呂敬媛，張園彤

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

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Apelin與ADMA在子癇前期患者血清中的表達(dá)①

呂敬媛，張園彤

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要：目的：通過檢測子癇前期患者血清中Apelin及ADMA表達(dá)，主要研究在影響NO合成機(jī)制方面，各自在子癇前期發(fā)病過程中的作用及二者之間的關(guān)系。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(ELISA)分別檢測25例正常孕婦(對(duì)照組)和35例子癇前期患者(試驗(yàn)組，其中輕度子癇前期15例、重度子癇20例)血清中Apelin及ADMA的水平。結(jié)果：① Apelin在實(shí)驗(yàn)組患者血清中的濃度高于對(duì)照組(P<0.05)，且重度子癇前期組高于輕度子癇前期組。②ADMA在實(shí)驗(yàn)組患者血清中的濃度高于對(duì)照組(P<0.05)，且重度子癇前期組高于輕度子癇前期。③Apelin和ADMA在子癇前期患者血清中的表達(dá)呈正相關(guān),且相關(guān)性顯著(r=0.77280，P<0.05)。結(jié)論：Apelin與ADMA可能在妊娠過程中相互促進(jìn)表達(dá)，影響NO合成導(dǎo)致內(nèi)皮功能嚴(yán)重?fù)p傷，進(jìn)而加速子癇前期的發(fā)生發(fā)展。

關(guān)鍵詞：子癇前期；Apelin；ADMA

妊娠可以使血壓正常的婦女發(fā)生高血壓，或者加重已存在的高血壓。妊高癥的特點(diǎn)就是妊娠與血壓升高同時(shí)存在，這種疾病對(duì)母嬰的健康有很大危害。該組疾病包括幾種類型，分別為妊娠期高血壓、子癇前期、子癇、慢性高血壓并發(fā)子癇前期，妊娠合并慢性高血壓，其中子癇前期是妊娠期獨(dú)有的疾病。妊娠20周以后子癇多發(fā)，主要臨床表現(xiàn)為高血壓、水腫、蛋白尿，可伴有腦、腎臟、肝臟、心血管等多器官功能的損害或衰竭，嚴(yán)重者可出現(xiàn)抽搐、昏迷、視力模糊、甚至死亡。目前，子癇前期的發(fā)病機(jī)制尚未完全定論，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)其病因的研究主要集中在“兩階段”學(xué)說，其分別為胎盤形成不良學(xué)說與胎盤氧化應(yīng)激學(xué)說[1]。研究發(fā)現(xiàn)，胎盤缺血缺氧后可釋放一系列因子，這些因子使血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活和損傷，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損而引起血管痙攣，而全身小動(dòng)脈痙攣是子癇前期的基本病理生理變化。由此我們可以認(rèn)為系統(tǒng)性的血管內(nèi)皮受損是子癇前期病理生理機(jī)制重要樞紐。一氧化氮(NO)作為評(píng)判內(nèi)皮功能的重要因子之一，其表達(dá)的減少以及活性的降低與子癇前期的病理過程息息相關(guān)[2]。Apelin是新發(fā)現(xiàn)血管活性肽，AMDA是內(nèi)源性NOS抑制劑，都是參與調(diào)節(jié)L-精氨酸/eNOS/NO通路而影響子癇前期的發(fā)病。Apelin具有正性肌力、降低血壓、調(diào)節(jié)胰島素抵抗、調(diào)節(jié)脈管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)等[3～6]作用。本實(shí)驗(yàn)的目的是通過檢測子癇前期患者血清中Apelin及ADMA的濃度，探討從影響NO合成機(jī)制方面，其各自在子癇前期發(fā)病過程中的作用及二者之間關(guān)系，可能會(huì)為子癇前期的病因開辟新的道路，給疾病的預(yù)防和治療提供新的靶點(diǎn)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014-05～2014-11在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院及佳木斯婦幼保健院產(chǎn)科住院的60位孕婦作為研究對(duì)象。收集35例子癇前期患者，其中15例為輕度子癇前期患者，20例為重度子癇前期患者。隨機(jī)選取同時(shí)期妊娠晚期且血壓正常的25例孕婦作為病例對(duì)照組。子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版[7]。入選標(biāo)準(zhǔn)：1)所有病例都為單胎初產(chǎn)且行剖宮產(chǎn)終止妊娠；2)既往無高血壓、心臟病、糖尿病、甲亢及肝腎疾病史；3)無其他妊娠合并癥及并發(fā)癥，無急、慢性感染及自身免疫性疾病；4)無輸血及煙酒嗜好。

