胡夢(mèng)薇，許萬云，劉朋濤，嚴(yán)　國(guó)，汪文倫，高劍峰

(石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆石河子 832003)

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NO/ADMA在布魯菌侵染小鼠機(jī)體過程中的響應(yīng)特征

胡夢(mèng)薇，許萬云，劉朋濤，嚴(yán)國(guó)，汪文倫，高劍峰*

(石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆石河子 832003)

摘要:本試驗(yàn)旨在研究布魯菌侵染小鼠過程中一氧化氮(NO)的作用,以及NO和非對(duì)稱性二甲基精氨酸(ADMA)在此過程的相互作用關(guān)系。以布魯菌標(biāo)準(zhǔn)疫苗株M5侵染小鼠，首先用小鼠的血清進(jìn)行虎紅平板凝集(RBPT)和試管凝集試驗(yàn)(SAT)，再用Griess試劑法和ELISA法測(cè)定對(duì)照組和侵染組不同組織和血清中的NO和ADMA含量，對(duì)小鼠肝臟和脾臟的各個(gè)侵染時(shí)間段進(jìn)行CFU計(jì)數(shù)觀察。結(jié)果顯示，用布魯菌M5侵染小鼠后，RBPT和SAT在14 d時(shí)檢測(cè)到有陽(yáng)性反應(yīng)。侵染組和空白對(duì)照組NO總含量上變化不大，但侵染組血清中的NO含量隨時(shí)間出現(xiàn)下降，而肝脾中NO含量隨時(shí)間出現(xiàn)上升，其他各組織NO含量波動(dòng)不明顯。而ADMA的總趨勢(shì)與NO相反。CFU計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，小鼠肝脾內(nèi)布魯菌的數(shù)量在14 d時(shí)一直處于增長(zhǎng)狀態(tài)，28 d時(shí)布魯菌的數(shù)量下降，表明布魯菌的分裂繁殖和機(jī)體NO的含量存在一定的關(guān)系。

關(guān)鍵詞:布魯菌疫苗株M5；一氧化氮；非對(duì)稱性二甲基精氨酸

綿羊(Ovisaries)是我國(guó)乃至世界重要的家畜之一，是人們?nèi)粘Ｉ钪腥庵破贰⒛讨破泛推っ椘返仍系膩碓粗?，?duì)社會(huì)的進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有著重要作用。但是隨著養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展，各種與綿羊相關(guān)的疾病隨之而來，嚴(yán)重影響了我國(guó)畜牧業(yè)的發(fā)展。布魯菌病(Brucellosis)是由布魯菌(Brucella)感染引起的一種人畜共患病[1-2]。布魯菌病在全世界范圍內(nèi)分布十分廣泛，中國(guó)流行的病原多為羊種布魯菌,而且致病力最強(qiáng)[3]，因此對(duì)于綿羊布病的預(yù)防和治療是非常有必要的[4-5]。

生物體內(nèi)的一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)催化生成NO，NO是生物體內(nèi)重要的信號(hào)分子，在機(jī)體防御、神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)、血管擴(kuò)張等生理過程中發(fā)揮著重要的作用。而非對(duì)稱性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)可對(duì)NO的生成起到抑制作用，可以競(jìng)爭(zhēng)性抑制全部種類的NOS異構(gòu)體。當(dāng)前關(guān)于NO和ADMA的研究大多是與人類疾病相關(guān)的，而NO 和ADMA 布魯菌病的關(guān)系以及兩者之間相互作用方面的研究較少。本試驗(yàn)通過建立布魯菌疫苗株M5感染小鼠的模型，采用Griess試劑法和ELISA對(duì)小鼠不同組織中NO含量和ADMA水平進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行CFU計(jì)數(shù)觀察，為進(jìn)一步研究其引起的免疫應(yīng)答及布魯菌病的診斷和防控奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1菌種和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物布魯菌標(biāo)準(zhǔn)疫苗株M5由新疆石河子大學(xué)人畜共患病實(shí)驗(yàn)室保存。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為6周齡～8 周齡雌性昆明白小鼠，共計(jì)30只。

