黃燦，陳沁（1.上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，上海200436；2.中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所，江蘇蘇州215163）

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現(xiàn)代生物技術(shù)在植物病原菌檢測(cè)中的應(yīng)用

黃燦1，2，陳沁1，*
（1.上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，上海200436；2.中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所，江蘇蘇州215163）

植物病原菌根據(jù)形態(tài)觀察的方法進(jìn)行分類(lèi)鑒定比較困難。綜述了國(guó)內(nèi)外關(guān)于現(xiàn)代生物技術(shù)在植物病原菌檢測(cè)應(yīng)用的最新成果，旨在促進(jìn)我國(guó)植物病原菌研究的快速發(fā)展。

病原菌；現(xiàn)代生物技術(shù)；檢測(cè)應(yīng)用

近年來(lái)，隨著現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，生物學(xué)、血清學(xué)以及分子生物學(xué)等多種檢測(cè)方法應(yīng)用于植物檢疫工作，檢疫手段不斷得到補(bǔ)充和完善。在基層檢疫部門(mén)，針對(duì)植物病原菌檢測(cè)較多的采用形態(tài)學(xué)觀察和PCR相結(jié)合的方法；在國(guó)境口岸檢疫部門(mén)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR已經(jīng)得到了立項(xiàng)，并作為一種普遍的植物病原菌檢測(cè)方法大量使用。與傳統(tǒng)植物病原菌檢測(cè)方法相比，現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用可以大大提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度，尤其是免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)和紅外光譜檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，使高通量并快速檢測(cè)樣本成為可能。但由于試劑、設(shè)備及方法的局限，這些高效靈敏的檢測(cè)方法仍然得不到普及。

1　常規(guī)分離鑒定方法

根據(jù)形態(tài)學(xué)和生理生化特征來(lái)鑒定菌落是最簡(jiǎn)單也最早鑒定病原菌的方法。一些新發(fā)現(xiàn)的病菌由于未及時(shí)建立有效的檢測(cè)措施，也采用形態(tài)觀察的方法［1］。這種方法完成一次檢驗(yàn)需要一周甚至數(shù)周時(shí)間，無(wú)法滿(mǎn)足生產(chǎn)要求。結(jié)果一般用于初步判斷。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是最常見(jiàn)的植物核酸檢測(cè)技術(shù)。經(jīng)過(guò)這些年的發(fā)展，植物病害的多樣性及復(fù)雜性使得常規(guī)PCR技術(shù)難以滿(mǎn)足。PCR技術(shù)本身的快速發(fā)展，為病原菌的檢測(cè)提供了更多的選擇。如巢式PCR是用兩套引物擴(kuò)增完整片段的變異PCR方法。煙草青枯病菌（Ralstonia solanacearum）、玉米細(xì)菌性枯萎病菌（Erwinia stewartii）、琯溪蜜柚黑斑病菌（Phyllosticta citriasiana）、紅掌細(xì)菌性疫病菌（Xanthomonas campestris）、西瓜種子中的細(xì)菌性果斑病菌（Pseuomonas pseudoalcaligenes）、水稻中的稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）、芒果中的炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioiles）、甘蔗中的宿根矮化病菌（Leifsonia xyli）和黃化植原體（phytop lasma）、進(jìn)境果實(shí)中的梨火疫病菌（Erwinia amylovory）和玉米內(nèi)州萎蔫病菌（Clavibacter michiganensis）等都建立了相應(yīng)巢式PCR檢測(cè)體系［2-13］。在植物病菌檢疫方面，巢式PCR靈敏度比常規(guī)PCR高100倍。該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)十分成熟，目前市場(chǎng)上已經(jīng)開(kāi)發(fā)出相應(yīng)的試劑盒，提高了使用的便捷性。

