王明達(dá)陳若虹黃佳斯李晶王玲李慧劉茵茵杜文涵申婷呂星(.長沙市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科,長沙40000;.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院檢驗(yàn)科,長沙40000)

?

血液細(xì)菌感染對血清(1,3)-β-D-葡聚糖檢測結(jié)果的影響

王明達(dá)1陳若虹2黃佳斯1李晶1王玲2李慧2劉茵茵2杜文涵2申婷2呂星2
(1.長沙市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科,長沙410000;2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院檢驗(yàn)科,長沙410000)

【摘要】目的 探討血液細(xì)菌感染對血清(1,3)-β-D-葡聚糖檢測結(jié)果的影響。方法 排除影響G試驗(yàn)結(jié)果的干擾因素后,選取符合入組條件的血培養(yǎng)細(xì)菌陽性及血培養(yǎng)陰性患者各40例,采集血清進(jìn)行G試驗(yàn)檢測。結(jié)果 40例血培養(yǎng)細(xì)菌陽性標(biāo)本中革蘭陽性菌22例,革蘭陰性菌18例,其中只有1例大腸埃希菌的G試驗(yàn)結(jié)果為陽性,4例在灰區(qū),其余為陰性。40例血培養(yǎng)陰性標(biāo)本3例G試驗(yàn)結(jié)果在灰區(qū),其余為陰性。血培養(yǎng)細(xì)菌陽性組與血培養(yǎng)陰性組G試驗(yàn)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 血液細(xì)菌感染對G試驗(yàn)檢測干擾較小。

【關(guān)鍵詞】(1,3)-β-D-葡聚糖;菌血癥;交叉反應(yīng)

[Chin J Mycol,2016,11(1):24-27]

近年來,由于廣譜抗菌藥、激素、抗腫瘤化療藥物、免疫抑制劑以及留置導(dǎo)管時(shí)間延長和器官移植的廣泛開展使用,導(dǎo)致臨床上機(jī)會性真菌感染(opportunistic fungal infection)的發(fā)病率和死亡率逐年上升[1-2],血清(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(G試驗(yàn))適用于除隱球菌和接合菌(毛霉菌)外的所有深部真菌感染的早期診斷,國內(nèi)、外多個(gè)深部真菌診斷指南均將G試驗(yàn)納入其中,其診斷的敏感性達(dá)到97%,陰性預(yù)測值為78%～100%[3]。是目前國內(nèi)、外用于檢測深部真菌感染最常用的非侵襲性血清學(xué)方法[4]。

G試驗(yàn)結(jié)果容易受到多重因素的影響,從而造成假陽性或假陰性,國內(nèi)、外有研究證明,某些陽性球菌以及糞產(chǎn)堿桿菌,土壤桿菌、銅綠假單胞菌等均可以產(chǎn)生(1,3)-β-D-葡聚糖的類似物,如果人體血液內(nèi)感染以上細(xì)菌,有可能在G試驗(yàn)的檢測過程中產(chǎn)生交叉反應(yīng),出現(xiàn)假陽性[5-6]。但是目前國內(nèi)、外的研究在菌血癥是否會影響G實(shí)驗(yàn)結(jié)果的問題上意見不統(tǒng)一,甚至出現(xiàn)相反的結(jié)果。為了探討血液細(xì)菌感染是否對血清(1,3)-β-D-葡聚糖檢測結(jié)果產(chǎn)生影響,本文收集了40例血培養(yǎng)細(xì)菌陽性和40例血培養(yǎng)陰性患者的血清進(jìn)行G試驗(yàn),同時(shí)收集患者相關(guān)病例資料進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 資料

入選標(biāo)準(zhǔn) 收集2014年8月～2015年3月期間在中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院住院血培養(yǎng)細(xì)菌陽性和血培養(yǎng)陰性患者的血清作G試驗(yàn)檢測,血培養(yǎng)與G試驗(yàn)檢測的時(shí)間間隔在1周之內(nèi),患者1個(gè)月內(nèi)沒有進(jìn)行系統(tǒng)的抗真菌藥物的治療。

排除標(biāo)準(zhǔn) ①正在使用纖維素膜進(jìn)行血液透析及血液濾過。②標(biāo)本接觸過紗布或其他含有葡聚糖的材料。③使用多糖類抗癌藥物。④G試驗(yàn)前注射過某些中藥注射劑,如黃芪多糖注射液、雙黃連注射液、生脈注射液等藥物。⑤靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品。

