王　娟　　李洪亮袁2　　汪選斌袁2　　歐陽(yáng)露袁2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，湖北十堰　442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，湖北十堰　442000

?

鄂西北地區(qū)三枝九葉草藥用價(jià)值考察

王娟1李洪亮1袁2汪選斌1袁2歐陽(yáng)露1袁2
1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，湖北十堰442000

[摘要]目的考察鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草藥用價(jià)值。方法以淫羊藿苷和總黃酮含量作為考察指標(biāo)，采用高效液相色譜法和紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。采用ODSPhenomenex GeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水（30∶70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃。結(jié)果按干燥品計(jì)算淫羊藿苷含量和總黃酮含量分別為0.51%和5.05%，均達(dá)到《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草具有較高藥用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]三枝九葉草曰鄂西北地區(qū)曰淫羊藿苷曰總黃酮

三枝九葉草（Epimedium sagittatum）屬小檗科淫羊藿屬多年生草本植物?！吨袊?guó)植物志》記載其有補(bǔ)精強(qiáng)壯，祛風(fēng)濕，治陽(yáng)痿、關(guān)節(jié)風(fēng)濕痛等癥的功效。淫羊藿（Herbaepimedii）是一種傳統(tǒng)的補(bǔ)益中藥。性味辛、甘、溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功能?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果證實(shí)，淫羊藿具有多種重要的藥理作用：淫羊藿的有效成分具有擬雌激素樣作用，能增加骨密度；淫羊藿對(duì)心腦血管方面有降血壓、降血脂的作用；可以影響腫瘤細(xì)胞周期調(diào)控原癌基因和抑癌基因并誘導(dǎo)凋亡；可以直接增加免疫細(xì)胞的數(shù)量，提高免疫細(xì)胞淋巴因子的分泌，增強(qiáng)免疫力；淫羊藿還可以改善記憶力，影響神經(jīng)系統(tǒng)等[1-11]。

淫羊藿的化學(xué)成分包括黃酮類、木脂素類、酚苷類、生物堿類、色酮類、菲、蒽醌、鞣質(zhì)、倍半萜、甾醇等上百種成分。其中淫羊藿總黃酮有抗骨質(zhì)疏松、促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)、改善心臟血液流變性、抗心肌缺氧、促進(jìn)雄性生殖系統(tǒng)和生殖內(nèi)分泌功能、抗炎、抗腫瘤、抗衰老等作用，其是淫羊藿中的主要有效成分。而淫羊藿苷則為黃酮類的代表性成分，具有降低動(dòng)脈粥樣硬化患者血栓形成概率及調(diào)血脂、促進(jìn)雌性激素體內(nèi)生物合成、保護(hù)受損神經(jīng)元及恢復(fù)記憶力等藥理活性[12-15]。因此本課題以淫羊藿苷和淫羊藿總黃酮的含量作為指標(biāo)考察鄂西北地區(qū)三枝九葉草的藥用價(jià)值，為該地區(qū)淫羊藿藥用植物資源的開(kāi)發(fā)和保護(hù)提供參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀（LC-20AD泵、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD-M20A紫外檢測(cè)器、LC-Solution色譜工作站）（日本島津公司）；KQ-500PV型數(shù)控超聲波清洗器（蘇州博德超聲設(shè)備有限公司）；TU-1901型雙光束紫外可見(jiàn)光光度儀（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；FA2004型電子天平（上海精科公司）。

1.2試藥

淫羊藿苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所；批號(hào)：110737-200415）。

三枝九葉草樣品于2015年4月采集于十堰市郊的牛頭山，經(jīng)湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院中藥藥理教研室張曉燕副教授鑒定為小檗科淫羊藿屬植物Epimedium sagittatum。樣品晾干打粉，過(guò)4號(hào)篩備用。

甲醇（分析純），乙腈（色譜純），水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1淫羊藿苷的含量測(cè)定

2.1.1色譜條件

色譜柱：ODSPhenomenex GeminiC18柱（250mm× 4.6mm，5μm）。流動(dòng)相：乙腈-水（30∶70）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；進(jìn)樣量：10μL，柱溫：30℃。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1　各溶液的H P L C色譜圖

2.1.2溶液的配制

2.1.2.1淫羊藿苷對(duì)照品溶液的配制取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含0.1mg的淫羊藿苷溶液，搖勻即得。

