花慧蓮，黃　超

(1.泰州市人民醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 泰州　225300；2.南通大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)系，江蘇 南通　226001)

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熱休克蛋白70激動劑SW02對脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細胞iNOS表達的調(diào)控及機制

花慧蓮1，黃超2

(1.泰州市人民醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 泰州225300；2.南通大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)系，江蘇 南通226001)

中國圖書分類號：R329.24；R341；R345.44；R364.5；R916.3；R977.3；R977.6

摘要:目的觀察熱休克蛋白70(Hsp70)激動劑SW02對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的RAW264.7細胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達及一氧化氮(NO)生成的作用，并探討其作用機制。方法采用LPS誘導(dǎo)RAW264.7細胞建立細胞炎癥模型，將細胞隨機分為DMSO組、DMSO+LPS(1 mg·L-1)組、SW02組和SW02+LPS(1 mg·L-1)組。Western blot法測定蛋白表達；Griess試劑法測定NO含量；實時定量PCR法測定iNOS mRNA表達；染色質(zhì)免疫共沉淀法(ChIP)檢測核因子κB(NF-κB)與iNOS啟動子結(jié)合能力變化。結(jié)果SW02明顯抑制由LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞iNOS蛋白、mRNA表達和NO釋放(SW02+LPS組iNOS表達量和NO生成量明顯低于DMSO+LPS組，P<0.01或P<0.05)；SW02不影響由LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞κB-α抑制子(IκB-α)降解(SW02+LPS組IκB-α表達量與DMSO+LPS組比差異無顯著性，P>0.05)和NF-κB入核(SW02+LPS組細胞質(zhì)、細胞核NF-κB表達量與DMSO+LPS組比差異無顯著性，P>0.05)；SW02明顯抑制由LPS誘導(dǎo)的NF-κB與iNOS啟動子結(jié)合(SW02+LPS組NF-κB與iNOS啟動子結(jié)合量明顯低于DMSO+LPS組，P<0.05)。結(jié)論SW02抑制巨噬細胞iNOS表達和NO生成，其機制可能與抑制NF-κB與iNOS啟動子結(jié)合有關(guān)。

關(guān)鍵詞:SW02；熱休克蛋白70；脂多糖；誘導(dǎo)型一氧化氮合酶；RAW264.7細胞；核因子κB；κB-α抑制子

一氧化氮(NO)是細胞中參與神經(jīng)和心血管信號傳導(dǎo)的重要分子[1-3]，但是在炎癥病變中，過量NO能損傷機體功能，例如，研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)積累過量的NO能損壞線粒體功能并誘導(dǎo)細胞凋亡[4-5]；在嚴重敗血癥中，高濃度NO會導(dǎo)致細胞損傷和永久性低血壓[6]。因此，控制體內(nèi)NO含量對避免NO毒性作用的出現(xiàn)具有重要意義。NO在體內(nèi)主要由一氧化氮合酶(NOS)合成，包括誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、神經(jīng)元一氧化氮合酶(nNOS)和內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)[7]。其中，iNOS在刺激因子如脂多糖(LPS)的作用下表達明顯增加[8]。LPS與細胞表面TLR4受體結(jié)合后，引起IKK激活；激活的IKK使IκB磷酸化并降解，最終導(dǎo)致NF-κB入核，并與iNOS啟動子結(jié)合，促進iNOS基因轉(zhuǎn)錄[9]。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白70(Hsp70)C末端底物結(jié)合活性抑制劑2-phenylethynesulfonamide(pifithrin-μ)能明顯抑制由LPS引起的巨噬細胞和小膠質(zhì)細胞iNOS等炎癥因子表達[10-11]，基于此，我們推測激動Hsp70對巨噬細胞iNOS表達也可能有調(diào)控作用，但具體是什么樣的作用，還不得而知。本研究對這一問題作了包括分子機制在內(nèi)的詳細探討，有望進一步闡明Hsp70在炎癥調(diào)控中的作用，同時也有助于Hsp70激動劑多樣化藥理學(xué)作用的評價。

