李亞張悅趙立東郭維維潘紅梅張亮袁碩龍任麗麗時晰1，楊仕明喬月華1徐州醫(yī)學(xué)院聽力中心，徐州1006中國人民解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科北京1008533徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床聽力中心，徐州1006重慶市畜牧科學(xué)院重慶060

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小型豬肌源性誘發(fā)前庭電位的檢測

李亞1，2*張悅2*趙立東2郭維維2潘紅梅4張亮4袁碩龍2任麗麗2時晰1，2楊仕明2喬月華1,3
1徐州醫(yī)學(xué)院聽力中心，徐州221006
2中國人民解放軍總醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科北京100853
3徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床聽力中心，徐州221006
4重慶市畜牧科學(xué)院重慶402460

【摘要】目的探索小型豬肌源性誘發(fā)前庭電位（Vestibular-evoked myogenic potential,VEMP）的最佳檢測方法。方法選取正常成年的雌性小型巴馬香豬，以3%戊巴比妥鈉+速眠新Ⅱ進(jìn)行麻醉之后，用自制裝置進(jìn)行固定，1000Hz強(qiáng)短聲誘發(fā)頸部伸肌肌源性電位和咬肌肌源性電位，并記錄其波形；結(jié)果頸部伸肌誘發(fā)肌源性電位，第一個正向波P的潛伏期7.65±0.64ms，振幅1.66±0.34uv，80dBSPL的引出率為75%；咬肌誘發(fā)肌源性電位，第一個正向波P的潛伏期7.60±0.78ms，振幅1.31±0.28uv，80dBSPL的引出率為66%。結(jié)論小型豬頸部伸肌和咬肌在強(qiáng)聲下誘發(fā)的肌源性電位潛伏期和閾值均一致；頸部伸肌部位所記錄到的VEMP波幅稍高于咬肌部位記錄到波幅；但相比之下，咬肌位置表淺，便于定位，肌肉組織發(fā)達(dá)，肌緊張性強(qiáng)，更易于肌源性誘發(fā)電位的記錄。

【關(guān)鍵詞】肌源性誘發(fā)前庭電位；小型豬；咬肌肌源性誘發(fā)前庭電位

李亞和張悅并列第一作者

National Natural Science foundation of china general project（81271082）; The national 973 program of major scientific research program stem cell project（2012CB967900）; The national 973 plan major scientific problem oriented project（2011CBA01000）; Cultivation and development of Beijing science and technology innovation base（z151100001615050).Jiangsu province clinical medical science and technology specialb(12014032),The peak of six talents in Jiangsu Province2014-WSN-043,China Postdoctoral fund(2015M5718180，Innovation and entrepreneurship training program for college students in Jiangsu Province(201510313003Z),The fundamental research funds for the project of Chongqing City（11611、14440）.Declaration of interest:The authors report no conflicts of interest.

肌源性誘發(fā)前庭電位（Vestibular-evoked myo?genic potential,VEMP）指利用高強(qiáng)度聲刺激一側(cè)球囊并在同側(cè)緊張的胸鎖乳突肌上記錄到的肌源性誘發(fā)前庭電位，來評價前庭功能的一種客觀、準(zhǔn)確的電生理測試技術(shù)[1]，操作方便、結(jié)果可靠、具有較高的特異性，對突發(fā)性耳聾，梅尼埃病、前庭神經(jīng)炎等疾病的診斷和判斷病情的預(yù)后有較高價值；由于神經(jīng)傳輸通路的不同，VEMP可分在眼外肌前庭誘發(fā)肌源性電位(ocular vestibular-evoked myogenic potential，oVEMP)和頸部肌前庭誘發(fā)肌源性電位(cervical ves?tibular-evoked myogenicpotential,cVEMP)，本試驗(yàn)所記錄的是頸部肌前庭誘發(fā)肌源性電位（cVEMP）