2000年開(kāi)始，實(shí)時(shí)熒光定量PCR用于植物病原真菌方面［14-23］，實(shí)時(shí)熒光PCR逐步發(fā)展出了與Taqman探針相結(jié)合的技術(shù)。在體系中加入一個(gè)熒光標(biāo)記探針，探針產(chǎn)生的熒光屬于積累熒光，使得熒光信號(hào)強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物成直接比例關(guān)系，為香梨黑斑病和紅棗植物病害病原菌的快速檢測(cè)提供了技術(shù)保障［24-25］。但該探針標(biāo)記成本較高，不便普及應(yīng)用。與Taqman探針工作原理相同的有Allglo探針和LNA探針等，這些探針成本較低，在植物檢測(cè)領(lǐng)域有很大的應(yīng)用前景。

溴化乙錠（EB）是一種高度靈敏的核酸染色劑，廣泛應(yīng)用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。EB具有致癌性，能嵌入堿基分子，導(dǎo)致錯(cuò)配，限制了它的使用范圍。尋找其他可以替代的核酸染料是必要的。Kang等［26］使用SYBR Green I結(jié)合熒光實(shí)時(shí)定量PCR的 方 法檢 測(cè) 水 稻 白 葉 枯 病 菌（Xanthomonas campestris），靈敏度高于EB染色法25倍～100倍，且不具有毒性，可以替代EB作為各種核酸電泳的染色劑。此外，普通染料難以滲透微生物孢子，影響與DNA的結(jié)合，Rawsthorn等［27］用疊氮溴化丙錠（PMA）對(duì)分離出的細(xì)菌孢子進(jìn)行染色，成功檢測(cè)出枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）。馮建軍等［28］利用PMA與實(shí)時(shí)熒光定量PCR相結(jié)合的方法，有效的抑制了混合體系中死細(xì)胞DNA的擴(kuò)增，為檢測(cè)榆木種子中細(xì)菌性枯萎病菌（Pantoea stewartii）活細(xì)胞提供了一種方便、快捷的新方法。市場(chǎng)上，核酸染料的種類(lèi)越來(lái)越多，在應(yīng)用上，必須根據(jù)實(shí)際檢測(cè)的需要，選擇合適的染料。

2　核酸檢測(cè)方法

2.1多重PCR

多重PCR（multiplex PCR）又稱(chēng)復(fù)合PCR，指在同一反應(yīng)體系中加入二對(duì)及以上的引物，同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)核酸片段。理論上，只要引物和反應(yīng)體系設(shè)計(jì)合理就可以同時(shí)檢測(cè)出若干個(gè)基因，具有高效性、系統(tǒng)性和經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便性的特點(diǎn)。在引物設(shè)計(jì)過(guò)程中，要防止不同引物組相互配對(duì)，形成二聚體或發(fā)卡結(jié)構(gòu)，所以通常選擇與退火溫度相近的引物組。張麗芳等［29］通過(guò)優(yōu)化引物和模板濃度，摸索擴(kuò)增參數(shù)，建立了能同時(shí)檢測(cè)煙草青枯病、黑脛病和猝倒病的多重PCR反應(yīng)體系。此外，Pothier等［30］用多重PCR結(jié)合DNA斑點(diǎn)雜交的方法從176個(gè)黃藤種桃樣品中檢測(cè)出了核果樹(shù)細(xì)菌性斑點(diǎn)病菌（Xanthomonas arboricola），靈敏度高達(dá)400 U。這種可以用于不同病原菌的大規(guī)模擴(kuò)增方法，彌補(bǔ)了單純PCR反應(yīng)工作量大、費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)，但是體系的退火溫度需要反復(fù)摸索，在體系中存在多對(duì)基因或引物時(shí)，反應(yīng)靈敏度會(huì)大大降低。PCR技術(shù)與其它相關(guān)檢測(cè)手段的聯(lián)合使用，是發(fā)揮穩(wěn)定性和特異性的新方向。未來(lái)開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)應(yīng)是聯(lián)合新技術(shù)的開(kāi)發(fā)和優(yōu)化，使檢測(cè)范圍進(jìn)一步擴(kuò)大，進(jìn)而適合基層檢測(cè)應(yīng)用。