1材料與方法

1.1試劑SW02、LPS、DMSO、TRIzol提取試劑盒購自美國Sigma公司。iNOS、IκB-α、NF-κB、GAPDH抗體購自美國Cell Signaling公司。兔抗大鼠熒光二抗購自O(shè)dyssey公司。DMEM 培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司。Griess Reagent試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒等購自美國Invitrogen公司。DNA提取試劑盒購自Tiangen公司。胎牛血清購自美國Gibco公司。細胞核/質(zhì)分離試劑盒、MTT、BCA蛋白濃度測定試劑盒、青-鏈霉素等購自江蘇海門碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2方法

1.2.1細胞培養(yǎng)和實驗分組RAW264.7小鼠巨噬細胞源自美國ATCC。細胞培養(yǎng)基為DMEM/F12+10%胎牛血清+1×105IU·L-1青霉素G+100 mg·L-1鏈霉素，每隔1~2 d換液1次，生長環(huán)境為37℃含95%空氣和5% CO2的細胞培養(yǎng)箱。細胞分為DMSO預(yù)處理組、DMSO+LPS處理組、SW02預(yù)處理組、SW02+LPS處理組。濃度依賴實驗中，SW02分別是1、5、10 μmol·L-1，預(yù)處理時間為30 min，LPS工作濃度1 mg·L-1。

1.2.2MTT法檢測細胞活力巨噬細胞生長至可傳代的密度后，平均接種到96孔板中，每孔體積約200 μL。在用相應(yīng)藥物處理過的孔中加入MTT溶液20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。棄去每孔中上清，再每孔加入150 μL DMSO，震蕩10 min使結(jié)晶充分溶解。在波長為490 nm酶標(biāo)儀上讀數(shù)。

1.2.3Western blot用冷PBS收集細胞，3 000×g室溫離心3~5 min，隨后去除上清，加入RIPA裂解液(50 mmol·L-1Tris-HCl，pH 7.4，1 mmol·L-1EDTA，100 mmol·L-1NaCl，20 mmol·L-1NaF，3 mmol·L-1Na3VO4，1 mmol·L-1PMSF，1% NP-40，protease inhibitor cocktail)，冰上裂解30 min。裂解完成后12 000×g4℃離心15 min，將上清液轉(zhuǎn)至新管，取適量蛋白液進行濃度測定，其余根據(jù)濃度計算配比等質(zhì)量樣品。95℃ 5 min蛋白變性。150 V電泳1 h后轉(zhuǎn)膜。取膜，并在5%脫脂牛奶中室溫封閉1 h，TBST洗3次，加入一抗4℃過夜。d 2去除一抗，TBST洗3次，加入1%脫脂牛奶稀釋的熒光二抗，室溫下孵育2 h，TBST洗3次。最后用Odyssey CLx Western blot檢測系統(tǒng)進行條帶顯影檢測。

1.2.4NO測定根據(jù)Griess Reagent試劑盒說明書，將20 μL Griess試劑、150 μL各實驗組細胞培養(yǎng)液和130 μL去離子水混合于96孔板中，以20 μL Griess試劑加280 μL去離子水作為空白對照。室溫下放置30 min，用分光光度儀測量各組混合液的吸光度(波長548 nm)并校正曲線。

1.2.5細胞核、質(zhì)分離PBS洗1遍，用細胞刮子刮下細胞。離心收集細胞，吸盡上清。每20 μL沉淀加入200 μL添加了PMSF的細胞質(zhì)蛋白抽提試劑A。劇烈振蕩5 s，把細胞沉淀完全懸浮并分散開。冰浴15 min，加入細胞質(zhì)蛋白抽提試劑B 10 μL，劇烈振蕩5 s，冰浴1 min，隨后再劇烈振蕩5 s，4℃ 12 000×g離心5 min。立即吸取上清至一預(yù)冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞質(zhì)蛋白。對于沉淀，完全吸盡殘余的上清，加入50 μL添加了PMSF的細胞核蛋白抽提試劑，劇烈振蕩20 s，把細胞沉淀完全懸浮并分散開，然后放回冰浴中，每隔2 min劇烈振蕩20 s，共30 min。4℃ 12 000×g離心10 min，立即吸取上清至一預(yù)冷塑料管中，作為抽提得到的細胞核蛋白，再用Western blot法檢測SW02處理前后細胞核、細胞質(zhì)NF-κB表達情況。