小型豬與人在解剖學(xué)、生理學(xué)上有極大的相似性[2]，并且體重輕，生長慢，便于實(shí)驗(yàn)操作，小型豬作為實(shí)驗(yàn)動物已經(jīng)在腫瘤、心血管系統(tǒng)疾病、糖尿病、外科、口腔、燒傷整形、血液系統(tǒng)疾病、遺傳代謝疾病和新藥安全性評價等生物醫(yī)學(xué)研究的多個方面取得了可觀的成果[3]；目前，小型豬作為實(shí)驗(yàn)動物在耳科中的研究還處于起始階段，與其他常用的嚙齒科動物相比，小型豬在耳的解剖結(jié)構(gòu)具有獨(dú)特的優(yōu)勢：1）、小型豬具有中耳鼓室結(jié)構(gòu)和完整的乳突氣房；2）其聽骨鏈的形態(tài)結(jié)構(gòu)和耳蝸的大小及顯微結(jié)構(gòu)等都與人極為相似；3）尤其前庭的形態(tài)結(jié)構(gòu)和相對位置與人的最為接近[4]；因此，用小型豬作為VEMP檢測的實(shí)驗(yàn)動物是最佳之選。目前，國內(nèi)外僅有少量相關(guān)的文獻(xiàn)報道，利用豚鼠、小鼠進(jìn)行VEMP的觀察研究[5-7]，仍缺少正常小型豬的VEMP檢查方法。本實(shí)驗(yàn)選取正常的廣西巴馬小香豬作為實(shí)驗(yàn)對象，介紹VEMP的檢查方法。

2　材料方法

2.1實(shí)驗(yàn)動物

12頭正常的小型巴馬香豬（由中科院北方大動物研究基地提供），檢查外耳道無異常分泌物，無步態(tài)不穩(wěn)、頭左右晃動、四肢外展及無力、軀干卷曲、強(qiáng)迫環(huán)行運(yùn)動（轉(zhuǎn)圈）等平衡功能異常表現(xiàn)。取出生后6個月，體重25kg左右，雌性小豬進(jìn)行VEMP測試。

2.2麻醉

小型豬生性警覺性強(qiáng)，易躁和產(chǎn)生攻擊行為，清醒狀態(tài)下無法配合進(jìn)行VEMP測試，因此，必須麻醉后才能進(jìn)行試驗(yàn)，為了減少麻醉劑對實(shí)驗(yàn)的影響，我們采用聯(lián)合用藥，使用麻醉時間相對較短，對肌肉緊張性影響相對較小的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉，并用速眠新進(jìn)行麻醉誘導(dǎo)；以3%戊巴比妥鈉（1ml/kg，北京普博斯生物有限公司）+速眠新Ⅱ(0.1ml/kg，吉林省華牧動物保健品有限公司）給予實(shí)驗(yàn)動物肌肉注射麻醉，實(shí)驗(yàn)前禁飼12 h，速眠新Ⅱ行頸部肌肉注射給藥,同時3%戊巴比妥鈉靜脈給藥，速度約2mL/min；5min-10min即出現(xiàn)精神沉郁、活動減少、四肢無力、步態(tài)不穩(wěn)、喜臥等表現(xiàn)，表明已進(jìn)入麻醉狀態(tài)；以角膜反射、疼痛消失為標(biāo)志表示麻醉成功；本試驗(yàn)所用的麻醉藥物有肌肉松弛作用，影響實(shí)驗(yàn)動物記錄部位骨骼肌的收縮，因此，在記錄部位肌肉松弛和緊張狀態(tài)下分別做VEMP的記錄，以做辨別；為排除聽覺功能可能對本試驗(yàn)存在的影響，本試驗(yàn)同時做了該試驗(yàn)動物的ABR。

3　VEMP測試及ABR記錄

臨床上常用胸鎖乳突肌上記錄到的VEMP，來評估前庭功能尤其是球囊功能，但由于其檢測需要保持較大的胸鎖乳突肌緊張性收縮，在老年人及頸部疾患的人群中記錄受限制；小型豬頸部在解剖上與人有所差異，脂肪組織較厚，其頸部伸肌在解剖和功能上與人的胸鎖乳突肌相似[8]，頸部伸肌位于其頸部兩側(cè)，是頸部最為粗大的肌肉，其起于肱骨嵴，止于枕骨和巖顳骨，支配頭部的旋轉(zhuǎn)、抬頭等，其表面較厚的脂肪組織覆蓋，不易觸及；有學(xué)者在年人及頸部疾患的人群中咬肌上記錄到前庭誘發(fā)的肌源性電位，用于年老者及頸椎病患者進(jìn)行前庭肌反射檢測[9]；謝溯江等[10]在清醒豚鼠上記錄的強(qiáng)短聲誘發(fā)的咬肌肌源性電位，并確定了該電位的起源，是VEMP的良好補(bǔ)充；小型豬的咬肌，較為粗壯發(fā)達(dá)，近似正方形，起自顴骨，止于下頜支該肌肉表面有面皮肌和面神經(jīng)，深面主要覆蓋下頜支[8]；位置表淺、肌肉粗大、易操作；我們嘗試在小型豬的頸部伸肌和咬肌上進(jìn)行誘發(fā)VEMP。