1.2 標(biāo)本采集

要求所有對(duì)象均空腹8～10h，后抽取其肘靜脈血，至干燥的無菌試管中。室溫下放置血標(biāo)本30min，后置其于4℃、2500r/min下離心15min，分離出血清，將血清保存于-70℃的冰箱中凍存以待檢測。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采用ELISA法檢測實(shí)驗(yàn)對(duì)象血清中Apelin及ADMA的濃度，Apelin試劑及ADMA試劑均來自武漢三鷹生物有限公司，具體步驟嚴(yán)格按照說明書上操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

Apelin與ADMA在子癇前期組血清中的表達(dá)均高于正常對(duì)照組(P<0.05)，且重度子癇前期組Apelin與ADMA的表達(dá)均高于輕度子癇前期組(P<0.05)，見表1，圖1～2。

表1　各組孕婦血清ADMA和Apelin水平比較

圖1　各組患者血清中ADMA濃度(μmol/L)

圖2　各組患者血清中Apelin濃度(ng/mL)

經(jīng)Pearson進(jìn)行相關(guān)分析：Apelin與ADMA在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組血清中的表達(dá)呈正相關(guān)，且相關(guān)性顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.77280，P<0.05)。

3討論

3.1Apelin及ADMA的生物學(xué)特性

Apelin由內(nèi)皮細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分泌的，是1998年由Tatemoto等[8]應(yīng)用反向藥理學(xué)方法，憑借“孤兒受體策略”，從牛的胃中分離并提純。1999～2003年有研究表明[9～11]人Apelin的原前體肽(preproapelin)均由77個(gè)氨基酸組成?，F(xiàn)存核酸數(shù)據(jù)庫中分析顯示，人 Apelin基因由2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子組成，它的mRNA 長度為2673bp，位于染色體Xq25-26.1上。2003年Medhurst等[12]發(fā)現(xiàn)人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有Apelin mRNA 的表達(dá)，在乳腺、肺、心臟、腎、胎盤中也有表達(dá)，且表達(dá)最多的是胎盤。研究表明 Apelin 是一種新發(fā)現(xiàn)的血管活性肽，是由內(nèi)皮細(xì)胞分泌，與其受體結(jié)合后激活L-精氨酸/eNOS/NO途徑，活化內(nèi)皮細(xì)胞eNOS，刺激產(chǎn)生NO，從而起到調(diào)節(jié)血壓作用；通過參與胰島素抵抗、影響脂肪細(xì)胞的代謝參與代謝平衡；還能通過調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞進(jìn)程預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生；Apelin/APJ系統(tǒng)能調(diào)節(jié)腎小球的濾過功能、腎臟的血流及維護(hù)腎小管的功能。

不對(duì)稱二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)是一種內(nèi)源性一氧化氮合成酶(nitric oxide syn1hetase，N0S)抑制劑，是甲基化蛋白質(zhì)精氨酸殘基產(chǎn)生的一種蛋白代謝產(chǎn)物。ADMA產(chǎn)生的主要部位包括血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝臟、腎臟、腦組織等，還包括人體其他多種細(xì)胞和組織。研究表明，ADMA作為一種內(nèi)源性NOS(一氧化氮合酶抑制劑)，通過調(diào)節(jié)L-精氨酸/eNOS/NO通路，影響NO的合成起到調(diào)節(jié)血壓作用；糖耐量異?；颊哐獫{中ADMA高于正常值，ADMA和胰島素抵抗有關(guān)，從而參與糖尿病的發(fā)生及發(fā)展；此外，ADMA調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)而影響腎臟及心血管的疾病。