1.1.2主要試劑布魯菌液體和固體培養(yǎng)基均為美國(guó)BD公司產(chǎn)品；布魯菌虎紅平板凝集診斷試劑盒和試管凝集診斷試劑均為哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司產(chǎn)品；總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(total nitric oxide assay kit)為江蘇碧云天生物技術(shù)研究所產(chǎn)品；非對(duì)稱性二甲基精氨酸ELISA試劑盒(mouse asymmetric dimethylaoyoinine ELISA kit)為上海BlueGene 公司產(chǎn)品；PBS 為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭┊a(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1布魯菌的培養(yǎng)和菌量計(jì)數(shù)在超凈工作臺(tái)中，用涂布器把布魯菌菌種接種在布魯菌固體培養(yǎng)基上，封口，放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，挑取單個(gè)、均勻、光滑型的菌落，再接種于20 mL的布魯菌液體培養(yǎng)基中，放入搖床，37 ℃ 180 r/min，培養(yǎng)72 h～96 h，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，取出放入4 ℃冰箱進(jìn)行保存。待需要使用時(shí)可吸取1 mL菌液到1.5 mL離心管，12 000 r/min 離心1 min，棄上清液，在加入1 mL的PBS 懸浮布魯菌沉淀，并重復(fù)離心和重懸，將PBS 菌懸液轉(zhuǎn)移到比濁管中，采用麥?zhǔn)媳葷岱ㄟM(jìn)行比濁計(jì)數(shù)，以確定所需的菌量，收集菌液，將菌液稀釋成5.0×106CFU/mL。

1.2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫將6周齡～8周齡的雌性小鼠隨機(jī)分成侵染組和空白對(duì)照組，每組15只。侵染組每只注射0.2 mL(1.0×106CFU /只)的布魯菌液，空白對(duì)照組每只注射0.2 mL的PBS緩沖液。采用腹腔注射，每只注射一次。

1.2.3血清采集和處理分別在小鼠腹腔注射后的3、7、14、28 d，用鑷子摘眼球取血，血液靜置半小時(shí)，1 000 r/min離心8 min，吸去上層血清備用。如果樣品暫時(shí)不使用，則分成小份保存在-80 ℃冰箱中，避免樣品被反復(fù)凍融。

1.2.4器官采集和處理摘眼球取血后，斷頸處死小鼠，取心、肝、脾、肺和腎各0.1 g，放入2 mL離心管，加1 mL的PBS，放入2顆0.5 mm鋼珠,在高通量組織研磨儀中研磨勻漿，放入4 ℃離心機(jī)中2 500 r/min離心5 min后吸取上清液，備用。如果樣品暫時(shí)不使用，則分成小份保存在-80 ℃冰箱中，避免樣品被反復(fù)凍融。

1.2.5標(biāo)準(zhǔn)試管凝集試驗(yàn)(SAT)按照標(biāo)準(zhǔn)布魯菌試管凝集試驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，凝集抗原的使用方法參照布魯菌試管凝集抗原使用說明書進(jìn)行:①抗原使用時(shí)做1∶20 稀釋，被檢測(cè)血清分別做1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100 、1∶200 稀釋，同時(shí)設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照，使用0.5%的苯酚生理鹽水對(duì)抗原和血清進(jìn)行稀釋。②在0.5 mL的試管中各加入抗原和血清，對(duì)所有的試管進(jìn)行充分震蕩，然后放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中，22 h～24 h時(shí)觀察結(jié)果。

1.2.6虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT) 吸取虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原滴在玻璃板上，再滴30 μL的小鼠血清與抗原均勻混合，4min內(nèi)觀察試驗(yàn)結(jié)果。

1.2.7布魯菌M5感染小鼠后各器官和血清NO測(cè)定由于NO半衰期很短，因此可用NO的代謝產(chǎn)物NO2-的濃度間接反映NO的含量(μmol/L)。取KNO2標(biāo)準(zhǔn)液(10μmol/L)，稀釋配制成2、3、5、10、20、50 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)系列，利用多功能酶標(biāo)儀在540 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)樣品的吸光度(OD值)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定結(jié)果求得回歸曲線，然后依次測(cè)定各時(shí)間段的樣品OD 540 nm值，代入回歸曲線求出NO含量，測(cè)定步驟嚴(yán)格按總一氧化氮檢測(cè)試劑盒說明說進(jìn)行。

