關 靈，鄭銳年，吳少敏，林順歡，李仲均，吳依芬，廖玉婷，江麗華，趙燕海

（廣東省東莞市人民醫(yī)院，廣東 東莞 523000）

宮頸癌患者外周血E RCC1基因多態(tài)性對順鉑新輔助化療療效的影響

關 靈，鄭銳年，吳少敏，林順歡，李仲均，吳依芬，廖玉婷，江麗華，趙燕海

（廣東省東莞市人民醫(yī)院，廣東 東莞 523000）

目的 探討宮頸癌患者外周血核苷酸切除修復交叉互補1（ERCC1）基因多態(tài)性對順鉑新輔助化學治療（簡稱化療）療效的影響。方法 選擇2010年3月至2014年6月醫(yī)院收治的宮頸癌患者80例，根據(jù)外周血ERCC1基因表達的不同分為CC組和TT組，各40例。兩組患者均給予紫杉醇聯(lián)合順鉑化療，21 d為1個周期，共治療6個周期。治療結束時比較兩組患者的近期療效、中位生存期、中位進展時間、2年生存率，記錄不良反應的發(fā)生情況。結果 治療后，TT組近期療效52．50%，CC組近期療效為67．50%，CC組顯著優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）；CC組患者的中位進展時間、中位生存期以及2年生存率均顯著高于TT組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。治療后，兩組患者血清中CYFRA21－1及SCC－Ag表達均較治療前有所下降，且CC組下降程度優(yōu)于TT組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。兩組患者各方面不良反應發(fā)生率結果均無顯著性差異（P＞0．05）。結論 ERCC1 C19007T表達為C／C型的患者相比較表達為T／T型的患者臨床療效更好，其中位進展時間、中位生存期均較長，2年生存率較高，化療后血清中特異腫瘤標志物的表達可顯著降低，且不良反應發(fā)生率相當。

核苷酸切除修復交叉互補1；C19007T；基因多態(tài)性；宮頸癌；臨床療效

宮頸癌為女性常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，占所有女性腫瘤的15%左右[1]。發(fā)展中國家宮頸癌發(fā)病率高于發(fā)達國家，超過85%的宮頸癌發(fā)生在發(fā)展中國家[2]。我國每年新發(fā)宮頸癌病例14萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例的28．8%，嚴重威脅了婦女的身體健康[3]。多數(shù)宮頸癌發(fā)現(xiàn)時已處于晚期，單純手術或放射治療不易控制，需結合新輔助化學治療（簡稱化療）控制腫瘤增長，鉑類藥物是宮頸癌化療藥物中最有效、最基礎的藥物之一，而鉑類藥物的化療敏感性可能影響患者的預后。核苷酸切除修復交叉互補1（ERCC1）基因是核苷酸切除修復交叉互補（ERCC）基因家族一員，其正常表達可維持該修復酶功能。ERCC1的多態(tài)性可能影響ERCC1蛋白的表達、穩(wěn)定性以及活性，由于ERCC1基因存在不同的多態(tài)性，其DNA的核苷酸切除修復能力也不同，從而表現(xiàn)為對鉑類藥物的敏感性不同[4]。筆者觀察了我院就診的宮頸癌患者給予順鉑聯(lián)合紫杉醇化療時患者外周血ERCC1表達與臨床療效間的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料

納入標準[5]：經(jīng)宮頸活檢病理確診為宮頸癌，經(jīng)外周血檢測ERCC1基因C19007T表達為C／C型或T／T型，按照2009年國際婦產(chǎn)聯(lián)盟（FIGO）宮頸癌術前臨床分期為Ⅱ～Ⅳ期；至少存在1個可測量病灶；評估患者生存期≥3個月；體力狀況（ECOG）評分為0～2分；入院前未行任何針對宮頸癌的有關治療；既往無化療史或化療結束超過3個月；無化療禁忌。

排除標準：非原發(fā)宮頸癌；合并嚴重心、腎、造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)疾病；精神異常依從性較差；對本組治療藥物過敏。

病例選擇：本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準。選取2010年3月至2014年6月我院收治的宮頸癌患者80例，所有患者根據(jù)外周血ERCC1基因C19007T表達的類型分為CC組和TT組，各40例。兩組患者年齡、臨床分期、ECOG評分、病程等一般資料相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05），具有可比性。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較（n＝40）

1．2 方法

1．2．1 化療

兩組患者均在第1天給予紫杉醇注射液（海南中化聯(lián)合制藥工業(yè)有限公司，國藥準字H20058367，規(guī)格每支5 mL∶30 mg）150 mg／m2，順鉑注射液（江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，國藥準字 H20040813，規(guī)格每支6 mL∶30 mg）75 mg／m2，用藥前12 h，6 h口服醋酸地塞米松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，國藥準字H33020822，規(guī)格為每片0．75 mg），治療前30 min給予鹽酸苯海拉明注射液（廣州白云山明興制藥股份有限公司，國藥準字H44022387，規(guī)格每支1 mL∶20 mg）預處理，21 d為1個周期，共化療6個周期。

