摘 要 在感染黃龍病的疫區(qū)內(nèi)，選育健康、生長良好且未感染黃龍病的沙糖橘植株作為母株，在繁殖外延體后，種植于感染黃龍病的疫區(qū)內(nèi)進(jìn)行抗病試驗(yàn)，并通過田間觀察和PCR檢測來確定其是否染病，最終篩選出具有黃龍病抗性的沙糖橘植株：建城4號、宋桂B(yǎng)2、宋桂B(yǎng)4母株。

關(guān)鍵詞 沙糖橘；抗黃龍?。黄贩N選育

中圖分類號：S332.2；S436.661.1+9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.34.004

知網(wǎng)出版網(wǎng)址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.s.20161223.1728.011.html 網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-12-23 17：28：00

柑橘黃龍病又稱黃梢病、黃枯病、青果病，是柑橘的致命病害，能使整片柑橘樹被毀。廣東省的肇慶、云浮是沙糖橘的主產(chǎn)區(qū)，種植沙糖橘是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民增加收入的主要途徑之一。據(jù)肇慶市、云浮市農(nóng)業(yè)局公開資料顯示，截至2015年底，兩地沙糖橘種植面積達(dá)4.53萬hm2。近些年來，由于柑橘黃龍病傳播速度非常之快，感染黃龍病的沙糖橘疫區(qū)不斷擴(kuò)大，導(dǎo)致沙糖橘生產(chǎn)面積急劇下降，大量的果場失收，直接影響了農(nóng)民的收入。

柑橘黃龍病菌的遠(yuǎn)距離傳播主要依靠帶病苗木和接穗的調(diào)運(yùn)，田間近距離傳播主要依靠柑橘木虱[1-2]。我國很多研究者為防治柑橘黃龍病作出了很大努力并取得了卓有成效的成果[3-4]。然而，至今還沒有發(fā)現(xiàn)抗病品種和特效藥劑[5]。只有培育出抗龍病的沙糖橘品種，才是降低果農(nóng)損失的最有效途徑。本研究是在感染黃龍病的疫區(qū)內(nèi)，選育健康、生長良好且未感染黃龍病的沙糖橘植株作為母株，在繁殖外延體后，種植于感染黃龍病的疫區(qū)內(nèi)進(jìn)行抗病試驗(yàn)，并通過觀察和PCR檢測來確定其是否染病，最終篩選出具有黃龍病抗性的沙糖橘植株。

1材料與方法

1.1無病毒母株來源

2014年，在郁南縣建城鎮(zhèn)、宋桂鎮(zhèn)、河口鎮(zhèn)嚴(yán)重感染黃龍病的沙糖橘種植果園內(nèi)，通過觀察篩選出6株（7年生）、16株（12年生）、14株（8年生）健壯的健康植株進(jìn)行檢測。

1.2研究方法

1.2.1 黃龍病檢測方法

柑橘黃龍病癥狀比較復(fù)雜，單憑肉眼觀察容易造成判斷錯誤。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術(shù)，是目前國際上檢測柑橘黃龍病菌的一種快速、靈敏、可靠的檢測技術(shù)。

1.2.2 嫁接方法

接穗采自篩選出的無病毒母株的健壯枝條。嫁接前將所用到的工具用10%次氯酸鈉消毒10 min。接穗最好隨采隨接，采時立即剪去葉片，掛好標(biāo)簽，用濕毛巾包好，裝塑料袋內(nèi)，留袋口通氣，可保存2 d。

采用播種酸橘種子培育砧木。播種前將種子用1/10000的高錳酸鉀溶液浸泡10 min，然后撈起用清水沖洗，晾干后播種。整地起畦密播，覆蓋厚度0.5 cm細(xì)沙，并蓋上遮陰網(wǎng)，每天噴淋保濕，待長出2～3片真葉時開始移苗。培育1 a后，可作為砧木用于嫁接。

2結(jié)果與分析

2.1優(yōu)良母株篩選

2014年4月，對觀察到的36株健康沙糖橘植株進(jìn)行第一次PCR檢測，結(jié)果見表1。由表1可知，建城鎮(zhèn)6個樣本中，4個不含有黃龍病病原，2個含有黃龍病病原，感染率為33.3%；宋桂鎮(zhèn)16個樣本中，12個不含有黃龍病病原，4個含有黃龍病病原，感染率為25.0%；河口鎮(zhèn)16個樣本中，7個不含有黃龍病病原，7個含有黃龍病病原，感染率為50.0%。第一次篩選出23株不含黃龍病病原的母株。

2015年2月，對2014年篩選出的23株沙糖橘母株進(jìn)行PCR檢測，第二次檢測結(jié)果見表2。由表2可知，建城鎮(zhèn)4個樣本中，1個不含有黃龍病病原，3個含有黃龍病病原，感染率為25.0%；宋桂鎮(zhèn)12個樣本中，11個不含有黃龍病病原，1個含有黃龍病病原，感染率為8.3%；河口鎮(zhèn)7個樣本中，均不含有黃龍病病原，感染率為0。因此，第二次篩選出19株不含黃龍病病原的母株。

2.2子代測定

2014年5月，從第一次篩選出的23株不含黃龍病病原的母株中，抽取生長最繁茂、健壯，葉片青綠的4株母株進(jìn)行擴(kuò)繁嫁接，采剪其枝條作為接穗，用酸橘苗做砧木，培育1年后，于2015年3月種植于嚴(yán)重感染黃龍病的疫區(qū)內(nèi)。2016年1月，對該4株母株及其子代進(jìn)行PCR檢測，結(jié)果表明：宋桂B(yǎng)3母株含有黃龍病病原，宋桂B(yǎng)3子代和建城4號、宋桂B(yǎng)2、宋桂B(yǎng)4母株及子代均不含黃龍病原。對照比較連續(xù)3年P(guān)CR測試結(jié)果可知，建城4號、宋桂B(yǎng)2、宋桂B(yǎng)4母株均不含黃龍病原。

3小結(jié)

本研究經(jīng)過3年跟蹤種植于嚴(yán)重感染黃龍病疫區(qū)內(nèi)的生長健康，且未感染黃龍病的沙糖橘植株，通過PCR檢測、嫁接繁殖子代測試，確定其抗黃龍病的性狀穩(wěn)定。研究結(jié)果表明，建城4號、宋桂B(yǎng)2、宋桂B(yǎng)3母株不含黃龍病病原，且具有穩(wěn)定的抗黃龍病能力。

在沙糖橘種植方面，培育和栽培無黃龍病原苗木是持續(xù)發(fā)展沙糖橘生產(chǎn)的基礎(chǔ)，同時，還需對黃龍病、病毒病及其蟲媒定期檢測，及時鏟除病株和防治蟲媒，加強(qiáng)土壤水肥管理等綜合防治技術(shù)措施，才能取得良好的效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]廣東農(nóng)林學(xué)院植病教研組.柑橘木虱傳遞柑橘黃龍病試驗(yàn)初報[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，1977（6）：50-53.

[2]Halbert S E，Manjunath K L. Asian citrus psyllids（Sternorrhyncha： Psyllidae）and greening disease in citrus： A literature review and assessment of risk in Florida[J].Florida Entomol，2004，87：330-354.

[3]林孔湘，駱學(xué)海.柑橘黃梢（龍）病熱治療的初步研究[J].植物保護(hù)學(xué)報，1965，4（2）：169-174.

[4]柯沖.柑橘黃龍病病原研究與防治建議[J].中國柑桔，1979，34（3）：29-32.

[5]王愛民，鄧曉玲.柑橘黃龍病診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（6）：101-103.

（責(zé)任編輯：丁志祥）