一般資料 共收集血培養(yǎng)細(xì)菌陽性患者標(biāo)本40例,其中男性22例,女性18例,年齡14～92歲,平均年齡59.3歲;血培養(yǎng)陰性患者標(biāo)本40例,其中男性23例,女性17例,年齡28～91歲,平均年齡55.7歲;兩組性別、年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 儀器與試劑

廣東湛江安度斯生物有限公司生產(chǎn)的ATI-320LKM動態(tài)試管儀(32孔),真菌(1,3)-β-D-葡聚糖檢測試劑盒,TAL-80 E型試管恒溫儀,美國BD公司BACTEC 9120全自動細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng),美國BD公司BACTEC FX全自動細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng),美國BD公司厭氧及需氧培養(yǎng)瓶,美國BD公司Phoenix 100全自動微生物分析系統(tǒng),美國BD公司革蘭陽性細(xì)菌鑒定/藥敏板。

1.3 方法

血培養(yǎng) 血培養(yǎng)瓶經(jīng)血培養(yǎng)儀孵育后,若儀器陽性報(bào)警,取出培養(yǎng)瓶后應(yīng)立即用無菌注射器抽取瓶內(nèi)培養(yǎng)液作直接涂片革蘭染色,鏡檢,同時(shí)轉(zhuǎn)種血瓊脂平板、麥康凱平板和巧克力平板,置35℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h。革蘭陽性菌、革蘭陰性菌和真菌分別選用相應(yīng)板條進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)。

G實(shí)驗(yàn)檢測 取富含血小板的血漿100μL,加到樣品稀釋瓶中,混勻,75℃,加熱10 min;取β-G試劑復(fù)溶液1支,取0.25 m L加入β-G試劑中,輕輕搖勻,先取已制備好的樣品供試溶液100μL加入反應(yīng)試管中,然后加入50μL試劑溶液,每個(gè)樣品供試溶液平行兩管;然后把各試管逐一插到LKM動態(tài)試管儀中,反應(yīng)開始,37℃反應(yīng)75 min。依據(jù)廠家推薦及文獻(xiàn)報(bào)道,G實(shí)驗(yàn)的cutoff值為151.5 pg/m L,100.5～151.5 pg/m L為灰區(qū),≤100. 5 pg/m L為陰性,＞151.5 pg/m L為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,因?yàn)镚試驗(yàn)結(jié)果不符合正態(tài)分布,使用中位數(shù)(第1四分位數(shù),第3四分位數(shù))形式表示,組間比較使用Mann-Whitney U Test進(jìn)行分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血培養(yǎng)細(xì)菌陽性菌種分布及G試驗(yàn)結(jié)果

如表1～3所示,本研究收集40例血培養(yǎng)細(xì)菌陽性標(biāo)本中,革蘭陽性菌22例,占到總數(shù)的55. 0%,包括9種革蘭陽性菌,除1例金黃色葡萄球菌及1例屎腸球菌的G試驗(yàn)結(jié)果在灰區(qū)外,其他均為陰性。革蘭陰性菌18例,占到總數(shù)的45%,包括7種不同的革蘭陰性菌,其中1例大腸埃希菌G試驗(yàn)結(jié)果為陽性,另外還有1例大腸埃希菌及1例肺炎克雷伯菌結(jié)果在灰區(qū),其他G試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。40例血培養(yǎng)陰性標(biāo)本3例G試驗(yàn)結(jié)果在灰區(qū),其他均為陰性。

表1 血培養(yǎng)G試驗(yàn)結(jié)果分布情況Tab.1 The distributions of G test results in blood culture

2.2 血培養(yǎng)細(xì)菌陽性G試驗(yàn)結(jié)果與血培養(yǎng)陰性G試驗(yàn)結(jié)果比較

血培養(yǎng)細(xì)菌陽性組的G試驗(yàn)結(jié)果與血培養(yǎng)陰性組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),革蘭陽性細(xì)菌組及革蘭陰性細(xì)菌組的G試驗(yàn)結(jié)果分別與血培養(yǎng)陰性組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0. 05),革蘭陽性細(xì)菌組G試驗(yàn)結(jié)果與革蘭陰性細(xì)菌組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表4。

