蘇嬌 呂春 聶翠鳳/內(nèi)蒙古巴彥淖爾市杭錦后旗疫控中心

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非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室診斷方法研究進(jìn)展

蘇嬌 呂春 聶翠鳳/內(nèi)蒙古巴彥淖爾市杭錦后旗疫控中心

非洲豬瘟是各主要養(yǎng)豬國(guó)家最擔(dān)心發(fā)生的豬疫病之一，因?yàn)樗梢砸鹈庖咭种?，容易造成很高的死亡率，可達(dá)100%，目前應(yīng)對(duì)該病尚無(wú)有效的治療方法或疫苗。據(jù)報(bào)道，與我國(guó)相鄰的俄羅斯等國(guó)家不斷有該疫情的暴發(fā)，該疫情已影響到俄羅斯國(guó)土面積的三分之一以上，這給我國(guó)動(dòng)物疫病防控工作帶來(lái)了很大的威脅。由此可見，有效的實(shí)驗(yàn)室診斷方法在非洲豬瘟防控中顯得尤為重要。本文就非洲豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷方法研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

一、非洲豬瘟抗體檢測(cè)——酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)應(yīng)用于血清抗體的檢測(cè)，具有操作方便，特異性較好，靈敏度高，適用于大批量樣品的檢測(cè)。國(guó)外Perez Filgueira DM等人采取了不同地區(qū)的豬血清樣品進(jìn)行試驗(yàn)，該試驗(yàn)表明間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)敏感性高，能夠檢測(cè)到非洲豬瘟病毒早期感染的樣品，可以用于早期的特異性抗體檢測(cè)。Vidal MI等人建立了固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，其檢測(cè)血清樣品的敏感性達(dá)0.05 mg/ml。Hutchings GH等人建立了間接夾心酶聯(lián)免疫吸附

試驗(yàn)，試驗(yàn)表明其敏感性高于單抗酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。我們國(guó)內(nèi)也有人以VP73純化蛋白為包被抗原，建立了間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)非洲豬瘟病毒血清抗體，與商品化的阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)相比，其具有較好的敏感性和特異性。目前主要是間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和競(jìng)爭(zhēng)或阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)非洲豬瘟病毒血清抗體，西班牙某公司已經(jīng)研制出阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒，并且已經(jīng)商品化，也是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織指定的參考試劑盒，該試劑盒的敏感性和特異性均較好，已被很多國(guó)家使用。

二、非洲豬瘟病原學(xué)檢測(cè)

（一）PCR方法

PCR已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于疾病診斷和科學(xué)研究中，其具有簡(jiǎn)單快速、靈敏度高和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。PCR技術(shù)無(wú)需病毒分離培養(yǎng)，可以直接檢測(cè)到組織或體液中的病毒，也可以同時(shí)檢測(cè)同一病原不同株或不同病原的檢測(cè)，為疫病檢測(cè)提供了有效的技術(shù)支撐。

國(guó)外Agǜero M等人設(shè)計(jì)了p72蛋白編碼區(qū)的引物，建立了檢測(cè)非洲豬瘟的PCR診斷方法，該試驗(yàn)方法可用于非洲豬瘟的快速診斷，也可用于監(jiān)控非洲豬瘟病毒的發(fā)生，以便及時(shí)采取有效的應(yīng)急措施，同時(shí)因?yàn)镻CR診斷方法快速、有效，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為非洲豬瘟病毒的參照診斷方法。Basto AP等人設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，建立了檢測(cè)非洲豬瘟的巢式PCR方法，該診斷方法與病毒分離和常規(guī)PCR相比，此方法更加敏感，可用于非洲豬瘟病毒的流行地區(qū)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR克服了傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后處理和易污染的缺點(diǎn)，它是利用熒光信號(hào)，對(duì)整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的技術(shù)。King DP等人以非洲豬瘟病毒p72為目的基因，設(shè)計(jì)了相應(yīng)的引物和探針序列，建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)非洲豬瘟的診斷方法，該方法更加簡(jiǎn)便、快速和靈敏。也有相關(guān)人士表示，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)感染豬，耗時(shí)不足2 h。國(guó)內(nèi)的陳靜靜等人建立了雙重?zé)晒舛縋CR，可同時(shí)檢測(cè)古典豬瘟病毒和非洲豬瘟病毒，只需一步即可完成，可作為鑒別兩種病毒的診斷方法。

（二）環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)時(shí)間短，成本低廉，檢測(cè)成本遠(yuǎn)低于熒光定量PCR，無(wú)需特殊儀器設(shè)備，整個(gè)實(shí)驗(yàn)只需水浴鍋或金屬恒溫儀，適用于基層檢疫部門，具有更高的實(shí)用推廣價(jià)值。James HE等人使用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法檢測(cè)非洲豬瘟病毒，結(jié)果表明該方法與實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)組織和血液樣品的結(jié)果一致。楊吉飛等人建立了環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)非洲豬瘟病毒，試驗(yàn)結(jié)果表明所建立的診斷方法可有效地用于非洲豬瘟的快速診斷和防控。

三、小結(jié)

目前，實(shí)驗(yàn)室診斷是監(jiān)測(cè)和控制非洲豬瘟暴發(fā)行之有效的辦法，因?yàn)楫?dāng)前尚無(wú)有效的藥物治療或疫苗進(jìn)行防控。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)適用于檢測(cè)感染豬的低毒力或中等毒力的非洲豬瘟病毒抗體，可用作大規(guī)模血清樣品的篩選，同時(shí)也適用于根除計(jì)劃。PCR診斷技術(shù)需具備PCR儀或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR儀，可用于非洲豬瘟的疫情監(jiān)測(cè)情況。而環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測(cè)非洲豬瘟有待于進(jìn)一步完善，為臨床快速診斷提供一定的技術(shù)支撐。

參考文獻(xiàn)（略）