本試驗(yàn)對小型豬進(jìn)行VEMP測試選用的設(shè)備是美國智聽( HIS)公司的Smart EP誘發(fā)電位儀（美國智聽公司），來記錄肌電位，帶通濾波30-3kHz，肌電圖信號放大30k。開放聲場，極間電阻<3Ω，分析時窗是50ms，疏波短聲0.1ms，短聲刺激疊加次數(shù)128次，頻率1000Hz。每只動物進(jìn)行一系列的強(qiáng)短聲誘發(fā)的肌源性電位測試，刺激強(qiáng)度從120dB開始，每次下降5dB，直到波形消失，以確定閾值。采用這個閾值強(qiáng)度，連續(xù)進(jìn)行2次記錄，以檢驗(yàn)其重復(fù)性；由于小型豬表皮及皮下脂肪較厚，我們采用自制銀質(zhì)電極針（銀鎳合金，純度90%，直徑0.9mm，長度5cm），表面進(jìn)行聚四氟乙烯涂層，以防止其氧化，增加阻抗；之后用指針式電流表，對所制電極進(jìn)行檢測；從頸部伸肌和咬肌兩個部位分別進(jìn)行VEMP的檢測，對其檢測結(jié)果進(jìn)行比較。

3.1頸部伸肌誘發(fā)的VEMP

記錄頸部伸肌誘發(fā)的VEMP時，需要頸部伸肌保持較大的肌緊張性，動物麻醉后肌張力下降，不容易引出肌源性誘發(fā)前庭電位，我們首先進(jìn)行頸部伸肌肌肉松弛狀態(tài)下的VEMP的記錄；之后，我們把小型豬俯臥在測試臺上，使用自制裝置使其頭頸部轉(zhuǎn)相對側(cè)，與軀干約成45°，人為的使頸部伸肌保持肌肉緊張性，使肌張力增強(qiáng)；通過自制裝置，可使咬肌肌肉緊張，從而記錄到肌源性誘發(fā)前庭電位；在測試前把舌體從口腔中拉向一側(cè)，防止后墜堵塞氣道；把記錄電極放置頸部伸肌分叉處（約其中上1/3處，此處肌纖維數(shù)量較多、體積較大、收縮較強(qiáng)），參考電極插入顱頂骨頂嵴表面的骨膜上，接地電極插入吻突（深度約2cm），極間電阻<3Ω；在測試過程中，由于用戊巴比妥鈉麻醉，其氣道會出現(xiàn)分泌物，應(yīng)注意觀察，防止意外的發(fā)生；觀察在不同聲強(qiáng)刺激之下VEMP波形特點(diǎn)及判斷閾值，以第一個出現(xiàn)正向P波的消失作為判斷閾值的指標(biāo)。

3.2咬肌誘發(fā)的VEMP

由于動物麻醉后肌張力下降，不易引出肌源性電位，我們首先進(jìn)行記錄咬肌肌肉松弛狀態(tài)下的VEMP的記錄；之后，我們把小型豬俯臥在測試臺上，口中銜一自制木棒（橢圓形、長15cm），木棒上纏繞適當(dāng)紗布，以增加其在口中的摩擦力，防止木棒在口中滑脫，這樣可使咬肌保持一定的緊張性，通過自制木棒，使咬肌獲得緊張，從而記錄到肌源性電位；將記錄電極針插入測試側(cè)咬肌前下1/3中部，參考電極插入顱頂骨頂嵴表面的骨膜上，接地電極插入吻突（深度約2cm），極間電阻<3Ω；在測試過程中，注意觀察動物的狀態(tài)，如有不適及時調(diào)整；觀察在不同聲強(qiáng)刺激之下VEMP波形特點(diǎn)及判斷閾值，以第一個出現(xiàn)正向P波的消失作為判斷閾值的指標(biāo)。