2.2基因芯片技術(shù)

在當(dāng)前的數(shù)據(jù)時(shí)代大背景下，企業(yè)人力資源管理的觀念勢(shì)必是要進(jìn)行更新的。對(duì)于傳統(tǒng)的思想觀念進(jìn)行更新，是時(shí)代發(fā)展的必然要求。其中，企業(yè)可對(duì)于相關(guān)工作人員進(jìn)行系統(tǒng)性的培訓(xùn)，使得企業(yè)內(nèi)部的員工接受新知識(shí)、掌握新能力［4］。另外，對(duì)于企業(yè)人力資源管理觀念的更新，并非是摒除一切傳統(tǒng)的思想管理觀念，而是在此基礎(chǔ)上進(jìn)行更新發(fā)展，既要牢記傳統(tǒng)觀念下的精華部分，又要適應(yīng)新時(shí)代的發(fā)展，盡心創(chuàng)新進(jìn)步，也就是常說(shuō)的“吸其精華，去其糟粕”，這句名言對(duì)于企業(yè)人力資源管理方面的應(yīng)用頗為適用。

基因芯片是用點(diǎn)樣法固定在玻璃板上的DNA探針微陣列，發(fā)展于20世紀(jì)90年代。當(dāng)帶有熒光標(biāo)記的靶基因與基因組DNA芯片進(jìn)行雜交產(chǎn)生互補(bǔ)匹配的序列時(shí)，熒光顯影會(huì)對(duì)雜交信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)試，計(jì)算機(jī)軟件綜合比較與分析后可獲得大量的基因表達(dá)信息［31］。龍海等［32］用熒光標(biāo)記的PCR擴(kuò)增后，與基因芯片上的探針進(jìn)行雜交，可以區(qū)分3種檢疫性黃單胞菌（Xanthomonas Campestris）。羅煥亮等［33］通過(guò)分析比對(duì)11種檢疫性植原體的16SrRNA序列，設(shè)計(jì)出通用引物和特異性探針，建立了植原體（phytop lasma）基因芯片檢測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了高通量檢測(cè)植原體病原的方法?；蛐酒饕攸c(diǎn)是高通量、微型化和自動(dòng)化，可以在1 cm2的載體表面固定數(shù)以萬(wàn)計(jì)探針?lè)肿?，同步快速地全自?dòng)分析信息，在全基因組水平進(jìn)行系統(tǒng)宏觀的檢測(cè)研究?；蛐酒夹g(shù)雖然有很多優(yōu)點(diǎn)，但是存在檢測(cè)成本高、設(shè)計(jì)要求較為嚴(yán)格等局限性，所以不能在基層單位的植物病原菌檢測(cè)工作中得到廣泛使用。

2.3環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）是一種由日本科學(xué)家在2000年開(kāi)發(fā)的核酸恒溫?cái)U(kuò)增方法。該方法針對(duì)靶標(biāo)序列的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4條引物，利用鏈取代反應(yīng)在等溫條件下孵化，擴(kuò)增過(guò)程會(huì)產(chǎn)生副產(chǎn)物焦磷酸鎂，通過(guò)肉眼觀察熒光的生成就可判斷結(jié)果。在實(shí)踐應(yīng)用中，利用恒溫箱和水浴鍋，一步就可完成對(duì)目的基因的確定。目前在人獸共患的病原微生物中使用較多，在植物病原菌中鮮有報(bào)道［34］。汪萬(wàn)春等［35］用LAMP軟件在線(xiàn)設(shè)計(jì)引物，建立的針對(duì)馬鈴薯環(huán)腐病菌（Clavibacter michiganense）檢測(cè)方法，靈敏度達(dá)150 CFU/mL。袁鈞等［36］根據(jù)玉米細(xì)菌性枯萎病菌（Pantoea stewartii）基因組DNA的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)出LAMP引物，該檢測(cè)體系的靈敏度達(dá)到了45 CFU/mL。但是該方法也存在一些弱點(diǎn)和技術(shù)問(wèn)題，如引物設(shè)計(jì)復(fù)雜，擴(kuò)增產(chǎn)物不易驗(yàn)證等。由于靈敏度高、檢測(cè)時(shí)間短、且不需要專(zhuān)門(mén)設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，LAMP在我國(guó)基層檢驗(yàn)部門(mén)中將越來(lái)越普及。

