。聶晶［20］通過Solexa測序發(fā)現(xiàn)有363 個miRNA在豬的背最長肌和腰大肌中都有表達，而且有193個miRNA的表達存在顯著差異，其認為這可能與肌纖維類型的差異有關(guān)。Ma等［21］分別從豬的紅肌、白肌和混合肌等肌纖維中提取RNA構(gòu)建small RNA文庫，測序發(fā)現(xiàn)miRNA表達水平在不同類型的肌肉中存在差異（圖2）。這些研究提示我們在以后的研究中要更加嚴格區(qū)分miRNA對于肌纖維類型和功能的差異調(diào)控。

圖2　miRNA在不同類型肌肉中的差異表達Fig.2 The differential expression of miRNAs in diverse types of muscle［21］

3　miRNA對動物骨骼肌的調(diào)控及其機制

3.1肌特異性miRNA

miR-1、miR-133a、miR-206是相對研究最多的肌特異性miRNA，它們只在動物的心臟和骨骼肌高表達，調(diào)控肌細胞的增殖和分化，是肌肉形成的關(guān)鍵。在小鼠基因組中，miR-1、miR-133和miR-206形成3個基因簇，即18號染色體的miR-1-2 和miR-133a-1、2號染色體的miR-1-1和miR-133a-2以及1號染色體的miR-206和miR-133b，它們能夠形成雙順反子轉(zhuǎn)錄本同時進行轉(zhuǎn)錄，但是它們的調(diào)控作用卻并不相同。除此以外，近年新發(fā)現(xiàn)的miR-208a/ b、miR-486和miR-499等miRNA也都被認為是肌特異性miRNA。

Chen等［22］最早報道了miR-1可以靶向調(diào)控肌肉生長抑制因子組蛋白去乙?；?（HDAC4）基因的表達，從而促進肌肉生長。2010年，Chen等［23］進一步研究發(fā)現(xiàn)miR-1和miR-206可以促進骨骼肌衛(wèi)星細胞分化，顯著抑制其增殖。配對盒基因（paired box，Pax）7是Pax基因家族的一員，它能夠誘導多能干細胞轉(zhuǎn)變?yōu)樯〖毎∪飧杉毎某霈F(xiàn)就取決于Pax3和Pax7的正常表達。Chen等［23］確認Pax7是miR-1和miR-206共同的直接靶標，它們通過調(diào)節(jié)Pax7的表達來影響肌細胞的發(fā)育。下調(diào)miR-1和miR-206能夠增加Pax7蛋白水平并促進肌細胞增殖，然而miR-1和miR-206的缺失會降低Pax7的表達并抑制肌細胞的分化。后續(xù)試驗也證實了miR-1和miR-206在C2C12細胞分化中的關(guān)鍵調(diào)控作用［24］。Nakajima等［25］試驗比較了miR-1對C2C12肌細胞成肌分化、成骨分化和成脂分化的差異調(diào)控作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過表達miR-1可以顯著促進成肌分化和肌管的形成，而對于誘導條件下C2C12細胞的成骨分化和成脂分化沒有顯著影響。這一試驗結(jié)果也表明肌特異性miRNA的定向調(diào)控功能較為穩(wěn)定。

基于基因敲出鼠的研究發(fā)現(xiàn)，單獨敲除miR-133a-1或miR-133a-2并沒有對小鼠肌肉生長發(fā)育造成顯著的影響，但是兩者一起缺失則會造成快肌纖維的病變，并伴隨著線粒體損傷和快、慢肌纖維之間的類型轉(zhuǎn)換［26］。這一試驗結(jié)果直接反映了miR-133a在維持肌肉生長發(fā)育和功能正常方面的重要作用。但是，基因缺失鼠并沒有表現(xiàn)出更加極端的肌肉損傷性病變。這可能是由于許多miRNA都有共同的靶基因，一旦某一miRNA表達失常，動物機體會通過其他miRNA進行功能性的補償。在細胞試驗中，miR-133可以通過靶向血清反應(yīng)因子（serum response factor，SRF）促進肌細胞的增殖［22］，并通過抑制神經(jīng)多聚嘧啶序列結(jié)合蛋白（polypyrimidine track-binding protein，nPTB）的表達，使得nPTB調(diào)控的骨骼肌分化過程中不同轉(zhuǎn)錄本基因剪切模式產(chǎn)生變化，從而發(fā)揮抑制骨骼肌細胞分化的作用［27］。關(guān)于miR-133b對肌肉生長的影響還不清楚，但是有研究發(fā)現(xiàn)病人在患心肌梗死時候心肌中存在miR-133b的表達下調(diào)［28］。

