李 明?。ㄉ綎|省臨朐縣畜牧局　262600）

奶牛隱形乳房炎快速診斷治療技術(shù)的研究進(jìn)展

李 明（山東省臨朐縣畜牧局262600）

隨著我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及人民生活水平的提高，乳制品的消費(fèi)量越來(lái)越大。目前，我國(guó)乳業(yè)已經(jīng)處在一個(gè)高速發(fā)展的時(shí)期，是畜牧業(yè)中增長(zhǎng)最快的產(chǎn)業(yè)。奶牛養(yǎng)殖業(yè)作為乳業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，在很大程度上制約著乳業(yè)的發(fā)展，奶牛各類疾病發(fā)病率尤其是普通病發(fā)病率居高不下。其中，奶牛乳房炎是影響奶牛業(yè)的一種常見(jiàn)疾病，尤其是隱性乳房炎，發(fā)病率極高。由此而帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失是十分巨大的。因此，及時(shí)診斷奶牛隱性乳房炎并采取相應(yīng)的防控措施，在預(yù)防并治療奶牛隱性乳房炎中尤為重要。

1　奶牛隱形乳房炎現(xiàn)狀

據(jù)報(bào)道，臨床型乳房炎與隱性乳房炎發(fā)病之比為1∶15～40，即使在美國(guó)、日本這些飼養(yǎng)水平較高的國(guó)家，隱性乳房炎的發(fā)病率也在50%以上。目前，全世界約有三分之一的奶?；加懈鞣N類型乳房炎。國(guó)內(nèi)外大量研究表明∶奶牛乳房炎的發(fā)病率較高。在國(guó)外乳房炎的發(fā)病率為25%～60%［1］。在美國(guó)30%～70%的母牛至少有一個(gè)乳區(qū)被感染。在英國(guó) Mrode對(duì)來(lái)自63個(gè)場(chǎng)的10427頭母牛統(tǒng)計(jì)，平均乳房炎的發(fā)病率22%［2］。在我國(guó)，據(jù)調(diào)查奶牛乳房炎的陽(yáng)性率在46.4%～85.7%，發(fā)病率普遍高于國(guó)外。由于發(fā)生隱性乳房炎時(shí)無(wú)明顯乳汁異變，無(wú)任何臨床癥狀，常被人們忽視，但是進(jìn)行細(xì)菌學(xué)和生化檢查時(shí)則有明顯的變化，乳的品質(zhì)受到嚴(yán)重的影響，同時(shí)也可使產(chǎn)后發(fā)情和妊娠時(shí)間延長(zhǎng)，并且可間接危及人的健康，因此所帶來(lái)的危害性也就更大。目前，在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，缺少必要的檢測(cè)控制的快速診斷手段，常因貽誤病情帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

2　常見(jiàn)的診斷技術(shù)

2.1乳汁病原微生物檢查將奶牛乳汁樣品進(jìn)行病原微生物的分離培養(yǎng)和鑒定是實(shí)驗(yàn)室確診奶牛乳房炎病原的一種最主要的方法。當(dāng)在桶奶中發(fā)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌或霉形體時(shí)，就要注意這些病原菌可能引起該牛群乳房炎的暴發(fā)［3］。將無(wú)菌采集的新鮮奶樣接種于培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)、涂片、革蘭氏染色、鏡檢等過(guò)程反復(fù)純化病原菌，通過(guò)生化實(shí)驗(yàn)鑒定菌株。

2.2乳汁細(xì)胞學(xué)檢查根據(jù)乳汁中體細(xì)胞數(shù)的多少來(lái)判斷奶牛是否患有隱性乳房炎是一種可靠的方法。乳汁細(xì)胞學(xué)檢查的方法很多，其中乳汁體細(xì)胞直接計(jì)數(shù)檢驗(yàn)的方法有白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的刻度管檢驗(yàn)法，直接顯微鏡細(xì)胞計(jì)數(shù)法，熒光電子細(xì)胞計(jì)數(shù)法等［4］；間接檢驗(yàn)體細(xì)胞數(shù)的方法有美國(guó)加州乳房炎檢驗(yàn)法，以及國(guó)內(nèi)類似的方法：如蘭州乳房炎檢驗(yàn)法、吉林乳房炎檢驗(yàn)法、杭州乳房炎檢驗(yàn)法等。國(guó)際奶牛聯(lián)合會(huì)也規(guī)定，SCC超過(guò)50萬(wàn)/ml認(rèn)為是乳房炎陽(yáng)性。但是，中國(guó)農(nóng)科院中獸醫(yī)研究所根據(jù)實(shí)驗(yàn)提出在治療乳房炎判定療效時(shí)，乳汁細(xì)胞數(shù)降至100萬(wàn)/ml以下就可定為正常，國(guó)外也有相似的報(bào)道。