1.2.8布魯菌M5 感染小鼠后的ADMA 測(cè)定各試劑在使用前平衡到室溫，試驗(yàn)開始前，提前配制好洗液，混勻時(shí)盡量避免起泡。分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步驟操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中加稀釋樣品液(稀釋倍數(shù)為10倍)，測(cè)定步驟嚴(yán)格按非對(duì)成型二甲基精氨酸ELESA試劑盒說明書進(jìn)行。利用多功能酶標(biāo)儀與450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的D值。測(cè)定應(yīng)在加終止液后30 min內(nèi)進(jìn)行。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD540nm值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定結(jié)果求得回歸曲線，然后依次測(cè)定各時(shí)間段的樣品OD 540 nm值，代入回歸曲線計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.2.9小鼠肝臟和脾臟的CFU 計(jì)數(shù)用布魯菌疫苗株M5侵染小鼠后，在3、7、14、28 d 時(shí)，每組隨機(jī)選取3只小鼠，斷頸處死小鼠，無菌條件下摘取肝臟和脾臟各0.1 g，放入2 mL的離心管中，加入1 mL的PBS 緩沖液，用高通量組織研磨儀充分碾碎勻漿，取組織勻漿液100 μL進(jìn)行10倍梯度稀釋，即101、102、103、104、105和1066個(gè)梯度，依次用移液器把稀釋液吹打混勻，吸取100 μL適當(dāng)稀釋度的稀釋液均勻涂布于布魯菌無抗性固體培養(yǎng)平板上，放入37 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)3 d～5 d ，并把每組試驗(yàn)平行重復(fù)3次，觀察并計(jì)算平板上的單個(gè)菌落數(shù)量，最后取平均數(shù)進(jìn)行CFU計(jì)數(shù)。

1.2.10數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式進(jìn)行表示，使用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1試管凝集試驗(yàn)結(jié)果

分別取侵染布魯菌M5后3、7、17、28 d時(shí)的小鼠血清，進(jìn)行試管凝集檢測(cè)。結(jié)果顯示，血清濃度在1∶12.5 和1∶25時(shí)效價(jià)較高，在1∶100時(shí)無凝集現(xiàn)象發(fā)生。結(jié)果見表1。

2.2虎紅平板凝集試驗(yàn)結(jié)果

采用虎紅平板凝集試驗(yàn)對(duì)3、7、17、28 d時(shí)的小鼠進(jìn)行初步檢測(cè)，結(jié)果顯示M5侵染小鼠第14天時(shí)和第28天有凝集現(xiàn)象。結(jié)果見表2。

表1試管凝集試驗(yàn)結(jié)果

Table 1The results of tube agglutination test

試驗(yàn)組Teatgroup免疫天數(shù)/dImmunedays1∶12.51∶251∶501∶1003----M57+---14+++-28+++--

注：“++++”，很強(qiáng)；“+++”，強(qiáng)；“++”，中等強(qiáng)度；“+”，弱；“-”，不凝集。

Note:"++++"，very strong；"+++"，strong；"++"，medium；"+"，weak；"-"，no agglutination.

表2　虎紅平板凝集試驗(yàn)結(jié)果

注：“++++”，很強(qiáng)；“+++”，強(qiáng)；“++”，中等強(qiáng)度；“+”，弱；“-”，不凝集。

Note:"++++"，very strong；"+++"，strong；"++"，medium；"+"，weak；"-"，no agglutination.

2.3NO 檢測(cè)結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)液稀釋度為0、2、5、10、20、50μmol/L時(shí)，于540 nm處測(cè)定各稀釋度的OD值。把用多功能酶標(biāo)儀測(cè)得的OD值設(shè)置為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液稀釋度設(shè)置為橫坐標(biāo)，繪制出NO測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，最終得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：y=0.001x-0.005，相關(guān)系數(shù)：R2=0.998 3。

圖1　 NO測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

首先利用多功能酶標(biāo)儀對(duì)3、7、14、28 d的小鼠血清、心、肝、脾、肺和腎組織的NO含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)侵染組和空白組對(duì)不同時(shí)期各組織和血清中的NO含量建立柱狀統(tǒng)計(jì)圖(圖2、圖3)分析，通過多重比較發(fā)現(xiàn)侵染組與空白對(duì)照組NO總含量差異不明顯，但血清中NO含量隨著侵染時(shí)間增加而下降，肝臟和脾臟中的NO含量趨勢(shì)與血清相反，呈上升趨勢(shì)。使用SPSS17.0 軟件進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，第14天和28天時(shí)空白對(duì)照組與侵染組差異極顯著(P<0.01)外，其余時(shí)間段差異不明顯(P>0.05)。

2.4ADMA 檢測(cè)結(jié)果

使用多功能酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的OD值，以檢測(cè)得到的標(biāo)準(zhǔn)品OD值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液稀釋度為橫坐標(biāo)，繪制出ADMA測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖4)，最終得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：y=-0.001 3x+1.666 9，R2=0.998 6。

