李 紅， 施嘉琛， 高文暉（北京市疾病預(yù)防控制中心， 北京 100013）

大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇直接測(cè)定與計(jì)算結(jié)果的比較

李 紅， 施嘉琛， 高文暉
（北京市疾病預(yù)防控制中心， 北京 100013）

目的 比較直接測(cè)定與公式計(jì)算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）結(jié)果是否存在差異。 方法 用直接一步法檢測(cè)大鼠血清中LDL-C； 根據(jù)Friedewald公式，通過(guò)總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量計(jì)算LDL-C，并將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。 結(jié)果 直接測(cè)定大鼠血清和公式計(jì)算LDL-C結(jié)果差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）， 兩種結(jié)果相關(guān)性良好（相關(guān)系數(shù)為0.976 0）。結(jié)論 在進(jìn)行相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，因血樣采集或?qū)嶒?yàn)室檢測(cè)條件有限時(shí)，可使用Friedewald公式計(jì)算LDL-C。

低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）； Friedewald公式計(jì)算法； 大鼠血清； 血脂

血脂常規(guī)檢測(cè)包括血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的測(cè)定。血脂測(cè)定結(jié)果的異常與人類健康息息相關(guān)，其中高TC血癥就是冠心病的危險(xiǎn)因素之一，TG的升高表明體內(nèi)存在代謝異常，HDL-C水平與冠心病呈負(fù)相關(guān)，而LDL-C的異常更是造成體內(nèi)動(dòng)脈硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險(xiǎn)因素。

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是指動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)、血液成分的沉積，平滑肌細(xì)胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進(jìn)行性病理過(guò)程。AS是心腦血管系統(tǒng)中最常見(jiàn)的疾病，嚴(yán)重危害人類的健康。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物建立高血脂模型，進(jìn)行各種降脂研究來(lái)改善脂代謝異常［1-9］。提供準(zhǔn)確的血脂檢測(cè)數(shù)據(jù)是研究的基礎(chǔ)，在動(dòng)物血樣采集、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)條件以及項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)發(fā)生問(wèn)題時(shí)，LDL-C的直接測(cè)定是否可以改為使用公式計(jì)算，本文主要是比較直接測(cè)定與公式計(jì)算大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇結(jié)果是否存在差異提供支持?jǐn)?shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

全自動(dòng)生化分析儀日立- 7600P模塊（日立高新技術(shù)有限公司， 日本）。

1.2 試劑、血脂復(fù)合校準(zhǔn)品和質(zhì)控血清

TC， 膽固醇氧化酶法； TG， 去游離甘油法； HDL-C 和LDL-C使用一步法，均使用雙試劑。血脂試劑、四項(xiàng)復(fù)合校準(zhǔn)品，以及質(zhì)控血清是由和光（和光純藥工業(yè)株式會(huì)社，日本）提供。血脂復(fù)合校準(zhǔn)品TC、TG、HDL-C和LDL-C使用計(jì)量單位mmol/L的濃度。

1.3 大鼠血樣

6～8 周齡清潔級(jí)Wistar大鼠70只（雌雄各半），由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 ［SCXK-（軍）2012-0004］。戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血，室溫分離血清。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

在日立7600生化分析儀P模塊上同時(shí)檢測(cè)70例大鼠血清TC、TG、HDL-C和LDL-C，樣品編號(hào)1、2放質(zhì)控血清，3～72編號(hào)為大鼠血樣，73、74號(hào)為質(zhì)控血清。打開(kāi)通訊實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)將數(shù)據(jù)傳入實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)。按照法定計(jì)量單位mmol/L，F(xiàn)riedewald公式計(jì)算法，LDL-C=TC-（HDL-C）-TG/ 2.2。在實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)LIMS（Laboratory Information Management System，LIMS）設(shè)置計(jì)算項(xiàng)目直接計(jì)算LDL-C輸出結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)輸出的所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直接使用SPSS16.0軟件包進(jìn)行t檢驗(yàn)和相關(guān)回歸分析統(tǒng)計(jì)處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清血脂檢測(cè)結(jié)果

TC=1.91±0.32 mmol/L， TG=0.62±0.16 mmol/L，HDL-C = 0.87±0.14 mmol/L，LDL-C = 0.77± 0.36 mmol/L。