1.2.6實時定量PCR檢測細胞iNOS mRNA表達：總RNA按照TRIzol抽提試劑說明書進行。一定比例稀釋后加樣測定所提取的RNA濃度，使得260/280值在1.8~2.0之間。測量得到濃度后，按照最低濃度水平用無RNA酶水稀釋其它樣品。取10 μL做凝膠電泳，其余置-80℃冷凍保存。PCR反應(yīng)體系條件如下：預(yù)變性94℃ 30 s，變性94℃ 30 s，退火60℃ 30 s，延伸72℃ 1 min，25個循環(huán)，最后延伸72℃ 7 min。結(jié)束后，反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳(95 V，30 min)鑒定，用凝膠成像儀進行灰度掃描分析。引物序列如下：iNOS(557 bp)上游：5′-CCATGTCAAAACCCGTGGTGAATG-3′，下游：5′-A TGGGAGTTGGGCAGTCATCAG-3′；GAPDH(107 bp)上游：5′-TAAAGAACAGGCTCTTAGCACA-3′，下游：5′-AGTCTTGGAAATGGATTGTCTC-3′。

1.2.7染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)ChIP實驗方法主要參考我們已經(jīng)發(fā)表的研究論文[12]，簡述如下：用1%甲醛(福爾馬林)室溫孵育細胞10 min，加甘氨酸至終濃度0.125 mol·L-1，室溫下放置5 min終止交聯(lián)。用冷PBS洗2次，收集細胞于離心管中，4℃ 3 500×g離心6 min。去上清，加入低張溶液重懸，冰上裂解10 min，隨后冰上勻漿25~30次，4℃ 3 500×g離心5 min。取上清，去除沉淀，將取出的上清繼續(xù)離心：4 ℃，12 000×g離心5 min。剩下的沉淀為細胞核，將其溶解在40 μL裂解液中裂解10 min。經(jīng)超聲處理后，取ChIP稀釋液稀釋后的樣品20 μL，加入NF-κB抗體(1 ∶200)，4℃搖床過夜。d 2取珠子，用ChIP稀釋液清洗珠子2次，每次2 min。棄上清，加ChIP稀釋液，室溫搖勻2 h。隨后用高鹽和低鹽溶液清洗，并加入稀釋緩沖液簡單混勻，室溫孵育15 min。12 000×g離心3 min，小心取出上清，將其轉(zhuǎn)入另一管。65℃，過夜交聯(lián)，隨后加入10 μL 0.5 mol·L-1EDTA、20 μL 1 mol·L-1Tris-HCl和2 μL 10 g·L-1Proteinase K到上述液體中，45℃孵育1 h。最后提取DNA，用上游引物5′-C AAGCCAGGGTATGTGGTTT-3′和下游引物5′-GCAG CAGCCATCAGGTATTT-3′(290 bp)檢測NF-κB。

2結(jié)果

2.1SW02抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞iNOS蛋白表達RAW264.7細胞經(jīng)1 mg·L-1LPS處理24 h后，iNOS蛋白被明顯誘導(dǎo)出來(Fig 1)。不同濃度SW02(1、5、10 μmol·L-1)預(yù)處理30 min后，iNOS誘導(dǎo)被明顯抑制(P<0.01或P<0.05)。結(jié)果提示，SW02能抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞iNOS蛋白表達，并呈劑量依賴方式，濃度越高，抑制效應(yīng)越明顯，在10 μmol·L-1時效果最佳(Fig 1)。

Fig 1　SW02 inhibited LPS-induced iNOS protein expression

A: The dose-dependent effect of SW02 on iNOS protein expression in LPS-treated cells; B:The quantitative analysis of iNOS protein expression in cells upon SW02 and/or LPS treatment.1：Control；2：SW02(10 μmol·L-1)；3：DMSO+LPS;4：LPS+SW02(1 μmol·L-1)；5：LPS+SW02(5 μmol·L-1)；6：LPS+SW02(10 μmol·L-1).**P<0.01vsDMSO+LPS group