表2 革蘭陽性菌分布情況Tab.2 Gram positive bacteria distributions

表3 革蘭陰性菌分布情況Tab.3 Gram negative bacteria distributions

表4 血培養(yǎng)G試驗(yàn)結(jié)果比較Tab.4 Comparison of G test results in blood culture

3 討 論

G試驗(yàn)在檢測過程易受到多種因素的干擾,從而影響其準(zhǔn)確性,目前文獻(xiàn)報(bào)道的可引起其假陽性結(jié)果的因素主要有:①使用纖維素膜進(jìn)行血透,標(biāo)本或患者暴露于紗布或其他含有葡聚糖的材料。②靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品。③操作者處理標(biāo)本時(shí)存在污染。④靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品。另外,使用多糖類抗癌藥物、放化療造成的黏膜損傷導(dǎo)致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌經(jīng)胃腸道進(jìn)入血液等也可能造成假陽性[7-8]。

有研究顯示,某些陽性球菌以及糞產(chǎn)堿桿菌、土壤桿菌、銅綠假單胞菌等細(xì)菌均含有(1,3)-β-D-葡聚糖及其類似物,因此人體感染這些細(xì)菌有可能會干擾G試驗(yàn)的檢查結(jié)果。國內(nèi)、外在這方面做了許多研究,Albert等[9]收集了39例菌血癥患者的血培養(yǎng)及G試驗(yàn)結(jié)果,在排除相關(guān)感染因素的影響后,其中有16例出現(xiàn)了假陽性,39例中有22例革蘭陰性菌,出現(xiàn)了13例假陽性,主要是大腸埃希菌和銅綠假單胞菌。17例革蘭陽性菌中出現(xiàn)了3例假陽性。主要是金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌。國內(nèi)曹敏華等[10]也做了相關(guān)的研究,其使用北京金山川公司的試劑盒,收集了40例菌血癥患者的G試驗(yàn)結(jié)果,出現(xiàn)了12例假陽性。主要有金黃色葡萄球菌及大腸埃希菌等。但是Desjardins 等[11]收集了21例菌血癥患者的G試驗(yàn)結(jié)果分析之后卻發(fā)現(xiàn),21例都是陰性,沒有出現(xiàn)假陽性。以上研究均沒有收集血培養(yǎng)陰性患者的G試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對照。

本研究中40例血培養(yǎng)陰性患者的G試驗(yàn)結(jié)果除3例在灰區(qū)外,其他均為陰性,血培養(yǎng)陽性G試驗(yàn)結(jié)果與Albert和曹敏華等的研究一樣,7例大腸埃希菌中也出現(xiàn)1例陽性,1例在灰區(qū)。說明大腸埃希菌可能對G試驗(yàn)結(jié)果還是有一定的影響,值得我們臨床判斷時(shí)注意,但是本研究中的1例銅綠假單胞菌為陰性,可能是標(biāo)本太少的緣故。另外本研究中革蘭染色陽性組中的金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌均沒有陽性結(jié)果,與以上結(jié)果不一致。我們統(tǒng)計(jì)以后發(fā)現(xiàn),血培養(yǎng)陽性組與血培養(yǎng)陰性組的G試驗(yàn)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。革蘭陽性組及革蘭陰性組與血培養(yǎng)陰性組比較也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說明從整體上看,血液細(xì)菌感染對G試驗(yàn)檢測干擾較小。

本研究與其他研究有較大差異,我們推測可能的原因有以下幾點(diǎn):第一,不同的研究選擇的試劑盒不一樣,目前市場上G試驗(yàn)沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)品及cut-off值,不同廠家試劑的靈敏度、特異度及判斷標(biāo)準(zhǔn)存在差異。第二,本研究沒有針對特定的菌種進(jìn)行收集標(biāo)本,比如大腸埃希菌只有7 例,銅綠假單胞菌只有1例,金黃色葡萄球菌只有4例,標(biāo)本量較少也有可能影響結(jié)果。第三,本次入選的菌血癥培養(yǎng)有多種葡萄球菌,此種血培養(yǎng)結(jié)果一般為采血過程中污染導(dǎo)致,并不一定是患者感染了該種菌。

綜上所述,通過本次研究發(fā)現(xiàn)菌血癥對G試驗(yàn)檢測干擾較小。但是由于本次研究存在一定的局限性,有待于進(jìn)一步收集更多的標(biāo)本分析,所以我們在實(shí)際使用過程中,需要結(jié)合患者的臨床資料、影像學(xué)檢查結(jié)果及另一種真菌檢測試驗(yàn)——半乳甘露聚糖(GM試驗(yàn))的結(jié)果進(jìn)行綜合分析,提高機(jī)會性真菌感染診斷的準(zhǔn)確性,以防誤診漏診的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

[1]馮文莉,楊靜,奚志琴,等.3年間醫(yī)院內(nèi)侵襲性真菌感染的病原菌分布及臨床分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2008,18 (7):1030-1032.