2.1.2.2三枝九葉草供試品溶液的配制取三枝九葉草樣品粉末約0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，精密稱定，超聲1 h，放冷至室溫，以50%乙醇補(bǔ)足失重，搖勻?yàn)V過(guò)，續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.1.3線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.1.2.1”項(xiàng)下制備的淫羊藿苷對(duì)照品溶液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL置于10 mL容量瓶中，甲醇定容搖勻，制得濃度為10.0、20.0、50.0、80.0、100.0μg/mL的對(duì)照品系列溶液，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，以質(zhì)量濃度對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，得線性范圍和回歸方程，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.1～1.0μg之間線性關(guān)系良好?；貧w方程Y=4.776957×10-8X-1.254898×10-4（r= 0.9989）。

2.1.4精密度試驗(yàn)

取“2.1.2.1”項(xiàng)下制備的淫羊藿苷對(duì)照品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣10μL，重復(fù)6次，以淫羊藿苷峰面積計(jì)算RSD為0.22%，表明儀器精密度良好。

2.1.5重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品6份，按照“2.1.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10μL，測(cè)定淫羊藿苷的峰面積，RSD為1.58%，說(shuō)明該法重復(fù)性好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 h進(jìn)樣10μL，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算淫羊藿苷的含量，RSD為0.34%，說(shuō)明樣品供試品溶液12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7加樣回收率試驗(yàn)

取已知淫羊藿苷含量的樣品粉末6份，精密稱定，置100mL容量瓶中，精密加入淫羊藿苷對(duì)照品溶液適量，按照“2.1.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量，求得淫羊藿苷的回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.1.8樣品含量測(cè)定

精密稱取樣品3份，按照“2.1.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

取樣量（g）淫羊藿苷量（mg）百分含量（%）平均百分含量（%）RSD （%）0.2516 0.2269 0.2401 1.18 1.16 1.25 0.47 0.51 0.52 0.51　0.03

2.2總黃酮含量測(cè)定

分別精密量取“2.1.2.2”項(xiàng)下供試品溶液0.5 mL 3份，分別置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密量取“2.1.2.1”項(xiàng)下淫羊藿苷對(duì)照品溶液1mL置10mL容量瓶中，加甲醇制成每毫升含10μg的淫羊藿苷溶液作為對(duì)照品溶液。分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法在270 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　總黃酮含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3　討論

淫羊藿始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，已有2000多年的歷史，為使用最早的滋補(bǔ)類中藥之一，并且使用十分廣泛，是《中國(guó)藥典》收載來(lái)源最多的植物中藥材之一。淫羊藿由于其多種藥理活性一直受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的高度重視，是多年來(lái)重點(diǎn)研究的藥用植物和最具開(kāi)發(fā)潛力的中藥之一。淫羊藿的生長(zhǎng)習(xí)性為海拔650～3500米處林下、溝邊灌叢中或山坡陰濕處。鄂西北地處鄂、豫、陜、渝四?。ㄊ校┙唤?，漢江中游的秦巴山區(qū)腹地，東有武當(dāng)山，南有以“華中屋脊”之稱的神農(nóng)架原始大森林，具有得天獨(dú)厚的地理優(yōu)勢(shì)：地處亞熱帶季風(fēng)區(qū)，氣侯濕潤(rùn)溫和，雨量充沛，四季分明，日照充足，無(wú)霜期長(zhǎng)，這種特殊的地理位置及氣侯條件特別適宜于三枝九葉草的生長(zhǎng)，因此三枝九葉草資源十分豐富。

2015年版《中國(guó)藥典》規(guī)定，藥用淫羊藿中淫羊藿苷含量不低于0.5%；總黃酮含量不低于5.0%[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草的淫羊藿苷與總黃體酮含量分別為0.51%和5.05%，均達(dá)到《中國(guó)藥典》規(guī)定，說(shuō)明鄂西北地區(qū)的三枝九葉草的有效成分含量達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)，具有較高的藥用價(jià)值。

目前，我國(guó)淫羊藿藥材幾乎全部來(lái)源于野生資源，各產(chǎn)區(qū)品種質(zhì)量參差不齊，嚴(yán)重影響療效。隨著市場(chǎng)需求的不斷增長(zhǎng)，長(zhǎng)期依賴于野生資源使其儲(chǔ)量日益減少，因此，對(duì)于淫羊藿藥用植物資源的開(kāi)發(fā)和保護(hù)迫在眉睫。鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草資源十分豐富，本實(shí)驗(yàn)的考察結(jié)果為實(shí)現(xiàn)淫羊藿的人工馴化栽培和規(guī)范化種植基地建設(shè)奠定了基礎(chǔ)，對(duì)增強(qiáng)本地經(jīng)濟(jì)發(fā)展、促進(jìn)中草藥資源的可持續(xù)利用具有重要意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Kang LS，Chen B，Reyes RA.Aging and estrogen alter endothelial reactivity to reactive oxygen species in coronary arterioles[J].Am JPhysical Heart Circ Physical，2011，300 （6）：H2105-H2115.

