王東升，王復(fù)新，段　偉，王明華，劉瑩瑩

(1.大慶市人民醫(yī)院，黑龍江 大慶 163316；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154003)

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急性腦血栓形成與磷脂酰絲氨酸外翻、微粒釋放相關(guān)性的研究①

王東升1，2，王復(fù)新2，段偉1，王明華1，劉瑩瑩1

(1.大慶市人民醫(yī)院，黑龍江 大慶 163316；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯154003)

摘要:目的:通過對(duì)急性腦血栓患者血漿磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，PS)外翻、微粒(microparticle, MP)釋放的動(dòng)態(tài)變化的觀察，探討其與急性腦血栓的關(guān)系，為臨床早期治療提供依據(jù)。方法: 將符合條件的急性腦血栓患者20例作為試驗(yàn)組(排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病、惡性高血壓、尿毒癥、惡性腫瘤、近6個(gè)月輸血史)，同時(shí)收集20例正常體檢人員,無心腦血管疾病,檢測前無使用抗凝劑等干擾血凝系統(tǒng)的藥物，作為對(duì)照組。通過流式細(xì)胞儀、共聚焦顯微鏡檢測PS暴露，比較正常人與腦血栓患者的結(jié)果差異是否有顯著性，得出結(jié)論。結(jié)果:試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，差異有顯著性(P<0.05)，試驗(yàn)組微球總數(shù)明顯高于對(duì)照組。結(jié)論: 磷脂酰絲氨酸外翻、微粒釋放可以促進(jìn)凝血因子復(fù)合物及凝血酶的生成，最終促進(jìn)凝血的發(fā)生，在急性腦血栓形成中起到非常重要的作用。

關(guān)鍵詞:急性腦血栓；磷脂酰絲氨酸外翻；微粒釋放；研究

急性腦血栓形成(cerebral thr ombosis)是腦梗死最常見類型，約占全部腦梗死發(fā)病率的60%。血管壁結(jié)構(gòu)完整性破壞，止血、凝血、纖溶系統(tǒng)的失平衡和血流狀態(tài)的改變，共同構(gòu)成血栓形成的基本條件。有報(bào)導(dǎo)指出缺血性卒中與凝血機(jī)制異常、栓子阻塞腦血管關(guān)系密切[1]。本文主要是研究急性腦血栓患者止血、凝血、纖溶系統(tǒng)中血漿磷脂酰絲氨酸外翻、微粒釋放與血栓形成的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料

搜集2013-01~2014-01來我科住院確診的急性腦血栓患者20例，男16例,女4例 ,平均年齡(55.6±16.2)歲；所選患者具有下列請(qǐng)予以排除：(2型糖尿病、2級(jí)以上高血壓、尿毒癥腎功失代償期、明確診斷的惡性腫瘤、近6個(gè)月輸血史、各種明確診斷的急慢性感染)；正常對(duì)照組20例,來自正常體檢人員,需無心腦血管疾病,檢測前無使用抗凝劑等干擾血凝系統(tǒng)的藥物 ,男15例 ,女 5例 ,平均年齡(54.8±17.4)歲。

1.2標(biāo)本采集

兩組人員均應(yīng)清晨空腹肘部靜脈采血5mL,取1.8mL置于含0.2mL 0.109mol/L枸櫞酸鈉抗凝液的試管中，采血?jiǎng)幼饕炀?，同時(shí)血液必須混合充分以減少誤差(采血后，將抗凝管至少輕輕顛倒8~10次)，管中不能出現(xiàn)凝塊。使用離心機(jī)3000r/min離心10min，將血漿分離，并在2h內(nèi)使用Beckman Coulter公司全自動(dòng)生化分析儀對(duì)血漿進(jìn)行檢測。

1.3PS外翻、MP釋放水平檢測及來源分析

用megamix標(biāo)準(zhǔn)微球試劑盒調(diào)整流式細(xì)胞儀所需要的條件，并設(shè)定微粒(microparticle, MPs)的檢測范圍；定義1Μm以下并表達(dá)PS的門內(nèi)物質(zhì)為MPs，1μm以上不列入計(jì)算范圍內(nèi)，通過Truecount beads定量檢測MPs總數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用軟件為SPSS13.0，使用ANOVA方法分析結(jié)果，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