許多研究都確認了miR-206的促肌肉生長作用，在體外試驗中它能夠顯著促進生肌細胞的分化和肌管融合，一系列生肌負調(diào)控因子都是它的靶標，包括Notch3、Igfbp5、Meox2、視黃酸受體β （RARB）、Fzd7、絲裂原蛋白激酶激酶激酶激酶3 （MAP4K3）、氯離子通道蛋白3（CLCN3）、活化T細胞核因子5（NFAT5）和基質(zhì)金屬蛋白酶3［29］。多數(shù)研究都認為miR-206和miR-1共同發(fā)揮作用。此外，在生肌階段miR-206和miR-29一起抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）信號通路，而該信號通路是肌細胞分化的負調(diào)控者［30］。

3.2非肌特異性miRNA

大量的非肌特異性miRNA在不同試驗中也都表現(xiàn)出了對肌肉生長發(fā)育的調(diào)控作用。雖然這些miRNA在動物的不同組織都有廣泛表達，但是它們在肌肉組織或者肌細胞中的表達異常會對肌肉的生長發(fā)育產(chǎn)生正面或負面的影響。

一些廣泛表達的miRNA在肌肉生長發(fā)育過程中發(fā)揮了正向調(diào)控作用。過表達miR-148a能夠促進C2C12肌細胞系和小鼠原代骨骼肌細胞的分化，促進肌肉生成，而miR-148的生肌作用是通過降解Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶1 （ROCK1）來實現(xiàn)的［31］。云青等［32］發(fā)現(xiàn)miR-143-3p在骨骼肌和成肌細胞中均有表達，過表達miR-143-3p能夠促進C2C12肌細胞分化。miR-29對于肌肉的形成也有促進作用，它能夠下調(diào)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（Akt3）基因的表達，抑制骨骼肌細胞的增殖并促進其分化［33］。miR-181則可以通過抑制同源盒-A1（homeobox-A1，Hox-A1）基因的表達，促進成肌細胞分化［34］。

還有一些miRNA在動物的肌肉生長和發(fā)育過程中具有負調(diào)控作用。Wang等［35］預(yù)測分析發(fā)現(xiàn)，miR-23a的種子序列能夠結(jié)合肌球重鏈基因（fast myosin heavy chain，MYH），包括MYH1、2和4。在隨后的試驗中，他們發(fā)現(xiàn)小鼠肌肉組織中的miR-23a表達模式與肌肉的生長過程高度負相關(guān)，在C2C12細胞上進行的功能性試驗也證明miR-23a能夠抑制肌細胞的分化。但是，miR-23a的正常表達也是肌肉生長不可或缺的。在肌肉萎縮過程中會產(chǎn)生大量MAFbx/ atrogin-1、MuRF1、E3連接酶，在肌肉萎縮和退化中調(diào)控黏膜萎縮變化。miR-23a能夠抑制MAFbx/ atrogin-1、MuRF1的表達，從而抑制肌肉萎縮［36］。這些不同的試驗結(jié)果表明miR-23a在肌肉的生長和損傷修復(fù)過程中都扮演了極其重要的角色。Seok等［37］的研究表明，miR-155可以靶向調(diào)控生肌因子肌肉細胞特異性增強因子2A（MEF2A）的表達，進而影響骨骼肌細胞的分化。熊燕等［38］研究發(fā)現(xiàn)，miR-155能夠抑制C2C12肌細胞的分化，減少肌管的形成，預(yù)測并驗證了T細胞因子4（TCF4）是miR-155的一個靶基因，而TCF4是經(jīng)典Wnt通路調(diào)控成肌分化的關(guān)鍵因子，在動物的胚胎階段對肌肉的形成發(fā)揮重要作用，是肌細胞終末分化和衛(wèi)星細胞定向的關(guān)鍵調(diào)控因子。

此外，miR-27a/ b、miR-31、miR-489等多個miRNA對生肌細胞激活、細胞肌原性維持和肌細胞增殖與分化也表現(xiàn)出調(diào)控作用。