2.2SW02和(或)LPS不影響細胞活力為了判斷iNOS蛋白減少是否與SW02和(或)LPS引起細胞減少有關(guān)，我們檢測了各給藥組細胞活力，發(fā)現(xiàn)10 μmol·L-1SW02處理和各濃度SW02(1、5、10 μmol·L-1)、LPS共處理均不影響細胞活力(P>0.05)，提示SW02處理后iNOS蛋白表達減少與細胞損傷無關(guān)(Fig 2)。

2.3SW02抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞NO生成對照組細胞用1 mg·L-1LPS處理24 h后，NO生成量明顯增加(P<0.01)(Fig 3)；SW02組細胞根據(jù)劑量依賴實驗選取合適濃度的SW02(10 μmol·L-1)預(yù)處理30 min，隨后用1 mg·L-1LPS處理24 h，發(fā)現(xiàn)SW02+LPS組細胞NO生成量與SW02組比差異無顯著性(P>0.05)，但明顯低于DMSO+LPS組(P<0.01)(Fig 3)。結(jié)果提示SW02能抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞NO生成。

Fig 2　SW02 and/or LPS did not affect cell viability(n=5)

1：Control；2：SW02(10 μmol·L-1)；3：DMSO+LPS；4：LPS+SW02(1 μmol·L-1)；5：LPS+SW02(5 μmol·L-1)；6：LPS+SW02(10 μmol·L-1).

Fig 3　SW02 inhibited LPS-induced NO production

1：Control；2：DMSO+LPS；3：SW02(10 μmol·L-1)；4：LPS+SW02(10 μmol·L-1).##P<0.01vscontrol;**P<0.01vsLPS alone-treated group.

2.4SW02抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞iNOS mRNA表達對照組細胞用1 mg·L-1LPS處理4 h后，iNOS mRNA表達量明顯增加(P<0.01)(Fig 4)；SW02組細胞用10 μmol·L-1SW02預(yù)處理30 min，隨后用1 mg· L-1LPS處理4 h，發(fā)現(xiàn)SW02+LPS組細胞iNOS mRNA表達量與SW02組比差異無顯著性(P>0.05)，但明顯低于DMSO+LPS組(P<0.05)(Fig 4)。結(jié)果提示SW02能抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞iNOS mRNA表達。

Fig 4　SW02 inhibited LPS-induced iNOS mRNA expression

1：Control；2：LPS；3：SW02(10 μmol·L-1)；4：LPS+SW02(10 μmol·L-1).##P<0.01vscontrol；*P<0.05vsLPS alone-treated group.

2.5SW02不影響LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞IκB-α降解和NF-κB核轉(zhuǎn)位對照組細胞用1 mg·L-1LPS處理30 min后，IκB-α表達量明顯減少(P<0.05)(Fig 5A，B)；SW02組細胞用10 μmol·L-1SW02預(yù)處理30 min，隨后用1 mg·L-1LPS處理30 min，發(fā)現(xiàn)SW02+LPS組細胞IκB-α表達量明顯低于SW02組(P<0.01)，但與DMSO+LPS組比差異無顯著性(P>0.05)(Fig 5A，B)，提示SW02并不影響LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞IκB-α降解。對照組細胞用1 mg·L-1LPS處理30 min后，DMSO+LPS組細胞質(zhì)NF-κB表達量明顯低于對照組(P<0.05，F(xiàn)ig 5C，D)，而細胞核NF-κB表達量明顯高于對照組(P<0.01，F(xiàn)ig 5C，E)；在SW02存在的情況下，由LPS刺激引起的NF-κB出入核情況沒有受到明顯影響(SW02+LPS組細胞質(zhì)、細胞核NF-κB表達量與SW02組比差異有顯著性，P<0.05；與DMSO+LPS組比差異無顯著性，P>0.05，F(xiàn)ig 5C-E)，提示SW02并不影響LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞NF-κB核轉(zhuǎn)位。