3　免疫學(xué)檢測(cè)方法

3.1酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）是利用可溶性抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，通過(guò)抗原抗體結(jié)合專(zhuān)一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量的檢測(cè)方法，也是目前植物細(xì)菌病害診斷上應(yīng)用比較廣的一種免疫學(xué)方法，多用來(lái)檢測(cè)馬鈴薯帚頂病和韭菜黃色斑紋病等［37-38］。免疫血清制備耗時(shí)耗力，可能存在交叉反應(yīng)，造成假陽(yáng)性。

近幾年，ELISA反應(yīng)得到優(yōu)化，發(fā)展出雙抗體夾心法（DAS-ELISA）、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法等。其中夾心法主要用于檢測(cè)大分子抗原，間接法用于測(cè)定特異抗體，競(jìng)爭(zhēng)法用于檢測(cè)小分子抗原。在植物病原檢疫中，前兩種方法的應(yīng)用較為普遍。喬寧等［39］把純化的番茄黃化曲葉病毒外殼蛋白作為抗原使家兔產(chǎn)生免疫反應(yīng)，制備出了對(duì)應(yīng)的多克隆抗體作為包被抗體，并用堿性磷酸酶對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記作為酶標(biāo)抗體，建立了番茄黃化曲葉病毒的DAS-ELISA。周麗洪等［40］也用同樣的方法制備出家兔免疫抗體血清，再用間接ELISA診斷出麗格海棠細(xì)菌性葉斑病。DAS-ELISA和間接ELISA對(duì)于診斷植物病原體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)，但是耗時(shí)較長(zhǎng)，免疫過(guò)程中的每個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)影響它的特異性和敏感度，探索反應(yīng)的最佳條件、簡(jiǎn)化步驟和降低費(fèi)用，是實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)模化應(yīng)用的必經(jīng)之路。

3.2PCR-ELISA

這是將PCR和ELISA兩種技術(shù)結(jié)合在一起的方法。將寡核苷酸共價(jià)交聯(lián)在PCR管壁上，用傳統(tǒng)PCR方法經(jīng)過(guò)擴(kuò)增、洗滌后，把交聯(lián)在管壁上的擴(kuò)增產(chǎn)物作為固相產(chǎn)物進(jìn)行ELISA反應(yīng)，把洗滌液中的少量擴(kuò)增產(chǎn)物作為液相產(chǎn)物，進(jìn)行凝膠電泳或核酸雜交。Block等［41］用酶聯(lián)免疫和實(shí)時(shí)熒光PCR的方法結(jié)合在一起，對(duì)玉米青枯病樣本進(jìn)行了鑒定試驗(yàn)，建立了酶聯(lián)免疫捕捉-實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)體系，大大提高了檢測(cè)靈敏度。陳曦等［42］用PCR—ELISA檢測(cè)玉米細(xì)菌性枯萎病菌（Pantoea stewartii）和玉米內(nèi)州萎焉病菌（Clavibacter michiganensis），只用8 h就檢測(cè)出了兩種病菌，其靈敏度比普通PCR方法高出100倍。但是該方法操作較為繁瑣，而且同批樣本產(chǎn)物之間的交叉污染程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于ELISA。PCR-ELISA是一種適合推廣的綜合檢測(cè)方法，其將越來(lái)越受到海關(guān)等檢疫部門(mén)的重視。優(yōu)化PCR-EL ISA技術(shù)體系，使之穩(wěn)定、易操作是今后研究的主要方向。

