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螺旋藻激酶對人臍靜脈內(nèi)皮細胞抗氧化能力的影響

陳萌，龐輝，王慧杰，陳相宜

(廣西醫(yī)科大學(xué)生理教研室，廣西 南寧530021)

Effect of spirulina kinase on HUVEC induced by peroxide

CHEN Meng, PANG Hui, WANG Hui-jie, CHEN Xiang-yi

(DeptofPhysiology，GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China)

中國圖書分類號：R322.123；R329.24；R345.57；R349.1；R977.3

關(guān)鍵詞：螺旋藻激酶;人臍靜脈內(nèi)皮細胞;氧化損傷;丙二醛;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽過氧化物酶

Key words:spirulina kinase; human umbilical vein endothelial cells; oxidative damage; MDA;SOD;GSH-PX

內(nèi)皮細胞損傷是動脈粥樣硬化發(fā)生的起始步驟，氧化應(yīng)激則被認為是血管內(nèi)皮損傷最重要的致病因子之一[1-2]。研制抗氧化內(nèi)皮細胞保護劑已成為國內(nèi)外研究的熱點。我們前期的研究證明螺旋藻激酶(SPK)具有抗凝溶栓、保護細胞的能力[3]。本研究建立臍靜脈內(nèi)皮細胞氧化損傷模型，探討螺旋藻激酶的抗氧化能力和保護細胞的作用。

1材料與方法

1.1材料螺旋藻激酶[2](廣西北海康福公司)；人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC304，ScienCell，USA)；RPMI 1640培養(yǎng)基和胎牛血清(Gibco,USA)；Trypsin 1 ∶250 胰蛋白酶(Amerco,USA)；維生素E(Sigma，USA)；蛋白質(zhì)定量、MTT、MDA、SOD和GSH-PX試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2細胞準備復(fù)蘇凍存的HUVECs，37℃、5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞生長到80%，用胰蛋白酶消化傳代，選擇生長良好的第3~5代用于實驗。

1.3實驗分組分為對照組、損傷組、陽性組、SPK低、中、高劑量組。對照組不做藥物處理，陽性和SPK組加入所需藥物(10 mg·L-1VitE、1 g·L-1SPK、2 g·L-1SPK、3 g·L-1SPK)預(yù)孵育12 h，隨后除對照組外，各組中加入終濃度為2 mmol·L-1的H2O2損傷細胞4 h。

1.4MTT法檢測SPK對HUVEC活性的影響用SPK溶液預(yù)孵育細胞12 h，沖洗后每孔加入MTT溶液20 μL，37℃培養(yǎng)4 h，吸干孔內(nèi)液后，加入DMSO 150 μL，用酶標儀于波長490nm處測定各組吸光度(OD值)，各孔OD值=該孔實測 OD490值 -空白孔OD值，OD值大小與細胞活力正相關(guān)。

1.5各項實驗指標測定各組細胞處理結(jié)束后，吸取細胞上清液，超聲破裂法獲得細胞裂解液，按照試劑盒說明書步驟檢測細胞培養(yǎng)液中SOD、GSH-PX含量，及細胞內(nèi)MDA的含量。

2結(jié)果

2.1SPK對HUVEC活力的影響SPK以0.5 g·L-1逐步遞增，SPK為0的對照為(0.894±0.094)；從1 g·L-1開始細胞活力明顯增加(0.924±0.038)，當(dāng)濃度為4 g·L-1達最大(0.969±0.092)(P<0.05)。

2.2SPK對MDA含量、SOD和GSH-PX活性的影響對照組MDA含量為(0.44±0.11)μmol·L-1，SOD、GSH-PX活性分別為(34.20±2.41) kU·L-1和(28.19 ± 0.84) kU·L-1。與對照組相比，損傷組MDA含量上升了97.73%，SOD和GSH-PH活性下降了73.95%和62.72%(P<0.05)。與損傷組比較，SPK低劑量組GSH-PX的活性上升了56.52%(P<0.05)；SPK中劑量組MDA含量下降了49.43%，SOD和GSH-PX的活性上升了73.18%和94.39%(P<0.05)；SPK高劑量組MDA含量下降了60.92%，SOD和GSH-PX的活性上升了148.37%和120.36%(P<0.05)，且高劑量組結(jié)果與陽性組相似。

3討論

氧化應(yīng)激的產(chǎn)生是由于活性氧(ROS)的過度積累，H2O2是最常見的ROS之一。細胞過氧化損傷形成的丙二醛(MDA)可導(dǎo)致細胞膜的通透性發(fā)生改變，引起細胞損傷。與此同時，機體自身具有多種防御機制以清除ROS，其中包括SOD和GSH-PX。SOD通過歧化作用清除氧自由基生成H2O2，GSH-PX則在還原型谷胱甘肽的作用下催化H2O2分解成H2O，二者共同維持機體的氧化與抗氧化的平衡[4-5]。實驗顯示，螺旋藻激酶可降低人臍靜脈內(nèi)皮細胞MDA，提高SOD和 GSH-PX，表明其有抗細胞氧化應(yīng)激，保護細胞的作用。

(致謝：本實驗在實驗生理科學(xué)中心完成，感謝中心老師和技術(shù)員給予的支持與幫助！)

參考文獻:

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文獻標志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)02-0293-02

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.02.028

作者簡介：陳萌(1988-), 女，碩士，研究方向：海洋藥物應(yīng)用,Tel：0771- 5358074,E-mail:864927759@qq.com;龐輝(1962-)，女，碩士，教授，研究方向：海洋藥物應(yīng)用，通訊作者，Tel:0771-5358074,E-mail: 454720524@qq.com

基金項目:廣西壯族自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項目(No 2013GXNSFAA019176)；廣西科技攻關(guān)與新產(chǎn)品試制項目(No 0992025-22)

收稿日期:2015-11-17,修回日期:2015-12-26

網(wǎng)絡(luò)出版時間：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160125.1557.056.html

網(wǎng)絡(luò)出版地址：2016-1-25 15:57

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