[2]Lortholary O,Gangneux JP,Sitbon K,et al.Epidemiological trends in invasive aspergillosis in France:the SAIF network (2005-2007)[J].Clin Microbiol Infect,2011,17(12):1882-1889.

[3]Karageorgopoulos DE,Vouloumanou EK,Ntziora F,et al.β-D-glucan assay for the diagnosis of invasive fungal infection: a meta-analysis[J].Clin Infect Dis,2011,52(6):750-770.

[4]鄭罡,余進(jìn),李雪迎,等.(1,3)-β-D-葡聚糖檢測和半乳甘露聚糖抗原檢測在侵襲性真菌病診斷中的價(jià)值探討[J].中國真菌學(xué)雜志,2012,7(3):132-135.

[5]Mennink-Kersten MA,Ruegebrink D,Verweij PE.Pseudomonas aeruginosa as a cause of 1,3-β-d-glucan assay reactivity[J].Clin Infect Dis,2008,46(12):1930-1931.

[6]McIntosh M,Stone BA,Stanisich VA.Curdlan and other bacterial(1--＞3)-beta-D-glucans[J].Appl Microbiol Biotechnol,2005,68(2):163-173.

[7]Kanamori H,Kanemitsu K,Miyasaka T,et al.Measurement of(1-3)-beta-D-glucan derived from different gauze types [J].Tohoku J Exp Med,2009,217(2):117-121.

[8]Racil Z,Kocmanova I,Lengerova M,et al.Difficulties in using 1,3-{beta}-D-glucan as the screening test for the early diagnosis of invasive fungal infections in patients with haematological malignancies-high frequency of false-positive results and their analysis[J].J Med Microbiol,2010,59(9):1016-1022.

[9]Albert O,Toubas D,Strady C,et al.Reactivity of(1→3)-β-dglucan assay in bacterial bloodstream infections[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2011,30(11):1453-1460.

[10]曹敏華.菌血癥患者血漿(1,3)-β-D-葡聚糖檢測意義探討[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(22):2802-2803.

[11]Desjardins A,Parize P,Angebault C,et al.Lack of 1-3-B-D-glucan detection in adults with bacteraemia[J].Med Mycol, 2015,53(4):405-408.

[本文編輯]施 慧

The effect of blood bacterial infection on the serum(1,3)-β-D-beta result

WANG Ming-da1,CHEN Ruo-hong2,HUANG Jia-si1,LI Jing1,WANG Ling2,LI Hui2,LIU Yin-yin2,DU Wen-han2,SHEN Ting2,LV Xing2
(1.Department of Clinical Laboratory,The Third Hospital of Changsha,Changsha 410000,China;2.Department of Clinical Laboratory,The Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha 410000,China)

【Abstract】Objective To evaluate the influences of bacterial infections on the(1,3)-β-D-glucan detection.Method Serums of forty patients with identification of positive blood culture and forty patients with identification of negative blood culture,after controlling disturbance,were detected by G tests.Results Among 22 patients with Gram positive bactereamia and 18 patients with Gram negative bactereamia,only one patient identified as Escherichia coli infection was positive for G test,while four patients were G test suspicious and the rest were negative.Among 40 patients with negative blood culture,three patients were known as G test suspicious while the rest were negative.There is no statistic significance of G test results between specimens with blood culture positive and negative(P＞0.05).Conclusion Bacterial infections have minor influences on G test detection in this study.

【Key words】(1,3)-β-D-glucan;bacteraemia;cross reactivity

[收稿日期]2015-09-08

通訊作者:呂星,E-mail:feibo6@126.com

作者簡介:王明達(dá),男(漢族),本科,主任技師.E-mail:251037792@ qq.com

【中圖分類號】R 446.5

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1673-3827(2016)11-0024-04