3.3微球免疫分析

微球免疫分析（xMAP）的技術(shù)原理是把不同待測(cè)物的抗體分子或基因探針以共價(jià)交聯(lián)的方式結(jié)合到特定的熒光編碼微球上，加入待測(cè)的擴(kuò)增片段，所形成的復(fù)合物再與標(biāo)記熒光素發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，微球在流動(dòng)鞘液的帶動(dòng)下單列依次通過(guò)紅綠激光來(lái)判定熒光編碼和熒光強(qiáng)度，從而達(dá)到快速準(zhǔn)確的定量目的。目前xMAP已成為一種替代的微生物檢測(cè)方法。這種技術(shù)多用來(lái)分析食源性致病菌、毒素［43］和潛在的臨床診斷的生物標(biāo)志物［44-45］。到目前為止，用xMAP技術(shù)檢測(cè)植物病原菌，只有為數(shù)不多的幾例報(bào)道［46-47］，且都是針對(duì)植物病毒的檢測(cè)。xMAP技術(shù)不需要繁瑣的DNA提取和純化步驟，具有其他分離方法難以比擬的操作簡(jiǎn)便、分離迅速完全的特點(diǎn)，屬于新的病原菌分離鑒定方法，有廣闊的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。xMAP技術(shù)與熒光定量PCR、ELISA和免疫熒光顯微術(shù)等相結(jié)合，還能實(shí)現(xiàn)特殊的檢測(cè)目的，為植物病原菌的檢測(cè)提供更加高效的手段。

4　紅外光譜技術(shù)

傅立葉變換紅外光譜（FTIR）檢測(cè)技術(shù)利用分子振動(dòng)能級(jí)的變化來(lái)鑒定分子中存在的官能團(tuán)。近年來(lái)，由于紅外光譜法能在樣品非破壞情況下準(zhǔn)確反映生物大分子甚至分子基因的變化，在食源性致病菌檢測(cè)鑒定中大量使用。微生物種類(lèi)的差別在FTIR圖譜上主要表現(xiàn)為峰形、峰的數(shù)量、峰位及特定峰的相對(duì)強(qiáng)度上，準(zhǔn)確度較高。李小龍等［48］對(duì)150片小麥葉片進(jìn)行紅外掃描處理后，鑒定出了小麥條銹病和葉銹??；徐曉鷗等［49］只用2 h左右，從豌豆和菜豆中同時(shí)檢測(cè)出了細(xì)菌性疫病，且光譜結(jié)果的特異性強(qiáng)。Thaitrong等［50］建立了用FTIR法鑒定西瓜果斑病菌（Pseudomonas pseudoalcaligenes）的兩個(gè)亞種的技術(shù)。同樣的方法，可以用來(lái)判斷萵苣霜霉病和辣椒疫病的光譜信息［51-52］。柴阿麗等［53］通過(guò)比較正常葉片和病變?nèi)~片的光譜圖，確定了3個(gè)黃瓜褐斑病敏感譜帶，再結(jié)合峰面積值和系統(tǒng)聚類(lèi)分析，可以用作早期黃褐病的鑒定。

這些年，隨著近紅外光譜儀器和化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件的發(fā)展，近紅外光譜分析技術(shù)已逐漸應(yīng)用到對(duì)各種水果的無(wú)損檢測(cè)中。通過(guò)該技術(shù)得到的光譜數(shù)據(jù)含有噪聲，需要進(jìn)行去噪處理，來(lái)提高模型穩(wěn)定性和預(yù)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。運(yùn)用光譜數(shù)據(jù)去噪法的漫投射光纖探頭對(duì)馬鈴薯塊莖進(jìn)行檢測(cè)，內(nèi)部品質(zhì)信息被光譜儀吸收并轉(zhuǎn)化為數(shù)據(jù)就能顯示在計(jì)算機(jī)上，判斷馬鈴薯是否遭受病害［54］。該方法操作簡(jiǎn)單，且不破壞植物樣本的組織，但對(duì)設(shè)備依賴(lài)性很大。在國(guó)內(nèi)，該項(xiàng)工作剛剛起步，研究較少，還停留在實(shí)驗(yàn)室階段，有待更深入的研究。