1．2．2 檢測方法

在化療前后，抽取所有患者外周血 2 mL，用TIANamp Blood血液基因組DNA提取試劑盒（天根生化科技＜北京＞有限公司）按說明書提基因組DNA。

PCR擴增 ：采用Primer 5．0軟件設計引物設計引物，C19007T：5－GAGAGGGCTGAGCTGGAGACAG－3′，5－CCAGCACATAGTCGGGAATTACGTC－3′。

PCR反應體系：50 μL總體系中包含基因組DNA 2 μL，上下游引物各1 μL，dNTP（0．2 mmol／L）Mixture 8 μL，0×LA PCR BufferⅡ(Mg2＋Plus)5 μL，TaKaRa LA Taq(5 U／μL)0．5 μL。

反應程序：94℃預變性3 min，94℃變性1 min，在一定退火溫度下退火1 min，72℃延伸1 min，35個循環(huán)，72℃再延伸5 min。

PCR產(chǎn)物測序：PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察并拍照，200 bp出現(xiàn)亮帶后測序。測序結果用DNASTAR軟件包中的Seqman進行序列分析，用其中的MegAlign進行與標準序列的比對，查找突變位點。

1．3 觀察指標和臨床療效評價標準[6]

近期療效：按RECIST實體瘤客觀療效評價標準對患者進行評價，完全緩解（CR）指靶病灶消失，無新病灶出現(xiàn)且腫瘤標志物正常持續(xù)4周及以上；部分緩解（PR）指靶病灶最大徑之和減少≥30%，至少4周；穩(wěn)定（SD）指靶病灶最大徑之和縮小未達PR或者增大未達PD；進展（PD）指靶病灶最大徑之和至少增加≥20%，且其絕對值增加至少5 mm，出現(xiàn)新病灶也視為PD。兩組患者均于化療結束之后評定近期療效?？傆行剩剑ㄍ耆徑饫龜?shù)＋部分緩解例數(shù)）／總例數(shù)×100%。

觀察兩組患者的中位進展時間（從治療開始到50%患者腫瘤無法控制，開始進展的時間）、中位生存期（藥物治療過程中，50%的患者能存活的時間）以及2年生存率。

觀察兩組患者治療前后血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達的變化。

治療期間密切觀察患者不良反應，定期檢查血尿常規(guī)、肝腎功能，記錄不良反應的發(fā)生情況。

1．4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17．0版軟件包進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標準差（s）表示，行 t檢驗；計數(shù)資料以百分比表示，行 χ2檢驗。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 近期療效

結果見表2。TT組近期療效52．50%，CC組近期療效為67．50%，CC組顯著優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。

表2 兩組患者近期療效比較[例（%），n＝40]

2．2 中位進展時間、中位生存期及2年生存率

治療后，CC組患者的中位進展時間、中位生存期以及2年生存率均顯著高于TT組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。見表3。

表3 兩組患者中位進展時間、中位生存期以及2年生存率比較（s，n＝40）

表3 兩組患者中位進展時間、中位生存期以及2年生存率比較（s，n＝40）

組別TT組CC組中位進展時間（月）11．10±1．09 16．80±1．24中位生存期（月）17．10±1．45 20．93±1．62 2年生存率（%）42．19±2．18 47．62±2．20

2．3 血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達

治療前，兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達無明顯差異（P＞0．05），治療后均較治療前有所下降，且CC組下降程度優(yōu)于TT組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。見表4。

表4 兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達的變化（s，mg／L，n＝40）

表4 兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達的變化（s，mg／L，n＝40）

注：與同組治療前相比，＃P＜0．05；與 TT組治療后比較，P＜0．05。

組別CYFRA21－1 SCC－Ag TT組CC組治療前7．01±1．21 7．06±1．29治療后3．92±0．45＃2．34±0．50＃治療前5．72±1．03 5．83±1．09治療后3．70±0．87＃2．33±0．50＃

2．4 藥品不良反應

見表5。主要不良反應為胃腸道反應、骨髓抑制、肝腎功能異常、脫發(fā)、肌肉關節(jié)疼痛，兩組患者在不良反應發(fā)生率各方面進行比較均無顯著性差異（P＞0．05）。

表5 兩組患者不良反應發(fā)生情況比較[例（%），n＝40]

3 討論

鉑類藥物進入腫瘤細胞后，水解形成雙氯雙氨鉑，與細胞的DNA形成鉑－DNA加合物，DNA加合物能引起基因突變和細胞轉化，從而影響細胞DNA的復制與轉錄，最終導致DNA損傷[7]。而機體對鉑類藥物的耐受受多因素影響，包括藥物蓄積、藥物失活、DNA損害耐受等。其中機體的損傷修復系統(tǒng)可以修復DNA損傷[8]，從而影響鉑類藥物的化療敏感性，因此機體DNA損傷修復能力的差異是決定鉑類藥物化療效果的重要因素。核苷酸切除修復(NER)是人類最主要及最重要的DNA損傷修復途徑，切除ERCC1是涉及其中的最主要基因，它可以識別DNA損傷部位，并與色素性干皮病相關蛋白F(XPF)結合形成復合物切開受損DNA的5c末端，從而參與核苷酸切除修復[9]。此外，ERCC1還參與其他DNA修復途徑，如同源末端連接修復、雙鏈斷裂修復等。所有腫瘤細胞中均有ERCC1的表達，而ERCC1表達的高低以其基因多態(tài)性在這一過程中起著重要作用，也是引起鉑類藥物耐藥的重要原因。

