楊福義，趙梓涵，高　涵

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

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地塞米松對大鼠自發(fā)性蛛網膜下腔出血所致腦積水的影響①

楊福義，趙梓涵，高涵

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要:目的: 對大鼠腦部枕大池重復注血將大鼠制成蛛網膜下腔出血的模型,并對大鼠模型進行地塞米松進行治療，不同時間檢測軟腦膜纖維化程度，探討地塞米松對大鼠模型所致腦積水的影響。方法:選取雄性Wistar大鼠24只，進行隨機分配，分成兩組每組12只(安慰劑對照組、地塞米松給藥組)，并將其制成SAH(蛛網膜下腔出血)模型，注血時間間隔72h，邊建模邊同時給藥，對照組用藥為0.9%Nacl腹腔注射；地塞米松組用藥量按大鼠體重100mg/1.5mg腹腔給藥。制模后3d、7d及21d時每組隨機選取4只大鼠進行處死。通過干、濕重法測定腦組織含水量及標本中軟腦膜平均纖維厚度。結果:①腦組織含水量數據顯示地米給藥組明顯小于對照組，且(P<0.05)具有統(tǒng)計學意義；②軟腦膜纖維標本厚度數據顯示對照組大于給藥組，且(P<0.05)具有統(tǒng)計學意義。③SAH中腦組織含水量與軟腦膜厚度呈現正相關性。結論：通過對大鼠模型應用地塞米松治療蛛網膜下腔出血，結果顯示地塞米松可能在其腦積水的形成及發(fā)展過程中起到抑制作用，本實驗可能會對臨床用藥提供實驗理論依據。

關鍵詞:自發(fā)性蛛網膜下腔出血；地塞米松；軟腦膜；腦積水

腦部血管由于某種因素導致血管破裂，管內血液外溢并充滿蛛網膜下腔稱之腦蛛網膜下腔出血(SAH，Subarachnoid hemorrhage)。其在臨床上可分兩類：創(chuàng)傷性、自發(fā)性，自發(fā)性又可分為原發(fā)和繼發(fā)性。原發(fā)性蛛網膜下腔出血機理為腦底或腦部表面的血管由于各種因素破裂，破裂后血液溢出流入蛛網膜下腔；繼發(fā)性蛛網膜下腔出血為腦內實質出血后血液穿過腦組織而流入蛛網膜下腔。在蛛網膜下腔出血后下腔或腦室的病理性擴張的出現可能導致積水，積水后壓力增高腦實質相對應減少等特征的病變，是腦部動脈瘤破裂后常見并發(fā)癥之一, 對患者的恢復及其預后可產生嚴重影響[1]。腦積水從梗阻部位可分：交通腦性、阻塞腦性積水；從發(fā)病時間可分：慢性、亞急性、急性腦積水；按顱內增高可分：正常壓力、高壓力性腦積水；還有特殊類型如在額部蛛網膜下腔出現積液的腦積水[2]。本實驗擬通過建立蛛網膜下腔出血動物模型，應用地塞米松進行干預，在不同時間點檢測SAH兩組模型中腦組織含水量及蛛網膜厚度，探討地塞米松在SAH腦積水發(fā)生發(fā)展中起到的作用，希望能為臨床用藥提供實驗數據及依據。

1材料與方法

1.1分組與動物模型制備

首先購買Wistar雄性大鼠30只，在其中隨機選取24只(體重260~310g)，隨機分為安慰劑對照組、地塞米松給藥組，每組12只。按大鼠體重給予3%戊巴比妥鈉(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，在無菌條件下行單側股動脈埋針備用，切開環(huán)枕筋膜，穿刺針穿刺后每只大鼠頭低位枕大池內注射股動脈學0.15mL制備SAH模型，同時以100mg體重1.5mg量腹腔注射地塞米松及0.9%Nacl，72h后重復以上步驟，完成模型制備。

1.2采集標本并保存

分別在各時間點(3d、7d、21d)將兩組內大鼠隨機處死4只。對心臟灌注，開顱取腦(去除嗅球及腦干)，在顯微鏡下進行蛛網膜剝離, 保存所得標本以備下一步檢測使用。

1.3檢測方法及主要觀察指標

1.3．1測定腦組織含水量

腦組織含水量按照干、濕重量法，組織含水量百分公式為：

具體方法在大鼠腦中線處切開，取一半標本放入紅外線干燥箱內緩慢烘干至恒重,稱取干重,用可精確到萬分之一額電子天平進行稱量干重、濕重。

1.3．2測定軟腦膜纖維厚度

首先制備軟腦膜石蠟切片：將腦組織另一半標本經脫水、透明固定后，制備石蠟切塊，5μm連續(xù)切片并烘干。然后利用Masson染色可將膠纖維染成藍色、肌纖維染成紅色的原理對切片進行染色，置于鏡下拍片，然后用圖像分析系統(tǒng)對軟腦膜纖維平均厚度進行測定 。

1.4統(tǒng)計學方法

2結果

2.1地塞米松在SAH后兩組間腦組織含水量的表達

見表1。用干濕重測量法對SAH后3d、7d、21d時兩組標本腦組織含水量進行測量，結果安慰劑照組與地塞米松組之間腦組織含水量比較，結果(P<0.05)認為有統(tǒng)計學意義。腦組織含水量公式[(WW-DW)/WW]×100%,(WW)為平測濕重，(DW)為烘干至恒干重。

表1　SAH后不同時間兩組大鼠腦組織

2.221d時兩組大鼠軟腦膜纖維平均厚度檢測

見表2。地塞米松組軟腦膜平均厚度明顯低于安慰劑組,經統(tǒng)計學分析，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表2　SAH后兩組大鼠軟腦膜纖維平均