5　其他方法

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，植物病原體的檢測(cè)手段也越來(lái)越多。色譜技術(shù)、菌體脂肪酸分析系統(tǒng)等都可以用作植物病原菌檢測(cè)，但由于操作繁瑣、實(shí)用性不強(qiáng)等特點(diǎn)，對(duì)植物病原菌的研究一直比較少。二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展使得基因檢測(cè)具有高通量、高效性以及很強(qiáng)的實(shí)用性，Qinhua等［55］用焦磷酸測(cè)序法檢測(cè)野油菜黃單胞菌葉斑病，數(shù)分鐘就可獲得大量信息，但其所依賴(lài)的焦磷酸測(cè)序儀價(jià)格極其昂貴，并非一般實(shí)驗(yàn)室所能配備。

此外納米技術(shù)在提取核酸的過(guò)程中逐漸顯示出良好的特點(diǎn)。連海燕等［56］建立了一種以納米磁珠提取核酸為基礎(chǔ)，同時(shí)結(jié)合RT-PCR/RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)植物類(lèi)病毒的方法。磁性納米材料比表面積大、容易修飾，具有可操作性。以納米磁珠為載體，提取的核酸質(zhì)量高。該方法具有操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)用到出入境檢疫系統(tǒng)中，對(duì)于提高檢疫水平和相關(guān)農(nóng)產(chǎn)品的進(jìn)出口通過(guò)率有很重要的意義

6　結(jié)語(yǔ)

植物病原菌主要通過(guò)土壤、昆蟲(chóng)、植物體材料、空氣等途徑傳播。目前較為實(shí)用的檢測(cè)方法是病菌分離培養(yǎng)配合PCR鑒定，檢測(cè)快速且成本低，但經(jīng)常有漏檢的情況發(fā)生，對(duì)不同病害的檢測(cè)水平上也存在差異。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)、光譜等技術(shù)的快速發(fā)展，尤其是幾種學(xué)科的交叉研究，新的植物病原菌檢測(cè)方法不斷出現(xiàn)，在檢測(cè)水平上體現(xiàn)出傳統(tǒng)方法無(wú)可比擬的優(yōu)點(diǎn)。然而這些方法在實(shí)際應(yīng)用中受到技術(shù)、設(shè)備等的制約，需要在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步研究和優(yōu)化，暫時(shí)不適合推廣應(yīng)用。在實(shí)際的檢疫工作中，我們應(yīng)該根據(jù)實(shí)際條件及檢測(cè)樣品的特點(diǎn)，選擇合適的檢測(cè)方法。隨著現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，植物病原菌檢疫正朝著快速、高敏感性、高特異性、高通量及自動(dòng)化的方向發(fā)展。

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Application of Modern Biological Methods in Detecting of Plant Phytopathogens

HUANG Can1，2，CHEN Qin1，*
（1.College of Life Sciences，Shanghai University，Shanghai 200436，China；2.Suzhou Institute of Biomedical Engineering and Technology，Chinese Academy of Sciences，Suzhou 215163，Jiangsu，China）

It is difficult for pathogenic bacterium to be classified and identified by the methods of morphological observation in plant.The new studies of detection methods for pathogenic bacterium during plant processing and storage were summarized in the paper.The purpose is to promote the rapid development of pathogenic bacteria of plant in our country.

pathogenic bacterium；modern biological technology；detection methods

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.13.051

黃燦（1989—），男（漢），碩士研究生，研究方向：生物抗病分子機(jī)制及病毒致病機(jī)理。

陳沁（1969—），女（漢），教授，博士，研究方向：農(nóng)作物抗逆分子機(jī)制及植物與微生物互作關(guān)系。

2015-02-13