3.3ABR記錄

測試選用的設(shè)備是美國智聽( HIS)公司的Smart EP誘發(fā)電位儀（美國智聽公司），來進(jìn)行ABR的記錄。電極插放位置：檢測用自制銀制電極（VEMP檢測所用電極），記錄電極放置顱頂中點(diǎn)，自制電極針插入顱骨內(nèi)硬腦膜，參考電極置于記錄部位的耳垂處，線接于鼻尖；電極間的阻抗<3Ω；測試軟件設(shè)置：刺激聲為短聲（click），刺激強(qiáng)度20-100dB SPL，以10dB進(jìn)行遞減，濾波為100-3000Hz，以Ⅴ波的消失作為判斷其ABR閾值的標(biāo)志。

4　結(jié)果

圖1　A/B為頸部伸肌和咬肌松弛，其余實(shí)驗(yàn)條件不變的情況下所引出的波形，P波未引出Fig.1 A/B:The neck muscle and masseter muscle relaxation of P wave can not be evoked,and The remaining experimental conditions are unchanged.

圖2　在小型豬不同部位引出的VEMP圖形Fig.2 Waveform of VEMP in different parts.

圖3　小型豬測試時的擺放姿勢Fig.3 pose of mini pigs during test

A/B Pose of mini pigs when detecting the neck extensor VEMP:open field,away from the ear margin of about 5cm,head and neck to opposite side,and the trunk of approximately 45 degrees,in order to make the fixed head,we use the fixed belt fixed;C/D for miniature pigs were placed in the position of masseter muscle VEMP test,open field,and about 5 cm from the ear,we put a stick in the mouth,the masseter muscle to maintain certain muscle tension.

AB為小型豬進(jìn)行頸部伸肌VEMP檢測的擺放姿勢，開放聲場，距耳緣約5cm，頭頸部轉(zhuǎn)向?qū)?cè)，與軀干約成45°，為使頭部固定，我們用固定帶進(jìn)行固定；C、D為小型豬進(jìn)行咬肌VEMP檢測的擺放姿勢，開放聲場，距耳緣約5cm，我們在其口中放一木棒，使其咬肌保持一定的肌張力。

圖4　A/B為小型豬左、右耳正常ABR波形（dB SPL）,閾值為25dB SPL。Fig.4 The normal ABR waveform (SPL dB) was detected in the mini pigs,and the threshold value was SPL 25dB.

5　討論

臨床上，VEMP常用于評價一些神經(jīng)耳科學(xué)疾病，如聽神經(jīng)瘤、梅尼埃病、前庭神經(jīng)炎、上半規(guī)管裂綜合征、多發(fā)性硬化癥、良性陣發(fā)性位置性眩暈、前庭性偏頭痛以及其它外周或中樞性前庭疾??；人類在骨骼肌上記錄到的前庭誘發(fā)肌源性電位的振幅,與其肌張力的大小呈正相關(guān)[11，12]，振幅的絕對值的差異可能只受肌肉張力的影響，而與前庭功能是否正常無關(guān)[9]，由于記錄條件的限制，我們暫時還沒有合適的方法在本實(shí)驗(yàn)中去檢測背景肌肉的肌電活動的強(qiáng)度，因此沒有進(jìn)一步去探討反射的振幅；肌源性前庭誘發(fā)電位檢測目標(biāo)包括刺激音聲強(qiáng)閾值、潛伏期、P13-N23振幅等[13]。有很多因素影響前庭誘發(fā)肌源性電位檢測峰值和潛伏期，如測試者的性別、年齡、肌肉自身特點(diǎn)、皮下脂肪厚度、皮膚電阻抗特性、刺激強(qiáng)度、電極安放位置及測試設(shè)備等；在本實(shí)驗(yàn)測試中，隨刺激強(qiáng)度的下降，只有振幅降低，潛伏期沒有明顯變化；兩種方法的P13波潛伏期7-9ms之間，N23的潛伏期10ms左右，所得的P波電位具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性；所引出的N波（負(fù)向波）波幅較弱小，可能與我們所采用的方法使引部位的肌張力過小，不足以把N波引出。