2.6SW02抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞NF-κB與iNOS啟動子的結(jié)合首先用10 μmol·L-1SW02預(yù)處理細胞30 min，隨后1 mg·L-1LPS處理1 h，發(fā)現(xiàn)SW02+LPS組細胞NF-κB與iNOS啟動子結(jié)合量明顯低于DMSO+LPS組(P<0.01)(Fig 6)。結(jié)果提示SW02能抑制NF-κB與iNOS啟動子的直接結(jié)合。

3討論

NO作為一種具有生物活性的氣體分子，在大量生成的情況下與炎癥密切相關(guān)[4-5]。NO生成量主要取決于一氧化氮合成酶的多少與活性。在體內(nèi)，NOS可分為誘生型(iNOS)、神經(jīng)型(nNOS)和內(nèi)皮型(eNOS)3種[7]。在活化的巨噬細胞中，iNOS活性與表達量直接決定著NO生成量。因此，研究iNOS表達調(diào)控機制也就顯得十分重要。在本實驗中，我們選擇研究Hsp70激動劑SW02在LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞iNOS表達和NO生成中的作用及信號機制。這一研究主要是建立在我們前期發(fā)現(xiàn)Hsp70選擇性抑制劑2-phenylethynesulfonamide明顯抑制巨噬細胞和小膠質(zhì)細胞iNOS表達基礎(chǔ)上的[10-11]，在國內(nèi)外尚未見文獻報道。

Fig 5　SW02 did not affect LPS induced-degradation of IκB-α and nuclear translocation of NF-κB in RAW264.7 cells(n=3)

A:The effect of SW02 on LPS induced-degradation of IκB-α in RAW264.7 cells;B:The quantitative analysis of IκB-α protein levels in cells upon SW02 and/or LPS treatment; C:The effect of SW02 on LPS induced-nuclear translocation of NF-κB in RAW264.7 cells; D:The quantitative analysis of cytoplasmic NF-κB protein levels in cells upon SW02 and/or LPS treatment; E:The quantitative analysis of nuclear NF-κB protein levels in cells upon SW02 and/or LPS treatment.#P<0.05,##P<0.01vscontrol；*P<0.05,**P<0.01vsSW02 group. 1：Control；2：DMSO+LPS；3：SW02(10 μmol·L-1)；4：LPS+SW02(10 μmol·L-1).

Fig 6　SW02 inhibited LPS-induced binding of NF-κB to

1：DMSO+LPS；2：LPS+SW02(10 μmol·L-1).**P<0.01vsDMSO+LPS group.

SW02是一種Hsp70特異性激動劑，能通過激動Hsp70 N末端ATP酶活性抑制Aβ聚集[13]，將來有可能作為一種潛在的抗神經(jīng)退行性疾病藥物進行開發(fā)。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)SW02能抑制由LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞iNOS蛋白表達，且這種作用主要由iNOS mRNA減少引起。SW02抑制巨噬細胞iNOS蛋白表達這一事實體現(xiàn)了SW02在iNOS誘導(dǎo)調(diào)控中的重要性，為今后研究SW02調(diào)控iNOS/NO介導(dǎo)的相關(guān)疾病，如血管麻痹綜合征、感染性休克等提供了參考依據(jù)。此外，由于免疫系統(tǒng)iNOS/NO在阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[14-15]，本研究為我們今后了解SW02的多樣化作用及分子機制提供了理論參考。然而，SW02抑制巨噬細胞iNOS表達是否通過激動Hsp70 N末端ATP酶來實現(xiàn)，還不得而知。如果后續(xù)實驗證明是通過激動Hsp70 N末端ATP酶發(fā)揮作用，那么這將豐富我們對Hsp70調(diào)控炎癥反應(yīng)的理解，因為我們已經(jīng)證明Hsp70 C末端底物結(jié)合活性抑制劑能抑制巨噬細胞和小膠質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)[10-11]。當(dāng)然，也有可能存在脫靶的可能性，也就是說SW02通過不依賴于Hsp70 N末端ATP酶的方式發(fā)揮iNOS調(diào)控作用，這些猜測有待進一步研究。