地塞米松組與安慰劑組相比，★P<0.05。

2.3SAH后腦組織含水量與軟腦膜厚度相關性

應用Spearman統(tǒng)計分析地塞米松腹腔給藥組，第21天時腦組織含水量和軟腦膜纖維平均厚度，相關系數r=0.639。說明腦積水與軟腦膜厚度可能在SAH中的表達呈正相關。

3討論

腦部血管由于某種因素導致血管破裂，管內血液外溢并充滿蛛網膜下腔稱之腦蛛網膜下腔出血(SAH，Subarachnoid hemorrhage)。其在臨床上可分創(chuàng)傷性和自發(fā)性兩類，其中自發(fā)性又可分為原發(fā)和繼發(fā)性[3]。一般情況下我們所謂的SAH大多數指額是原發(fā)性SAH，據文獻統(tǒng)計顯示其在急性腦血管病中約占15%，急性腦卒中約10%[4]。在臨床上部分實驗顯示影響SAH預后的主要因素有腦部積水、血管痙攣、顱高壓等[5]。腦血管痙攣(Cerebral vasospasm,Cvs)、顱內壓升高等因素不但可導致SAH,還可繼發(fā)造成腦部血液流降低，繼而在缺血缺氧，使多種途徑激活后導致腦水腫和神經元損傷[6]。

地塞米松是一種腎上腺皮質激素類藥，其抗炎及免疫抑制作用廣泛，還可通過因抑制炎癥反應而抑制了炎癥引起的纖維化作用。所以地塞米松對炎癥具有減輕和防止組織纖維化的作用，機理為地塞米松能通過抑制膠原蛋白合成并促進分解來抑制結締組織增生，降低細胞壁和血管壁的通透性使炎性滲出降低。其目前在中樞系統(tǒng)中作為具有抗纖維化作用藥的應用與文獻研究較少。國內可查到的相關文獻如杜臻雁,唐福林等研究說明地塞米松對SAH后機體的炎性反應可起到抑制作用，而且程度高低與藥物濃度相關[7]；谷志龍,楊福義等也有相反的糖皮質激素對已經形成的纖維化作用不明顯的文獻[8]。SAH發(fā)生后給予早期鞘內地米進行治療來防治腦積水的研究國內外一直備受關注，目前通過觀察糖皮質激素對顱腦損傷的治療作用的實驗結果與數據，大致上有了較肯定的結果。如vachon等人發(fā)現SAH后低劑量地米治療能減輕創(chuàng)傷后腦水腫[9]。段國升、王銳等發(fā)現在治療繼發(fā)性顱腦損傷時SAH組與對照組相比，給予大劑量地米組的療效比給予促腎上腺皮質激素組治療效果好[10]。

本實驗在SAH模型下，同時觀察了軟腦膜纖維平均厚度及腦組織含水量，在地塞米松腹腔給藥組、安慰劑生理鹽水腹腔組中的表達情況，發(fā)現①腦組織含水量中給藥組明顯低于對照組，并且(P<0.05)差異有統(tǒng)計學意義；②軟腦膜纖維標本厚度對照組高于給藥組且(P<0.05)差異有統(tǒng)計學意義。③SAH中腦組織含水量與軟腦膜厚度呈現正相關性，但本實驗例數較少不能完全肯定其在其它類似實驗中一定呈正相關。總體表明在蛛網膜下腔出血時應用地塞米松治療，結果顯示地塞米松可能抑制腦積水的形成及發(fā)展過程，以及可能對預后有所影響，希望本實驗可對臨床用藥提供理論依據。

參考文獻：

[1]Weir B,MacDonald L.Cerebral vasospasm[M].Clin Neurosurg,1993

[2]D ietrich H H, Dacey R C Jr. Molecu lar keys to the problems of cerebral vasospasm[J]. Neurosurgery,2000,46(3):517-530

[3]De Rooij NK, Rinkel GJ, Dankbaar JW, et al.Delayed cerebral ischemia after subarachnoid hemorrhage:a systematic review of clinical,laboratory,and radiological predictors[J].Stroke 2013,44(1):43-54

[4] Caner B, Hou J, Altay O,et al.Transition of research focus from vasospasm to early brain injury after subarachnoid hemorrhage[J].J Neurochem,2012,123(2):12-21

[5]楊福義,譚福生,谷志龍. 鹽酸法舒地爾對蛛網膜下腔出血后血管痙攣療效觀察[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學,2011,34(3):77

[6]Kamlya K,Kuyama H, Symon L. An experimental study of the acute stage of subarachnoid hemorrhage[J]. J Neurosurg,1998,59:917-926

[7]杜臻雁,唐福林.糖皮質激素抗作用機制的研究進展[J].中華醫(yī)學雜志,2006,86(35):2512-2515

[8]谷志龍,楊福義.蛛網膜下腔出血后血管痙攣與S100b基因表達的相關性[J].黑龍江醫(yī)藥科學,2011,34(3):15-16

[9]Vachon P,Moreau JP.Low doses of DEX amethasone decrease brain water content of collagenase-inducde cerebral hematoma[J].Can J Ves.2003,67(2):157-159

[10]王銳,段國升,羅毅,等.大劑量地塞米松、促腎上腺皮質激素對實驗性腦損傷的治療作用[J].中華創(chuàng)傷雜志,2000,16(9):563-564

(收稿日期：2015-04-07)

中圖分類號：R743.34

文獻標識碼：B

文章編號：1008-0104(2016)01-0074-02

作者簡介：楊福義(1964～)男，黑龍江佳木斯人，學士，主任醫(yī)師，碩士研究生導師。通訊作者：高涵(1982～)男， 黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。E-mail:gaohan1000000@163.com。