為了排除聽覺對VEMP的影響，對小型豬進(jìn)一步做了ABR檢測，在高強(qiáng)度聲下其V波的潛伏期為5-6ms，閾值25dB SPL，而在不同部位所引出的VEMP，其潛伏期為7-9ms，閾值80dB SPL，因此，可以基本排除聽覺對VEMP的影響；本試驗(yàn)所用的麻醉藥物有肌肉松弛作用，影響實(shí)驗(yàn)動物記錄部位骨骼肌的收縮，因此，我們在兩個記錄部位（頸部伸肌、咬?。┘∪馑沙跔顟B(tài)下，做了VEMP的記錄，我們所得到圖形重復(fù)性較好，基線相對平穩(wěn)，但P波未能引出（圖1）；之后，使用自制裝置，使該部位肌肉緊張，進(jìn)行記錄，在潛伏期7-9ms記錄到一個十分明顯的第一個正向波P（如圖2），但振幅相對較??；因此認(rèn)為VEMP作為肌源性誘發(fā)電位，記錄部位肌肉的緊張性，對VEMP的檢測十分重要，目前還沒有合適的方法在小型豬清醒狀態(tài)下進(jìn)行VEMP測試，麻醉劑對小型豬VEMP的影響還需進(jìn)一步探究；麻醉效果的好壞對VEMP的測試起至關(guān)重要的作用；小型豬在麻醉狀態(tài)下，減少了清醒狀態(tài)下腦電活動、頭部運(yùn)動、軀干及四肢肌肉運(yùn)動干擾誘發(fā)電位的引出。3%戊巴比妥鈉可肌肉注射、靜脈推注也可腹腔給藥；本實(shí)驗(yàn)采用靜脈給藥方法，無論采用何種給藥方式，單用3%戊巴比妥鈉常會出現(xiàn)全身肌肉顫抖，影響測試結(jié)果，速眠新Ⅱ作為肌松藥物，可以減少肌電的干擾；速眠新Ⅱ雖具有良好的鎮(zhèn)靜、肌松和微弱的鎮(zhèn)痛作用，但對呼吸和心臟有抑制作用，并使唾液腺及氣管腺體分泌增加[14]，應(yīng)保持氣道通暢，防止誤吸；戊巴比妥鈉對呼吸系統(tǒng)有抑制作用，抑制作用的強(qiáng)弱與藥物的劑量和推藥速度有關(guān)，速度越快，呼吸抑制的發(fā)生率也越高[15]，因此，在測試過程中要密切觀察實(shí)驗(yàn)動物的體溫、呼吸頻率、心率以及皮膚粘膜顏色等，如發(fā)現(xiàn)異常情況及時干涉；麻醉時間的長短與給藥的部位、方式等有關(guān)，一般頸部肌肉給藥可維持3h-4h；在麻醉過程中需注意：嚴(yán)格掌握麻藥的劑量，遵循麻醉“宜淺勿深”的原則[16]。

由于在相同強(qiáng)度的聲刺激下,神經(jīng)肌肉反射的興奮性，與肌肉的緊張程度密切相關(guān)[17]，因此為了保持肌肉緊張性，在實(shí)驗(yàn)測試過程中，使用特定的裝置以牽引記錄部位的肌肉，使其保持一定的肌張力；強(qiáng)聲誘發(fā)的肌源性電位的潛伏期的長短，可能與實(shí)驗(yàn)動物的神經(jīng)傳導(dǎo)時間短有關(guān)，在強(qiáng)短聲誘發(fā)的小型豬咬肌肌源性前庭電位的潛伏期范圍為6-8ms，與強(qiáng)短聲在小型豬的頸部伸肌上誘發(fā)的肌源性前庭電位的潛伏期范圍是一致的，低于正常人咬肌反應(yīng)的潛伏期[12，18]，但比大鼠在頸伸肌上記錄到的肌源性反應(yīng)的潛伏期稍長[18，19]。