不同基因型的ERCC1在腫瘤細胞中表達程度及頻次均不同，從而影響腫瘤細胞對鉑類藥物的敏感性，ERCC1 C19007T多態(tài)性表達為密碼子AAC變成AAT，其中T等位基因的存在影響mRNA的穩(wěn)定性。有研究認為ERCC1－118與化療反應顯著相關[10]，其中C／C， C／T對鉑類的化療反應較 T／T更好。研究報道，ERCC1C19007A多態(tài)的TT基因型或含T等位基因的單倍型可顯著增加食管癌、乳腺癌、基底細胞癌、肺癌等惡性腫瘤的發(fā)生風險及臨床療效。

本研究針對ERCC1 C19007T表達為C／C型及T／T型的患者臨床效果進行觀察。結果顯示，治療后TT組近期療效52．50%，顯著低于CC組的67．50%（P＜0．05）；CC組患者的中位進展時間、中位生存期以及2年生存率均顯著高于TT組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。CYFRA21－1為宮頸癌具有很高價值的血清標記物，SCC－Ag升高與宮頸深肌層浸潤和盆腔淋巴相關，治療后，兩組患者血清中CYFRA21－1和SCC－Ag表達均較治療前下降，且CC組下降程度優(yōu)于TT組，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。兩組患者不良反應發(fā)生率無顯著性差異（P＞0．05）。

綜上所述，ERCC1 C19007T表達為C／C型的患者相比較表達為T／T型的患者臨床療效更好，其中位進展時間、中位生存期均較長，2年生存率較高，化療后血清中特異腫瘤標志物的表達可顯著降低，不良反應發(fā)生率相當。

參考文獻：

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[2]宋麗雪，許 茜，丁媛媛，等．UGT1A1和ERCC1基因多態(tài)性對伊立替康聯(lián)合順鉑治療復發(fā)性卵巢癌的相關性研究[J]．北京醫(yī)學，2014(7):530－533．

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[6]齊冰麗，李 琰，王 娜，等．ERCC1基因多態(tài)性與卵巢上皮性癌患者鉑類藥物化療敏感性及預后的關系[J]．中華婦產(chǎn)科雜志，2013，48(11):847－852．

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[10]周偉華，鄧覲云．ERCC1及其基因多態(tài)性與鉑類耐藥的相關性[J]．江西醫(yī)藥，2009，44(2):179－182．

Influence of Peripheral Blood ERCC1 Gere Polymorphism on Patients with Cervical Cancer Undergoing Neoadjuvant Cisplatin Chemotherapy

Guan Ling,Zheng Ruinian,Wu Shaomin,Lin Shunhuan,Li Zhongjun,Wu Yifen,Liao Yuting,Jiang Lihua,Zhao Yanhai
(Dongguan People′s Hospital,Dongguan,Guangdong,China 523000)

Objective To investigate the influence of peripheral blood ERCC1 gene polymorphism on patients with cervical cancer undergoing neoadjuvant cisplatin chemotherapy．M ethods 80 cases with cervical cancer from March 2010 to June 2014 were divided into CC group and TT group according to the ERCC1 gene expression of the peripheral blood,40 cases in each group．The two groups were given paclitaxel combined with cisplatin chemotherapy,21 d for 1 course,altogether 6 courses．At the end of the treatment,the shortterm efficacy of the two groups were compared,and the median survival,the median time to progression,the two years survival rate were compared between the two groups,and the occurrence of adverse reactions was recorded．Results After treatment,the short－term efficacy of the TT group was 52．50%,the short－term efficacy of CC group was 67．50%,CC group was significantly better than that in control group(P＜0．05);the median progression,median survival and 2－year survival rate were significantly higher than those in TT group(P＜0．05)．After treatment,serum CYFRA21－1,SCC－Ag expressions in the two groups were decreased,and the level of CC was significantly higher than that of TT group,the difference was statistically significant(P＜0．05)．The incidence of adverse reactions in two groups were observed,and the results showed no significant difference(P＞0．05)．Conclusion The clinical efficacy of C19007T ERCC1 in patients with C／C was better than that of patients with T／T．The median time to progression,median survival and two years survival were higher．The expression of specific tumor markers in serum was significantly lower,and the incidence rate of adverse reactions was similar．

ERCC1;C19007T;gene polymorphism;cervical cancer;clinical efficacy

R979．1；Q786

A

1006－4931(2016)09－0015－04

關靈（1969－），女，大學本科，副主任藥師，研究方向為藥物臨床試驗，（電子信箱）813008501＠qq．com。

2015－09－10)

廣東省東莞市科技計劃醫(yī)療衛(wèi)生類科研一般項目，項目編號：2015105101180。