4　miRNA對動物心肌的調(diào)控及其機制

心肌與骨骼肌的結(jié)構(gòu)基本相似，也是橫紋肌的一種。與骨骼肌的多核細胞不同，心肌細胞通常只有1個細胞核。多種心臟疾病和心臟功能損傷都與心肌生長異常有關(guān)，而miRNA表達異常被視為心肌疾病的一個重要標志。miR-208a、miR-208b被認為是心肌特異性miRNA，且miR-208b只在心臟組織特異性表達。miR-208a、miR-208b與心肌纖維形成、心肌缺血、心肌肥厚和心力衰竭都有密切關(guān)系，它們可以作為心肌損傷的血清標志物用于臨床診療［39-41］。此外，miR-1、miR-133等對于心肌的生長發(fā)育同樣具有重要影響。在心肌細胞中過表達miR-1，能夠顯著抑制苯腎上腺素所誘發(fā)的心肌細胞肥大，進一步研究表明miR-1可能通過負調(diào)節(jié)雙解絲蛋白1（TWF1）的表達參與心肌肥厚的發(fā)生過程［42］。在小鼠或果蠅中上調(diào)或下調(diào)miR-1的表達，小鼠和果蠅的心臟無一例外出現(xiàn)發(fā)育畸形［43-44］。鼠的缺血性心臟病伴隨著心肌層的miR-1水平顯著升高［45］。此外，在氧化應(yīng)激誘導的心肌細胞凋亡過程中，miR-1發(fā)揮了促凋亡作用，而miR-133則抑制凋亡發(fā)生［46］。目前，關(guān)于miRNA在心臟發(fā)育和心肌損傷中的研究主要集中在特異性miRNA上，更多非特異性miRNA的表達和功能還有待進一步的探索。

5　miRNA對動物平滑肌的調(diào)控及其機制

平滑肌也稱無紋肌，在無脊椎動物軀體肌中廣泛分布，也是脊椎動物大部分內(nèi)臟器官的主要肌纖維類型，其纖維類型和代謝特點與橫紋?。ü趋兰『托募。┯忻黠@的區(qū)別。與骨骼肌相比，miRNA對平滑肌生長調(diào)控方面的研究還相對匱乏。現(xiàn)有的研究表明，miR-29、miR-145、miR-143等數(shù)個miRNA參與了平滑肌特別是血管平滑肌生長發(fā)育的調(diào)控。miR-145能夠抑制胚胎干細胞的自我更新，促進其定向分化。Xu等［47］發(fā)現(xiàn)miR-145主要通過抑制細胞核多能性因子八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4（OCT4）、SOX2及Kruppel樣因子4（KLF4）基因轉(zhuǎn)錄表達，促進多能干細胞向血管平滑肌細胞的定向分化，并且OCT4能夠抑制miRNA的啟動子，它們之間可能存在雙向負反饋調(diào)節(jié)機制。在miR-29缺失的肺遠端血管中，血管平滑肌細胞中F-框蛋白32（FBXO32）表達量顯著提高，這表明miR-29可能通過調(diào)節(jié)FBXO32的表達在平滑肌細胞中發(fā)揮重要作用［48］。另外，miR-124對肺動脈平滑肌細胞的增殖分化具有顯著的調(diào)控作用［49］。

6　miRNA與畜禽肌肉生長

目前，在產(chǎn)肉家畜上關(guān)于miRNA的研究還十分有限，但是可以肯定的是miRNA與動物肌肉生長和肉質(zhì)性狀關(guān)系密切。由于miRNA普遍具有進化上的保守性和功能上的穩(wěn)定性，不同動物體內(nèi)miRNA的合成途徑都是完全一樣的，且miRNA的靶位點也具有高度保守性。例如，肌特異性miR-1幾乎在所有脊椎動物上都存在，與肌肉的產(chǎn)生和發(fā)育具有密切關(guān)系。所以，基于小鼠等模式動物上的機制研究具有一定的外推性。但是，畜牧科研工作者有必要在家畜和家禽上開展更為具體的研究，以期更有針對性的指導動物生產(chǎn)工作。