通過本次實(shí)驗(yàn)，頸部伸肌和咬肌在強(qiáng)聲下誘發(fā)的肌源性前庭電位潛伏期一致，只是在頸部伸肌部位所記錄到的VEMP波幅稍高于咬肌部位記錄到波幅，可能與記錄部位肌肉的緊張程度有關(guān)；由于頸部伸肌位置較深，表面脂肪組織較厚不易定位，人為使肌肉緊張較為困難，并且在記錄過程中實(shí)驗(yàn)動物易出現(xiàn)呼吸不暢意外情況，不利于肌源性誘發(fā)前庭電位的記錄；而咬肌肌位置表淺，便于定位，肌肉組織發(fā)達(dá)，肌緊張性強(qiáng)，利于肌源性誘發(fā)前庭電位的記錄咬。除了胸鎖乳肌、咬肌外，也有文獻(xiàn)報道有學(xué)者采用斜方肌（頸伸?。┳鳛橛涗洸课灰部色@得相近的結(jié)果[10]。也有報道在手臂或腿部都可以記錄到前庭誘發(fā)肌源性電位[20]，在小型豬進(jìn)行觀察前庭肌源性誘發(fā)前庭電位的觀察還有許多方法可以嘗試，還需要進(jìn)一步研究尋找更為適合的VEMP記錄方法。

表1　不同刺激強(qiáng)度下VEMP不同參數(shù)的引出(n=12)Table 1 Response rate and parameters of BEMP in differernt stimulus intensity groups(MeanSD，n=12)

注：頸部伸肌、咬肌VEMP的潛伏期、波幅及引出率比較，二者P波的潛伏期從隨著刺激強(qiáng)度的降低，潛伏期逐漸延長；P波波幅從隨著刺激強(qiáng)度的降低，波幅逐漸降低；在100dB SPL、90dB SPL時，P波的引出率為100%，80dB SPL時頸部伸肌的引出率稍高于咬肌。

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Vestibular-evoked myogenic potentials in miniature pigs

LI Ya ,ZHANG Yue ,ZHAO Lidong ,GUO Weiwei ,PAN Hongmei ,ZHANG Liang ,YUAN Shuolong ,REN Lili ,SHI Xi ,QIAO Yuehua
1Xuzhou Medical College listening Center,Xuzhou 221006,China.2Department of Otolaryngology,Head & Neck Surgery,Institute of Otolaryngology,Chinese PLA General Hospital,Beijing 100853,China.3 Clinical hearing center of Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College,Xuzhou 221006,China.4Key Laboratory of Pig Industry Sciences (Ministry of Agriculture),Chongqing Academy of Animal Science,Chongqing 402460,China.
Corresponding author:QIAO YuehuaEmail:oto8558@163.com

【Abstract】Objective To report detection of vestibular-evoked myogenic potentials (VEMP) in the miniature pig.Methods Potentials evoked by 1000 Hz tone bursts were recorded from neck extensor muscles and the masseter muscles in normal adult Bama miniature pigs anesthetized with 3% pentobarbital sodium and Sumianxin II.Results The latency of the first positive wave P from neck extensor muscles was 7.65±0.64 ms,with an amplitude of 1.66±0.34 uv and a rate of successful induction of 75% at 80 dB SPL.The latency of potentials evoked from the masseter muscles was 7.60±0.78 ms,with an amplitude of 1.31±0.28 uv and a rate successful induction of 66% at 80 dB SPL.Conclusion The latencies and thresholds of VEMPs recorded from neck extensor muscles and the masseter muscles appear to be comparable in normal adult Bama miniature pigs,although the amplitude recorded from neck extensor muscles seems to be higher than that from the masseter muscles.However,because of their usually relatively superficial and easily accessible location,as well as their large volume and strong contractions,masseter muscles may be better target muscles for recording myogenic potentials.

【Keywords】vestibular evoked myogenic potentials; miniature pig; masseter myogenic potential

收稿日期：（2016-01-04）

通訊作者：喬月華，Email:oto8558@163.com

作者簡介：李亞，碩士，研究方向：耳科學(xué)基礎(chǔ)研究

基金項(xiàng)目：國家973計劃重大科學(xué)研究計劃干細(xì)胞項(xiàng)目（2012CB967900）；國家973計劃重大科學(xué)問題導(dǎo)向項(xiàng)目（2011CBA01000)；國家自然科學(xué)基金（面上項(xiàng)目81271082，81470684，青年項(xiàng)目81400472）；江蘇省臨床醫(yī)學(xué)科技專項(xiàng)b12014032，江蘇省六大人才高峰2014-WSN-043,中國博士后基金2015M571818，江蘇省高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃201510313003Z；重慶市基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（11611，14440）。

DOI:10.3969/j.issn.1672-2922.2016.01.005

【中圖分類號】R339.16

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1672-2922（2016）01-21-6