利用多功能酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處對(duì)3、7、14、28 d的小鼠血清、心、肝、脾、肺和腎組織ADMA含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)侵染組和空白組對(duì)不同時(shí)期各組織和血清中的ADMA含量建立柱狀統(tǒng)計(jì)圖(圖5、圖6)分析，對(duì)侵染小鼠不同時(shí)期各組織中的ADMA含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)侵染組血清中ADMA 含量隨侵染時(shí)間出現(xiàn)上升趨勢(shì)，ADMA含量高于空白組，而在肝脾中的ADMA 含量則與血清中ADMA含量變化趨勢(shì)相反，呈下降趨勢(shì)。侵染組ADMA 的總含量略高于空白組ADMA含量。經(jīng)SPSS17.0分析，空白對(duì)照組與侵染組差異極顯著(P<0.01)。

2.5NO/ADMA 趨勢(shì)對(duì)比結(jié)果

對(duì)侵染小鼠不同時(shí)期3、7、14、28 d的血清(圖7)和肝臟(圖8)結(jié)果的變化趨勢(shì)進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)NO與ADMA的變化趨勢(shì)都是呈互相抑制的變化趨勢(shì)。結(jié)果表明，不管在血清中還是肝臟中，ADMA的含量的總趨勢(shì)都與NO含量變化趨勢(shì)相反。

2.6小鼠肝脾CFU 計(jì)數(shù)結(jié)果

利用CFU計(jì)數(shù)法觀察3、7、14、28 d時(shí)侵染小鼠的肝脾菌落數(shù)量，對(duì)其結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。3 d~14 d時(shí)，肝脾中布魯菌的數(shù)量在持續(xù)上升，但到28 d時(shí)卻出現(xiàn)下降(圖9)，表明在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)一定時(shí)間后NO對(duì)布魯菌有一定的抑制作用。

圖2　對(duì)照組小鼠各組織不同時(shí)期NO 含量

圖3　侵染組小鼠各組織不同時(shí)期NO 含量

圖4　 ADMA 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖5　對(duì)照組小鼠各組織不同時(shí)期ADMA 含量

圖6　 侵染組小鼠各組織不同時(shí)期ADMA 含量

圖7　侵染后小鼠中血清中NO/ADMA的變化趨勢(shì)

圖8　侵染后小鼠肝臟中NO/ADMA的變化趨勢(shì)

圖9　侵染后小鼠肝、脾的CFU 計(jì)數(shù)

3討論

NO在很多種生物中都起到效應(yīng)分子和調(diào)節(jié)者的功能，并且它也是神經(jīng)信使，NO 自由基能對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生刺激作用，并誘導(dǎo)被感染細(xì)胞發(fā)生炎癥和死亡，以抵抗外源性微生物的細(xì)胞毒性作用[6]。除此之外，它還能通過提高周邊非受損細(xì)胞的細(xì)胞毒性或炎癥，來加劇超敏反應(yīng)、膿毒癥或自身免疫的組織損害。因此，NO的含量在一定程度上能夠反映生物體健康狀況與抗病能力[7]。非對(duì)稱性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine，ADMA)是由蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(PRMT)催化含甲基化精氨酸殘基蛋白所生成的內(nèi)源性活性物質(zhì)，并且廣泛存在于各類細(xì)胞和組織中，有研究發(fā)現(xiàn)ADMA的含量水平對(duì)于糖尿病、慢性腎功能衰竭、代謝綜合征等疾病產(chǎn)生一定影響[8-9]。研究表明，ADMA能夠與NOS的底物左旋精氨酸(L-Arg)競(jìng)爭(zhēng)性的抑制NOS活性,能競(jìng)爭(zhēng)性抑制NOS活性，從而減少NO合成，是血管內(nèi)皮功能不全發(fā)生的重要機(jī)制之一[10-11]。但由于NO對(duì)機(jī)體既有保護(hù)，又具有細(xì)胞毒的雙重效應(yīng)，在臨床應(yīng)用上還有許多爭(zhēng)議[12]；另外關(guān)于ADMA在生物體內(nèi)的影響因素、機(jī)制等方面的研究還不多，還需要進(jìn)一步的探索。

本試驗(yàn)通過使用布魯菌疫苗株M5侵染小鼠，對(duì)小鼠血清及不同組織中的NO 和ADMA 含量進(jìn)行檢測(cè)，比較不同時(shí)間和不同組織內(nèi)NO 和ADMA 含量的的差異，探討NO 和ADMA 在此過程中所起的作用，以及NO 與ADMA 之間的在時(shí)間和空間上的響應(yīng)關(guān)系。并進(jìn)行CFU 計(jì)數(shù)觀察，為進(jìn)一步研究其引起吞噬細(xì)胞免疫應(yīng)答的開始和布病預(yù)防尋求新途徑提供一定依據(jù)和理論支持。