2.2 計(jì)算結(jié)果

根據(jù)公式計(jì)算，大鼠血清低密度脂蛋白膽固醇為0.761±0.311 mmol/L，與實(shí)測(cè)結(jié)果（0.77± 0.36 mmol/L）差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.356， P=0.179）。

2.3 測(cè)定值與計(jì)算值的相關(guān)性

大鼠血清LDL-C直接測(cè)定與公式計(jì)算的結(jié)果線性回歸方程y=0.854 4X+0.099 2，r2為0.954 6，相關(guān)系數(shù)r為0.976 0。

3 討論

大鼠血清LDL-C直接測(cè)定與公式計(jì)算兩種結(jié)果差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）EP9-A2文件的要求r≥0.975（或r2≥0.95）［10］，兩種結(jié)果有良好的相關(guān)性。這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果一致［11～14］。

血脂檢測(cè)中TC和TG有完整的參考系統(tǒng)、決定性方法和參考方法。TC和TG決定性方法都是用同位素稀釋-質(zhì)譜法； TC參考方法為正己烷抽提L-B反應(yīng)顯色法（ALBK法）； TG參考方法為二氯甲烷抽提，變色酸顯色法； TC常規(guī)方法為酶法（CODPAP法）； TG常規(guī)方法為酶法（GPO-PAP法）。HDL-C 和LDL-C沒(méi)有決定性方法，只有參考方法，參考方法是超速離心結(jié)合選擇性沉淀法［15］。LDL-C使用間接計(jì)算法，是Friedewald于1972年發(fā)明的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)式。運(yùn)用時(shí)有一定條件， 空腹血清不含乳糜微粒， TG濃度在4.60 mmol/L以下， Ⅲ型高脂血癥除外。血清TG 含量2.26 mmol/L以下， 計(jì)算的LDL-C與其實(shí)測(cè)值符合為90%， TG在2.26～4.50 mmol/L時(shí)，符合率是72%，TG在4.50～6.80 mmol/L，符合率只有39%±10%［16］。大鼠血清TG含量通常比人血清含量（TG=0.62±0.16 mmol/L）低，正好在實(shí)際測(cè)定值與計(jì)算值符合率90%的組內(nèi)。大鼠血清LDL-C直接測(cè)定與公式計(jì)算兩種結(jié)果得到了相關(guān)性良好和差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)論。

對(duì)于檢測(cè)血脂標(biāo)本采集和處理，測(cè)定人血樣血脂時(shí)，在清晨空腹采血。因此建議采集大鼠血液時(shí)禁食采血。同時(shí)建議使用血清標(biāo)本進(jìn)行分析，肝素抗凝的血漿不影響血脂分析，EDTA抗凝血漿TC和TG含量比血清大約低3%［15］。血清密封4 ℃冰箱中可穩(wěn)定4 d，確保血脂分析前的質(zhì)量控制。

動(dòng)物血樣不易采集，一方面是采血部位問(wèn)題，另一方面是采血量。各實(shí)驗(yàn)室采集大鼠標(biāo)本部位差異很大，采用斷頭、麻醉采集腹主動(dòng)脈、眼內(nèi)眥動(dòng)脈等。大鼠血樣采集部位的不同也會(huì)導(dǎo)致某些項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的差異［17，18］，另外分析試劑和儀器也是保證質(zhì)量的關(guān)鍵［19，20］。日常工作中多使用常規(guī)方法檢測(cè)批量標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)中樣品編號(hào)1、2放質(zhì)控血清，3～72編號(hào)為大鼠血樣，73、74號(hào)為質(zhì)控血清，這樣的編號(hào)順序目的是用質(zhì)控血清監(jiān)控大鼠血樣全部檢測(cè)過(guò)程。在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)中獲得合格的成績(jī)［21］，與衛(wèi)生部北京老年醫(yī)學(xué)研究所、美國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行的常規(guī)方法分析和參考物質(zhì)比對(duì)都獲得滿意結(jié)果［22］。某些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室不具有生化分析的檢測(cè)能力，可能使用手工或半自動(dòng)分析設(shè)備。項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)緊張是另一可能遇到的困難，當(dāng)不能直接測(cè)定LDL-C時(shí)，在確保TC、TG、HDL-C檢測(cè)準(zhǔn)確的前提下，可用Friedewald公式計(jì)算低密度脂蛋白膽固醇。

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B

1674-5817（2016）01-0054-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.011

2015-06-23

李 紅（1968-）， 女， 主管檢驗(yàn)師， 主要從事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com