在分析的標(biāo)本中，只有小于1μm的門內(nèi)物質(zhì)有90%以上的顯示為膜聯(lián)蛋白v陽性，我們將這部分物質(zhì)稱為微球。通過對(duì)已知數(shù)量的TrueCount beads做為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參，計(jì)數(shù)微球的絕對(duì)數(shù)，每個(gè)分析的標(biāo)本中，小于1μm的門內(nèi)有90%以上為膜聯(lián)蛋白v陽性，我們定義為微球。急性腦血栓患者膜聯(lián)蛋白v陽性的微球總數(shù)平均為(4191±485)μL，而對(duì)照組正常人平均為(1629±252)μL。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析，急性腦血栓患者微球總數(shù)明顯高于正常人(P<0.05)。見表1。

表1　急性腦血栓患者和正常人每微升血漿中微粒數(shù)目±s)

注：與對(duì)照組比較*P<0.05，差異有顯著性。

3討論

PS是細(xì)胞膜上主要的陰性磷脂，是凝血啟動(dòng)和吞噬識(shí)別途徑上重要的信號(hào)分子。細(xì)胞膜PS外翻加速了凝血過程的兩個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，即凝血因子FX激活和凝血酶生成[2]。近年來研究發(fā)現(xiàn)MP也是獨(dú)立于細(xì)胞因子、激素等分子外的一種新型細(xì)胞間信息傳遞方式，參與機(jī)體幾乎所有的生理，病理生理學(xué)行為(如血栓形成、動(dòng)脈粥樣硬化、風(fēng)濕性疾病及惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展等)[3，4]。我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)急性腦血栓患者血漿PS暴露及微粒釋放明顯高于正常人，這些暴露PS的細(xì)胞又為凝血復(fù)合物的生成提供了催化表面，進(jìn)一步的增加了凝血酶原酶的生成。增加的凝血酶又進(jìn)一步促進(jìn)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，導(dǎo)致患者血栓的發(fā)生[5，6]。微粒不但攜帶細(xì)胞的表面標(biāo)志物和表達(dá)PS，而且其攜帶的細(xì)胞表面受體能夠調(diào)控細(xì)胞間的信息傳遞，從而參與疾病的發(fā)生發(fā)展。MPs表達(dá)PS使其促凝活性提高了50~100倍[7]，在血栓的形成中發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用[8]。做為診斷血栓金標(biāo)準(zhǔn)的血管造影，常伴有肺栓塞、下腔靜脈穿孔及急性腎衰竭等并發(fā)癥限制了其早期診斷[9]。急性腦卒中現(xiàn)在無論是在發(fā)病率和致死率都處于老年患者發(fā)病的第一位，對(duì)人們的生活質(zhì)量造成的很大影響，因此對(duì)該病發(fā)病機(jī)理的研究就更加至關(guān)重要[10]。我們認(rèn)為通過檢測循環(huán)微粒水平對(duì)急性腦血栓患者可以早期發(fā)現(xiàn),積極給予溶栓和抗凝治療,會(huì)明顯提高治療療效,改善預(yù)后。同時(shí)，已有研究表明已有研究表明腦血栓患者血流動(dòng)力學(xué)改變造成紅細(xì)變形性降低，聚集增加并伴有機(jī)械損傷，血小板活化、聚集性增強(qiáng)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷[11]。 我們認(rèn)為損傷或活化的細(xì)胞PS暴露增多，同時(shí)釋放微粒，為凝血因子提供催化表面，進(jìn)而大大促進(jìn)了凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引起血液高凝狀態(tài)，從而導(dǎo)致腦血栓形成。

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(收稿日期：2015-03-23)

中圖分類號(hào)：R743.32

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008-0104(2016)01-0148-02

作者簡介：王東升(1976~)男，黑龍江大慶人，在讀碩士研究生，副主任醫(yī)師。通訊作者：王復(fù)新(1959~)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:wdsok 19770208@163.com。