細胞基因轉(zhuǎn)錄受抑往往是由阻斷轉(zhuǎn)錄因子活化過程中一個或多個信號分子引起的[9-10]。在LPS刺激的炎癥細胞中，SW02并不影響由LPS引起的IκB-α降解和NF-κB細胞核轉(zhuǎn)位，表明SW02可能是通過干擾NF-κB核轉(zhuǎn)位下游信號實現(xiàn)iNOS表達調(diào)控的。與預(yù)期相一致的是，在ChIP實驗中，我們發(fā)現(xiàn)SW02能明顯抑制由LPS誘導(dǎo)的NF-κB與iNOS DNA啟動子之間的結(jié)合。概括來說，SW02調(diào)控iNOS表達的關(guān)鍵環(huán)節(jié)在基因轉(zhuǎn)錄起始階段，這一結(jié)論合理解釋了如下現(xiàn)象，即為什么SW02處理的細胞中IκB-α-NF-κB信號通路沒有受到任何影響，而iNOS基因轉(zhuǎn)錄最終卻是減弱的。

綜上所述，我們的研究結(jié)果顯示，SW02能明顯抑制由LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞iNOS表達，這一過程與IκB-α-NF-κB信號通路無關(guān)，主要是通過抑制NF-κB與iNOS基因啟動子區(qū)結(jié)合來實現(xiàn)的，這些發(fā)現(xiàn)為深入研究和開發(fā)與Hsp70相關(guān)的免疫炎癥調(diào)控分子奠定了基礎(chǔ)。這部分內(nèi)容是我們關(guān)于Hsp70調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)系列工作的延伸，國內(nèi)外尚未見報道，其中更為深入的分子生物學(xué)機制，還需要做大量工作。

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Effects of heat shock protein 70 activator SW02 on lipopolysaccharide-induced expression of inducible nitric oxide synthase in macrophages

HUA Hui-lian1，HUANG Chao2

(1.DeptofPharmacy，TaizhouPeople’sHospital，TaizhouJiangsu225300，China； 2.DeptofPharmacology，SchoolofPharmacy，NantongUniversity，NantongJiangsu226001，China)

Abstract:AimTo observe the effects of heat shock protein 70(Hsp70)activator SW02 on lipopolysaccharide(LPS)-induced expression of inducible nitric oxide synthase(iNOS)and LPS-induced production of nitric oxide(NO)in macrophages.MethodsRAW264.7 cells were stimulated by LPS，and were divided into DMSO，DMSO+LPS(1 mg·L-1)，SW02，and SW02+LPS(1 mg·L-1) groups.The protein expression was detected by Western blot.NO concentration was measured by Griess kit.The iNOS mRNA was detected by real-time PCR.The NF-κB binding to iNOS promoters was measured by chromatin immunoprecipitation(ChIP)assays.ResultsSW02 significantly blocked the protein and mRNA expression of iNOS as well as the production of NO in LPS-stimulated RAW264.7 cells(P<0.01 or P<0.05，SW02+LPS group vs DMSO+LPS group).SW02 did not affect the LPS-induced degradation of IκB-α(P>0.05，SW02+LPS group vs DMSO+LPS group)and nuclear translocation of NF-κB(P>0.05，SW02+LPS group vs DMSO+LPS group).However，SW02 reduced the NF-κB binding to iNOS promoters inside the cell(P<0.05，SW02+LPS group vs DMSO+LPS group).ConclusionThese results show that SW02 prevents iNOS expression and NO induction likely through attenuation of the NF-κB binding to iNOS promoters in macrophages.

Key words：SW02；Hsp70；LPS；iNOS；RAW264.7 cells；NF-κB；IκB-α

文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)02-0279-06

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.02.025

作者簡介：花慧蓮(1978-)，女，副主任藥師,研究方向：心腦血管藥物藥理學(xué)，E-mail：rmyyhhl@sina.com；黃超(1981-)，男，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師,研究方向：免疫炎癥調(diào)控機制與新藥研發(fā)，通訊作者，E-mail：asicampa@aliyun.com

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目(No 81102428)；江蘇省自然科學(xué)基金面上項目(No BK20141240)

收稿日期:2015-12-09,修回日期:2016-01-07

網(wǎng)絡(luò)出版時間：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160125.1557.050.html

網(wǎng)絡(luò)出版地址：2016-1-25 15:57