2.3乳汁的電導(dǎo)率測(cè)定乳腺感染后，血乳屏障的滲透性改變，Na+、Cl-進(jìn)入乳汁，使乳汁電導(dǎo)率值升高，故可通過(guò)檢測(cè)乳汁的電導(dǎo)率來(lái)監(jiān)測(cè)隱性乳房炎［5］。1983年，山西農(nóng)大推出SX-I型乳房炎診斷儀，這種儀器不但能區(qū)分健康乳、可疑乳、隱性乳房炎輕度乳、中度乳、重度乳等5類乳汁，還可初步測(cè)定乳汁的營(yíng)養(yǎng)成分，以電導(dǎo)電極為傳感器的便攜式奶檢儀，體積小，能快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)出摻假加水牛奶、酸敗牛奶和乳房炎牛奶。但該方法具有高度的靈敏性，使用前應(yīng)注意采樣杯內(nèi)的電極是否清潔，操作者手上擦的潤(rùn)膚霜、干燥的奶牛脂肪和其它污染物都均會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果（數(shù)值偏高），一般可用浸有酒精或洗潔精的紗布、面巾紙擦去油跡，再用清水沖洗干凈即可。

2.4酶檢測(cè)法研究證實(shí)，奶?；既榉垦讜r(shí)，體內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）、酸性磷酸酶（ACP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）等酶活性發(fā)生變化［6］，另外，檢測(cè)N-乙酰β-D氨基葡萄甙酶（NAGase）活性變化，也常用于奶牛隱性乳房炎的診斷。但目前為止，這些檢測(cè)都只能作為奶牛乳房炎實(shí)驗(yàn)室診斷的一個(gè)或幾個(gè)參考指標(biāo)，是乳房炎診斷的輔助診斷手段。另?yè)?jù)報(bào)道，髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）可作為奶牛隱性乳房炎的指示性物質(zhì)，應(yīng)用先進(jìn)的ELISA檢測(cè)試劑盒和試紙條技術(shù)來(lái)檢測(cè)奶牛隱性乳房炎是一個(gè)快速簡(jiǎn)便的診斷思路，生產(chǎn)實(shí)踐中尚無(wú)涉及。

2.5乳清電泳診斷法乳腺發(fā)生炎癥時(shí)，乳中血清白蛋白和免疫球蛋白的含量升高相當(dāng)明顯，β-乳球蛋白的下降也相當(dāng)顯著，而α-乳白蛋白有下降的趨勢(shì)［7］。有研究證實(shí)牛乳清電泳圖譜與奶牛隱性乳房炎的關(guān)系，通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同的季節(jié)對(duì)隱性乳房炎乳汁及其正常的乳清蛋白質(zhì)組分影響不大。因此，乳清蛋白是一個(gè)較為穩(wěn)定且能反映乳房炎性程度的一個(gè)指標(biāo)。

2.6乳汁pH值檢驗(yàn)法現(xiàn)已證明，乳房炎乳汁的pH值呈堿性，堿性的高低決定于炎癥的程度。因此可以通過(guò)測(cè)定乳汁pH值的方法來(lái)檢測(cè)乳房炎［8］。乳汁pH值檢驗(yàn)法操作比較簡(jiǎn)單，常用的是溴麝香草酚藍(lán)（BTB）檢驗(yàn)法和乳房炎試紙法。

2.7PCR法因PCR技術(shù)具有特異、敏感、快速等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)許多國(guó)家研究開發(fā)出用于鑒別診斷乳房炎主要病原菌的PCR方法［9］。2006年，我國(guó)有人研制出用多重PCR方法同時(shí)檢測(cè)乳房炎奶樣中的3種病原菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和無(wú)乳鏈球菌）的技術(shù)，并經(jīng)過(guò)對(duì)送檢的36 份來(lái)自奶牛乳房炎或隱性乳房炎的奶樣進(jìn)行多重PCR檢測(cè)，其結(jié)果與常規(guī)鑒定結(jié)果一致，證明用多重PCR方法檢測(cè)奶牛乳房炎特異性好、敏感性強(qiáng)，無(wú)需進(jìn)行繁瑣的細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，但該檢測(cè)方法技術(shù)操作要求較高，實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用較少。

3　小結(jié)

隱形乳房炎檢測(cè)方法眾多，各有優(yōu)劣，有的適合實(shí)驗(yàn)室中操作，有的可以應(yīng)用在生產(chǎn)一線，綜合上述方法的特點(diǎn)，筆者在實(shí)際生產(chǎn)中，可以考慮結(jié)合其中一種或兩種方法建立一個(gè)快速診斷技術(shù)體系，例如首先用乳汁的電導(dǎo)率測(cè)定對(duì)產(chǎn)奶牛進(jìn)行初篩，再對(duì)疑似病牛通過(guò)體細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行確診。這兩種方法相互取長(zhǎng)補(bǔ)短，簡(jiǎn)單易操作、準(zhǔn)確性高，特別適用于一線工作人員，有利于快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出隱性乳房炎發(fā)病牛群。

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S858.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

1007-1733（2016）08-0087-02

2016-07-03）