[2]Chen Y，Wang JY，Jia XB，et al.Role of intestinal hydrolase in the absorption of prenylated flavonoids present in Yinyanghuo[J].Molecules，2011，16（2）：1336-1348.

[3]Liang WN，Lin MN，Li XH，et al.Icariin promotes bone formation via the BMP-2/Smad 4 signal transduction pathway in the hFOB1.19 human osteoblastic cell line[J].Int J MolMed，2012，30（4）：889-895.

[4]姚暄，賈立群，譚煌英，等.中藥淫羊藿對(duì)大鼠乳腺癌骨轉(zhuǎn)移模型疼痛和破骨細(xì)胞的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2012，27（5）：1266-1269.

[5]韓愛(ài)萍，張潔，丁選勝.淫羊藿總黃酮對(duì)糖尿病小鼠血管功能的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27（3）：243-246.

[6]王雪冰，張磊，田允，等.女貞子、淫羊藿補(bǔ)腎中藥對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮舒縮功能的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（15）：2924-2927.

[7]錢海華，劉鵬，李晶，等.淫羊藿素通過(guò)抗氧化損傷延緩CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝硬化進(jìn)程[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，32（6）：625-629.

[8]劉得水，陳剛，盧長(zhǎng)方，等.淫羊藿苷聯(lián)合絲裂霉素對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用[J].中國(guó)生化藥物雜志，2011，32（1）：22-25.

[9]朱燕輝，黃麗霞，石崇軍.淫羊藿苷對(duì)肝癌細(xì)胞株SMMC-7721增殖與凋亡的影響[J].中國(guó)普通外科雜志，2012，21 （8）：968-972.

[10]王小穩(wěn).淫羊藿總黃酮對(duì)病毒性心肌炎小鼠血清免疫調(diào)節(jié)因子水平的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2012，47 （1）：60-63.

[11]張耀東，蔡亞楠，張琦，等.淫羊藿苷對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012，47（9）：1141-1146.

[12]張玉萱，徐玲玲.淫羊藿總黃酮的藥理作用研究進(jìn)展[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2012，16（9）：125-128.

[13]ZhangWP，Bai XJ，Zheng XP，et al.Icariin attenuates the enhanced prothrombotic state in atherosclerotic rabbits independentlyof its lipid-lowering effects[J].PlantaMed，2013，79（9）：731-736.

[14]Yang LJ，Lu DF，Guo JJ，etal.Icariin from epimedium brevicornum maxim promotes the biosynthesisof estrogen by aromatase（CYP19）[J].JEthnopharmacol，2013，145（3）：715-721.

[15]Li F，Gong QH，Wu Q，etal.Icariin isolated from epimedium brevicornum maxim.attenuates learning and memory deficits induced by D-galactose in rats[J].Pharmacol Biochem Behav，2010，96（3）：301-305.

[16]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：327-328.

M edicinal valuable assessment of Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province

WANG Juan1LIHongliang1,2WANG Xuanbin1,2OUYANG Lu1,2
1.Laboratory of Chinese Herbal Pharmacology,the Affiliated Renmin Hospital Hubei Univeristy of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy,Hubei Univeristy of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China

[Abstract]Objective To assess the medicinal value of wild Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province. M ethods High performance liquid chromatography and UV-Vis pectrophotometer were conducted with contents of icariin and total flavonoids as determining indexes.HPLC was conducted at a column temperature of 30℃with a column of ODS Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm)and acetonitrile-water(30∶70,V/V)as the mobile phase,with a wave length at 270 nm and a flow speed at 1.0mL/min.Results Content of icariin and total flavonoids in dried Epimedium sagittatum was 0.51%and 5.05%respcetively,which reached the criteria of the Chinese Pharmacopeia.Conclusion Wild Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province has highmedical value.

[Key words]Epimedium sagittatum;Northwest Hubei Province;Icariin;Total flavonoids

收稿日期：（2015-09-23本文編輯：趙魯楓）

[通訊作者]歐陽(yáng)露（1972.10-），女，碩士，副教授，副主任藥師；研究方向：中藥新制劑研發(fā)。

[基金項(xiàng)目]湖北省教育廳項(xiàng)目（B2015487）；湖北省2011協(xié)同創(chuàng)新中心基金（4）；湖北省高等學(xué)校優(yōu)秀中青年科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃項(xiàng)目（T201510）；湖北省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（2014CFB642）；湖北醫(yī)藥學(xué)院優(yōu)秀中青年團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2014C XG03）。

[中圖分類號(hào)]R927.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1673-7210（2016）01（a）-0046-03