楊 攀，許 棟，馬海明(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙 410128)

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不同豬種肉質(zhì)相關(guān)基因FTO多態(tài)性研究

楊 攀*，許 棟，馬海明**
(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙 410128)

摘 要：為了研究肉質(zhì)候選基因FTO(fat mass and obesity associated)在中外不同豬種群體中的遺傳變異，本試驗以杜洛克豬、大白豬、寧鄉(xiāng)豬、大圍子豬4個豬種為研究對象，運用PCR-RFLP的方法檢測了FTO基因g.276G>T(AM931150)位點的基因頻率和基因型頻率。結(jié)果表明，寧鄉(xiāng)豬、大圍子豬的優(yōu)勢基因型均為GG，G是杜洛克豬、寧鄉(xiāng)豬和大圍子豬的優(yōu)勢等位基因，而大白豬的優(yōu)勢等位基因是T。本研究發(fā)現(xiàn)FTO基因的基因型分布在國外2個豬種群和地方豬種群之間存在較明顯的差異，且這種差異極有可能是影響不同豬種肉質(zhì)性狀的原因之一，為以后更深入的研究打下了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：豬；肉質(zhì)性狀；FTO基因

FTO(fat mass and obesity associated)是脂肪肥胖相關(guān)基因，表達(dá)于人體各組織，且在下丘腦中高表達(dá)。FTO基因多態(tài)性與體重和肥胖癥密切相關(guān)。FTO基因能夠影響能量攝入及能量消耗，并通過多種途徑誘導(dǎo)人群中肥胖癥及2型糖尿病等相關(guān)疾病的發(fā)生。該基因位于豬的6號染色體上，包括9個外顯子。本文研究了FTO基因的多態(tài)性，旨在尋找與豬肉質(zhì)性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記，為深入研究中外豬種的肉質(zhì)形成機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

杜洛克豬24頭，大白豬28頭，寧鄉(xiāng)豬67頭，大圍子豬43頭。剪少量耳組織，-20 ℃保存。

1.2 DNA的提取與PCR擴(kuò)增

常規(guī)酚/氯仿抽提法提取基因組DNA。根據(jù)L. Fontanesi等(2008)設(shè)計引物擴(kuò)增FTO基因第4內(nèi)含子長度為397 bp的g.276G>T(AM931150)位點，該位點的左右引物為：5′-ACAGGCCCTGAAGAGGAAAG-3′；5′-AGTAACCTGGAGTTCCTGTGG-3′

PCR產(chǎn)物經(jīng)Tai I限制性內(nèi)切酶酶切后確定基因型。PCR反應(yīng)體系為Green PCR Master Mix (2X) 12.5 μL，正反引物各0.8 μL，加ddH2O至25 μL，PCR反應(yīng)程序為95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，60 ℃復(fù)性30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環(huán)，72 ℃延伸5 min。酶切反應(yīng)體系均為20 μL，其中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10 μL，限制性內(nèi)切酶2U，65 ℃消化4 h，酶切產(chǎn)物用2 %瓊脂糖凝膠電泳后確定基因型。

2 結(jié)果與分析

2.1 FTO基因g.276G>T位點與PCR-RFLP

FTO基因g.276G>T(AM931150)位點T等位基因為397 bp，G等位基因為275 bp+122 bp，組成3種基因型，TT為397 bp，TG為397 bp+275 bp+ 122 bp，GG為275 bp+122 bp。

2.2 基因型頻率與基因頻率

杜洛克豬G等位基因頻率為0.521，寧鄉(xiāng)豬等位基因G的基因頻率為0.881，大圍子豬種G等位基因頻率為0.942，而大白豬中等位基因T的頻率為0.768。經(jīng)Hardy-Weinberg平衡適合性檢測表明，除寧鄉(xiāng)豬此位點處于不平衡狀態(tài)(P<0.01),其余均處于平衡狀態(tài)(P>0.05，表1)。

3 討論和結(jié)論

在豬肉質(zhì)性狀的研究中，有大量的報道表明FTO基因的g.276G>T(AM931150)位點與豬的肌內(nèi)脂肪的沉積有很大的關(guān)系，而肌內(nèi)脂肪含量是評價肉質(zhì)的重要方面。經(jīng)檢測的杜洛克和大白豬都呈現(xiàn)出多態(tài)，本地豬種寧鄉(xiāng)豬和大圍子豬則幾乎表現(xiàn)為單態(tài)，均為GG型，有少量的TG基因型出現(xiàn)，說明本地豬種在此位點上已開始存在少量變異。本研究發(fā)現(xiàn)FTO基因的基因型分布在國外2個豬種群和地方豬種群之間存在較明顯的差異，且這種差異極有可能是影響不同豬種肉質(zhì)性狀的原因之一，這為以后更深入的研究提供了科學(xué)依據(jù)?！酢?/p>

參考文獻(xiàn)：(略)

*作者簡介：楊攀(1993.9- ），漢族，湖南郴州市人，本科在讀，E-mail：503634405@qq.com。

基金項目：863項目(2011AA100304-3)和湖南省自然科學(xué)杰出青年基金(13JJ1021)。

中圖分類號：S813.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-0769(2016)02-0045-02

** 通信作者：E-mail: mahaiming2000@163.com。