近年來，一些研究開始關(guān)注于豬、雞和反芻動物上肌肉相關(guān)miRNA的表達和功能，但這些研究的主要內(nèi)容還集中在miRNA表達特征的檢測和影響肉質(zhì)的主要miRNA篩選方面。McDaneld等［50］、Nielsen等［51］和Hou等［52］的研究團隊分別使用高通量測序的方法檢測并分析了豬骨骼肌中的miRNA在不同生長階段和不同組織的表達情況，在豬的肌肉組織中鑒定出一批新的miRNA，為進一步研究肌肉miRNA調(diào)控作用提供了基礎(chǔ)。李虹儀［53］主要比對了不同品種豬的miRNA表達差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)藍塘豬和大白豬肌肉組織中miRNA表達相似性達到90%，10個顯著差異的miRNA涉及肌肉的生長發(fā)育。測序研究表明，山羊的肌肉組織有517個物種間保守的miRNA和2個山羊基因組特有的miRNA，其中306個穩(wěn)定表達［54］。韓志玲等［55］檢測了miR-1、miR-133和miR-24等7個miRNA在絨山羊肌肉中的表達模式，其中miR-1和miR-133具有相似的表達規(guī)律，并受到年齡和性別的影響。綜合這些試驗結(jié)果表明品種、性別、生長階段不同的動物肌肉中的miRNA表達都會有明顯差異。此外，閹割會對動物肌肉中miRNA表達產(chǎn)生影響。檢測發(fā)現(xiàn)公牛和閹牛的肌肉組織有32個miRNA存在顯著差異［56］。營養(yǎng)水平和某些營養(yǎng)素的攝入也能夠影響動物肌肉生長發(fā)育和肌肉中miRNA的表達，例如氨基酸、不飽和脂肪酸、吡啶羧酸鉻等［19，57-58］。這些在大動物上開展的研究工作有助于我們更好地理解動物肉品質(zhì)形成機理和調(diào)控機制，并通過遺傳改良和營養(yǎng)調(diào)控技術(shù)手段來改良動物肉品質(zhì)。

7　小　結(jié)

miRNA廣泛參與不同生命活動的調(diào)節(jié)，因此受到越來越多的關(guān)注。隨著研究技術(shù)不斷提高，將會有更多涉及肌肉生長發(fā)育調(diào)控的miRNA及其調(diào)控靶位點被發(fā)現(xiàn)和確認。研究肌肉組織中miRNA的表達、功能和靶位點以及其對肌肉生長發(fā)育的調(diào)控作用能夠深入揭示肌肉形成的分子調(diào)控機制。這些研究工作一方面有助于開發(fā)肌肉相關(guān)疾病的檢測標志物和靶向診療藥物，另一方面有助于通過遺傳改良和營養(yǎng)手段針對性提高動物的肉品質(zhì)。

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（責任編輯菅景穎）

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Expression Patterns and Regulation Mechanisms of MicroRNAs Relate in Growth and Development of Muscle in Animals

WANG Jing1WANG Qi1HUANG Jinxiu1，2QI Renli1，2?
（1. Chongqing Academy of Animal Science，Rongchang 402460，China；2. The Key Laboratory of Pig Industry Sciences，Ministry of Agriculture，Rongchang 402460，China）

Abstract：MicroRNAs（miRNA），a kind of non-coding small RNA，extensively exists in a variety of organisms. MiRNA is able to participate in almost all life events through regulating expression of various target genes. Growth and development of muscle in animals is a complex process，which is controlled by numerous regulatory factors. This review summarized the expression patterns and regulation mechanisms of miRNA，especially several muscle-specific miRNA，in the growth and development of muscle in animals.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2016，28（3）：687-694］

Key words：micorRNAs；muscle；muscle cell；muscle-specific miRNA

Corresponding author?，assistant professor，E-mail：qirenli1982 @163.com

通信作者:?齊仁立，助理研究員，E-mail：qirenli1982@163.com

作者簡介:王 敬（1990—），女，重慶人，研究實習員，研究方向為動物肌肉發(fā)育調(diào)控。E-mail：1962680788@qq.com

基金項目:國家973資金資助項目（2012CB124702）；重慶市畜牧科學院基本科研業(yè)務(wù)費（14441）

收稿日期:2015-09-29

doi：10.3969/ j.issn.1006-267x.2016.03.008

中圖分類號:S828

文獻標識碼:A

文章編號:1006-267X（2016）03-0687-08