用布魯菌M5侵染小鼠后,分別在侵染的不同時(shí)期檢測(cè)了血清和各組織NO的含量，但是結(jié)果表明侵染后侵染組與空白對(duì)照組相比NO總量上相差并不大，但血清中NO的含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，可能是血管為降低病變而抑制其含量升高。而肝脾中NO含量變化與血清相反，隨時(shí)間呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，而其他各組織NO含量波動(dòng)不明顯，與肝脾這2個(gè)器官是機(jī)體主要的免疫器官有關(guān)。NO的釋放量在14 d和28 d 時(shí)升高，但兩者含量差異并不明顯，表明生物體有控制自身NO含量的機(jī)制，以免體內(nèi)NO含量過高，對(duì)機(jī)體造成損害。對(duì)侵染小鼠不同時(shí)期各組織中的ADMA含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)侵染組血清中ADMA 含量隨侵染時(shí)間呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且含量高于空白組，而在肝脾中的ADMA含量則與血清中ADMA含量變化趨勢(shì)相反。侵染組ADMA的總含量略高于空白組ADMA 的總含量。無論在血清中還是組織中ADMA 含量隨侵染時(shí)間變化的總趨勢(shì)與NO含量隨侵染時(shí)間變化的總趨勢(shì)相反，表明NO與ADMA呈相互抑制作用。CFU計(jì)數(shù)結(jié)果表明，布魯菌在28 d 時(shí)數(shù)量下降，表明宿主感染后期殘余的布魯菌通過激活自身基因，可抵抗NO 的負(fù)面影響或利用亞硝酸鹽作為其氮源，布魯菌的分裂繁殖和機(jī)體NO的含量存在一定的關(guān)系。Chan J等[13]研究表明，活化巨噬細(xì)胞釋放出的NO 可有效抑制或殺滅結(jié)核桿菌，且NO可作為細(xì)胞毒性分子活化巨噬細(xì)胞,巨噬細(xì)胞抑制結(jié)核桿菌的能力與其釋放NO的量成正相關(guān)[14-15]，也說明了布魯菌的分裂繁殖和機(jī)體NO的含量存在一定的關(guān)系。

綜上所述，本研究探討了NO、ADMA與布魯菌病之間的關(guān)系，通過布魯菌M5侵染小鼠的方式，研究了NO和ADMA在布魯菌侵染小鼠不同時(shí)間和不同器官的含量變化情況，以及在同一時(shí)期布魯菌在數(shù)量上的變化趨勢(shì)，為今后布魯菌病預(yù)防和控制上尋求新的方向和途徑。

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Response Characteristics of Nitric Oxide/Asymmetry Dimethyl Arginine in Process ofBrucellaInfection in Mice

HU Meng-wei,XU Wan-yun,LIU Peng-tao,YAN Guo,WANG Wen-lun,GAO Jian-feng

(CollegeofLifeScience,ShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang,832003,Chnia)

Abstract:This experiment was aimed to study the role of nitric oxide (NO) in the process of Brucella infection in mice, as well as the interaction between NO and asymmetric dimethyl-arginine (ADMA) in this process. Brucella vaccine strain M5 was used to infect mice, firstly the red plate agglutination (RBPT) and tube agglutination test (SAT) were carried out using the sera of mice. The contents of NO and ADMA in different tissues and sera between control group and infection group were detected by Griess reagent method and ELISA method. At the same time, the CFU counts of mice's liver and spleen were observed in each infection period. The results showed that positive reaction were detected in 14 d by RBPT and SAT experiments after using Brucella M5 infection mice. Total NO contents changed little between infection groups and blank control groups. But the contents of NO in the infection group decreased with time, the contents of NO in liver and spleen increased with time, the concents of NO in other tissues were not fluctuated obviously. While the trend of ADMA contents was contrary to the NO contents. Results of CFU counts showed that the number of Brucella in the liver and spleen rose before 14d, and fell at 28 d. It suggested that there is a certain relationship between the proliferation of Brucella and the NO contents.

Key words:Brucella vaccine strain M5;nitric oxide; asymmetry dimethylarginine

文章編號(hào):1007-5038(2016)02-0050-07

中圖分類號(hào):S852.614

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

作者簡(jiǎn)介：胡夢(mèng)薇(1991-)，女，新疆烏魯木齊人，碩士研究生，主要從事引進(jìn)與雜交畜禽品種生物學(xué)特征研究。 *通訊作者

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(2010-CB530200)

收稿日期：2015-08-09