3.2Apelin及ADMA在子癇前期患者血清中的表達(dá)及意義

本研究顯示，Apelin在子癇前期患者血清中的濃度明顯高于對(duì)照組，且隨著病情加重而增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究表明，Apelin是最新發(fā)現(xiàn)的舒血管物質(zhì)之一，與AngⅡ受體結(jié)構(gòu)相似，參與血壓的調(diào)控[13]。在內(nèi)皮受損情況下，Apelin通過激活PKC使其磷酸化引起血管平滑肌收縮；在血管內(nèi)皮完整的情況下，使血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)激活，刺激NO的產(chǎn)生及釋放，起到舒張血管作用。在Apelin的作用下，血液循環(huán)中血管緊張素-1受體自身抗體(AT1-AA)激活NADPH誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。此外，表達(dá)在血管組織中 Apelin 還介導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，在胰島素抵抗和高胰島素血癥相關(guān)的肥胖癥患者中血清Apelin水平顯著增加。Apelin通過參與脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，使前列腺素E2和NO的合成減少，血引起管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙。此外，Apelin與免疫調(diào)節(jié)具有一定關(guān)系，它能夠一定程度上調(diào)節(jié)免疫炎癥因子白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-2、干擾素-γ的產(chǎn)生及T，B淋巴細(xì)胞的膽堿能活性。炎癥介質(zhì)以及由此產(chǎn)生的氧化應(yīng)激使血管內(nèi)皮損傷進(jìn)而發(fā)生子癇前期。本研究還顯示，ADMA在子癇前期患者血清中的濃度明顯高于對(duì)照組，且隨著病情加重而增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)過大量的動(dòng)物和人體試驗(yàn)表明ADMA與高血壓病、腎臟及心血管及其它疾病的發(fā)生及發(fā)展關(guān)系密切。近年來，國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道均證實(shí)和正常孕婦比子癇前期孕婦血液中ADMA濃度升高，甚至在患者出現(xiàn)臨床癥狀之前外周血中ADMA的水平已經(jīng)升高[14]。ADMA 可導(dǎo)致NOS 活性解耦聯(lián)，ADMA競爭性與NOS活性底物結(jié)合導(dǎo)致NO合成減少。而DDAH是ADMA的降解酶，ADMA的含量高低主要受其降解酶DDAH的調(diào)控。研究已證實(shí)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等一系列病理生理改變可引起DDAH表達(dá)減少和(或)活性減弱，導(dǎo)致ADMA水平升高，從而促進(jìn)內(nèi)皮功能失調(diào)，最終導(dǎo)致系統(tǒng)性血管阻力增加，出現(xiàn)高血壓。DDAH是能夠增加腺苷3'，5'-環(huán)腺苷酸(cAMP)的依賴的蛋白激酶(PKA)磷酸化過程，eNOS的下調(diào)PKA的誘導(dǎo)使CREB磷酸化消除。DDAH的表達(dá)降低，PKA的活化降低，可能會(huì)影響ERK1/2-CREB信號(hào)通路，從而eNOS的下調(diào)，使NO合成減少，導(dǎo)致內(nèi)皮功能紊亂。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Apelin及ADMA在研究對(duì)象血清中的表達(dá)呈正相關(guān)，且相關(guān)性顯著。有研究證明，大鼠在高濃度ADMA作用下內(nèi)皮功能遭到破壞，在此種病理?xiàng)l件下，Apelin與平滑肌上APJ受體結(jié)合引起強(qiáng)烈縮血管作用，使大鼠血壓升高[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與既往研究相符合。

綜上所述Apelin與ADMA均與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，只是兩者之間具體的相互作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究，因此通過對(duì)孕婦血清中兩者的檢測，可為子癇前期的早期診斷、預(yù)測病情及早期治療提供新的路徑。通過對(duì)影響Apelin及ADMA活性的酶進(jìn)行研究，分析其作用機(jī)制從而活化或滅活A(yù)pelin及ADMA蛋白，可能為某些臨床疾病提供新的治療思路。

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The expressions of Apelin and ADMA in serum of patients with pre-eclampsia and their correlationship

LüJing-yuan,ZHANGYuan-tong

(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003 ,China)

Abstract:Objective: By detecting the expressions of Apelin and ADMA among patients with preeclampsia, to research their effects on the mechanism of NO synthesis, and their role on the pathogenesis of preeclampsia, and the relationship between them. Methods: enzyme-linked immunosorbent experiment method (ELISA) was applied to detect Apelin and ADMA levels in serum of 25 normal pregnant women (control group) and 35 patients with preeclampsia (treatment group, 15 cases with mild preeclampsia, 20 cases of severe preeclampsia). Results:①The concentration of Apelin in serum of patients in experimental group was higher than that in control group(P<0.05), and the concentration in severe preeclampsia group was higher than that in mild preeclampsia group.②ADMA concentration in serum of patients in the experimental group was higher than that in the control group(P<0.05), and the concentration in severe preeclampsia group was higher than that in mild preeclampsia.③The expressions of Apelin and ADMA in patients with preeclampsia were positively and significantly correlated4(r=0.77280,P<0.05). Conclusion: Apelin and ADMA may promote each other to express in the process of pregnancy, which lead to serious damage to endothelial function by influencing the NO synthesis so as to accelerate the development of preeclampsia.

Key words:preeclampsia;Apelin;ADMA

(收稿日期：2014-12-03)

中圖分類號(hào)：R714.24+5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008-0104(2016)01-0104-02

作者簡介:呂敬媛(1968～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。通訊作者:張園彤(1988～)女，遼寧丹東人，在讀碩士研究生。E-mail:839615067@qq.com。