余 意 繆松濤 覃 朗 孫 軍 （江蘇省南京市浦口區(qū)農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 211800）

用速測(cè)儀測(cè)定蔬菜農(nóng)藥殘留的操作程序及注意事項(xiàng)

余 意 繆松濤 覃 朗 孫 軍 （江蘇省南京市浦口區(qū)農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 211800）

農(nóng)殘速測(cè)儀操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快、成本低，適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)及大批樣品的篩選檢測(cè)。為促進(jìn)農(nóng)殘速測(cè)儀在蔬菜上的推廣應(yīng)用，介紹了使用農(nóng)殘速測(cè)儀檢測(cè)蔬菜中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)原理、操作程序及注意事項(xiàng)，以供參考。

農(nóng)殘速測(cè)儀；蔬菜；檢測(cè)原理；操作程序；注意事項(xiàng)

1 農(nóng)殘速測(cè)儀的檢測(cè)原理

農(nóng)殘速測(cè)儀采用酶抑制法，在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制乙酰膽堿酯酶的活性，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)。在正常情況下，酶催化代謝產(chǎn)物水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在410 nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過抑制率的大小可判斷樣品中是否存在高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。但該方法只能檢測(cè)出農(nóng)殘超標(biāo)與否，不能準(zhǔn)確定量地檢測(cè)出某種農(nóng)藥超標(biāo)。

2 農(nóng)殘速測(cè)儀的操作程序

2.1 儀器準(zhǔn)備工作

接通電源，儀器自檢，自檢結(jié)束后待機(jī)預(yù)熱10 min，儀器工作穩(wěn)定后進(jìn)行測(cè)量。玻璃器皿晾干后待用。5.0 mL、10 mL和200 uL量程移液器調(diào)好量程待用。

2.2 試劑準(zhǔn)備

2.2.1 緩沖液配置

2.2.2 酶液配置

用5.0 mL移液器吸3.1 mL緩沖液注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0-5 ℃環(huán)境中備用。

2.2.3 顯色劑配置

用10 mL移液器分兩次共吸10.5 mL緩沖液注入顯色劑瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0-5 ℃環(huán)境中備用。

2.2.4 底 物

用5.0 mL移液器吸3.1 mL蒸餾水注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0-5 ℃環(huán)境中備用。2.3 樣品處理制備

取干凈的蔬菜，用天平準(zhǔn)確稱取2 g，葉菜取葉尖部分，果菜橫截削下一片，葉片、瓜肉等剪成1 cm2，置于50 mL小燒杯內(nèi)；用10 mL量程移液器吸10 mL緩沖液注入小燒杯中，振蕩提取1-2 min，倒出提取液，靜置3-5 min，取上層清液作為樣液。若樣液渾濁或色素重，可用中速濾紙過濾到三角瓶中再吸取。

2.4 對(duì)照測(cè)定方法

向比色皿中加3 mL緩沖液，再用專用的移液槍向比色皿中分別加入100μL酶液和100μL顯色劑，搖勻后于37 ℃水浴鍋放置15 min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致），再向其中加入100μL底物搖勻，然后迅速放入儀器通道，蓋上暗板，點(diǎn)擊對(duì)照檢測(cè)鍵。待空白對(duì)照值的吸光度變化值在0.3以上，才可測(cè)定樣品，否則要重新做空白測(cè)定。測(cè)量結(jié)束后儀器自動(dòng)保存當(dāng)前的對(duì)照值，下一次測(cè)量樣品時(shí)就可以不用繼續(xù)進(jìn)行對(duì)照測(cè)量。

圖15中不同z處投影寬度的中點(diǎn)位置，代表了刀具的軸線位置。因此，通過比較加工狀態(tài)下刀具軸線位置偏離空載條件下的程度，便可以推測(cè)刀具所受徑向力的大小。圖16為直徑1mm雙刃平頭銑刀在不同徑向載荷下?lián)隙任灰频膶?shí)驗(yàn)結(jié)果。只要事先通過這樣的標(biāo)定，便可以根據(jù)實(shí)際加工過程中刀具的投影圖像推測(cè)出徑向切削力大小。

2.5 樣品測(cè)定方法

用5.0 mL量程移液器移取樣液3 mL放入比色皿中，其他操作與對(duì)照測(cè)試相同，將比色皿迅速放入通道后，點(diǎn)擊樣品檢測(cè)鍵。測(cè)試結(jié)束后，顯示當(dāng)前測(cè)量的樣品抑制率結(jié)果和吸光度變化值。

2.6 檢測(cè)結(jié)果的判定

測(cè)定結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。根據(jù)GB/ T5009.199-2003判定要求，當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí)，表示蔬菜中存在高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥，樣品為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需重復(fù)檢測(cè)2次以上。對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其他方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。

3 農(nóng)殘速測(cè)儀檢測(cè)時(shí)的注意事項(xiàng)

3.1 關(guān)于器材和試劑

（1）所有玻璃器皿，均要晾干后待用。（2）移液槍要定期校正調(diào)試、科學(xué)使用。槍嘴要先用清水沖洗再用純凈水沖洗，在電子天平上進(jìn)行吸液量校正。移液器使用時(shí)，必須遵循器具專用原則，即吸取酶、顯色劑、底物的移液器應(yīng)貼上專用標(biāo)簽，移取試劑時(shí)一一對(duì)應(yīng)使用。（3）試劑從冰箱取出，先恢復(fù)至室溫，搖勻后再使用。檢測(cè)室溫度要控制在20-25 ℃，否則會(huì)影響酶的活性。試劑使用時(shí)，必須遵循只出不進(jìn)原則，即從酶、顯色劑、底物試劑瓶中移取出的試劑，不得返回原試劑瓶中，以免污染原試劑。

3.2 關(guān)于樣液制備

在樣液制備過程中，浸提時(shí)間要充分，否則對(duì)結(jié)果影響較大。樣液加入酶試劑和顯色劑的混合液水浴鍋靜置反應(yīng)時(shí)間應(yīng)在15 min以上，反應(yīng)時(shí)間不同，結(jié)果不同。酶、顯色劑和底物不能漏加或多加，否則對(duì)結(jié)果影響較大。

3.3 關(guān)于檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果抑制率A%為“——”時(shí)，表示測(cè)量結(jié)果無(wú)效，可能由以下原因造成：（1）試劑從冰箱取出后，未恢復(fù)到室溫即進(jìn)行對(duì)照測(cè)試。（2）對(duì)照測(cè)試時(shí)間與樣品測(cè)試時(shí)間相隔太久，導(dǎo)致光照與樣品測(cè)試溫度等外界條件相差較大。（3）被測(cè)樣品色素干擾較嚴(yán)重。（4）反應(yīng)試劑取用量不準(zhǔn)確。

3.4 關(guān)于某些特殊樣品

在韭菜、芹菜、生姜、蔥、蒜、蘿卜、香菜等蔬菜中含有破壞酶活性的物質(zhì)，檢測(cè)此類蔬菜農(nóng)殘時(shí)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，因此，在處理這類樣品時(shí)，宜采取整株（體）浸提的方法，避免次生物質(zhì)干擾。

2015-08-28