成　靜，廖長(zhǎng)青，劉　維（湘潭市公安局刑事科學(xué)技術(shù)研究所，湖南湘潭411100）

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EZ-tape在皮膚接觸性檢材DNA檢驗(yàn)中的應(yīng)用

成靜，廖長(zhǎng)青，劉維
（湘潭市公安局刑事科學(xué)技術(shù)研究所，湖南湘潭411100）

關(guān)鍵詞：法醫(yī)遺傳學(xué)；DNA；皮膚；接觸性；EZ-tape

學(xué)研究；E-mail：cmulcq@163.com

接觸性檢材在法醫(yī)DNA檢驗(yàn)中所占比例日益增大，其中皮膚接觸性檢材的檢驗(yàn)更是其中的熱點(diǎn)與難點(diǎn)之一。本研究使用EZ-tape脫落細(xì)胞粘取器轉(zhuǎn)移皮膚接觸性檢材脫落細(xì)胞，獲得了良好的效果，現(xiàn)總結(jié)如下。

1材料與方法

本實(shí)驗(yàn)室日常檢案中受理的皮膚接觸性檢材共164份，其中工具手柄類(lèi)15份，手印痕跡類(lèi)72份，繩索類(lèi)9份，面罩帽子類(lèi)9份，衣物類(lèi)18份，手套19份，鞋襪類(lèi)14份，發(fā)夾首飾等其他檢材8份。

上述檢材均采用EZ-tape脫落細(xì)胞粘取器（公安部物證鑒定中心）富集并轉(zhuǎn)移脫落細(xì)胞。取整個(gè)粘膠片（或吸附膜、擦拭子、剪取物），置于0.5mL離心管中，加入ATL 300μL和PK 20 μL［QIAamp DNA Investigator試劑盒（德國(guó)QIAGEN公司）］，BMJ0808型恒溫?fù)u勻孵育儀（珠海博邁杰生物科技有限公司）上56℃孵育1.5h，再使用硅膠膜純化柱在QIAcube全自動(dòng)核酸純化儀（德國(guó)QIAGEN公司）上純化提取DNA，洗脫體積30μL，取洗脫液適量擴(kuò)增。使用Identifiler? PlusPCR擴(kuò)增試劑盒（美國(guó)AB公司）在9700型PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)AB公司）上擴(kuò)增，反應(yīng)體系10μL，循環(huán)次數(shù)30個(gè)。擴(kuò)增產(chǎn)物在3130XL型遺傳分析儀（美國(guó)AB公司）上進(jìn)行電泳檢測(cè)，使用GeneMapper ID 3.2分析數(shù)據(jù)，圖譜峰高識(shí)別閾值為50 RFU。

根據(jù)檢出等位基因個(gè)數(shù)的不同，按未檢出有效分型（檢出有效峰形的基因座＜9個(gè)）、單一來(lái)源分型（檢出有效峰形的基因座≥9個(gè)且3峰以上的基因座＜2個(gè)）、混合分型（檢出有效峰形的基因座≥9個(gè)且3峰以上的基因座≥2個(gè)）對(duì)上述檢驗(yàn)圖譜進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2結(jié)　果

所檢樣本中，手印痕跡類(lèi)檢材所占比例最大，占43.90%（表1），反映基層公安機(jī)關(guān)對(duì)微量物證的應(yīng)用意識(shí)不斷加強(qiáng)。但此類(lèi)檢材檢出有效單一來(lái)源分型的成功率較低，可能與接觸時(shí)間短暫、脫落細(xì)胞殘留量較少且手部皮膚角質(zhì)化嚴(yán)重、完整的DNA拷貝數(shù)較少等原因有關(guān)[1]。短暫接觸性檢材（如手印痕跡）的有效檢出率明顯低于長(zhǎng)時(shí)間接觸性檢材（如衣物），說(shuō)明脫落細(xì)胞的遺留需要一定時(shí)間的積累；工具手柄、繩索類(lèi)檢材有效檢出率明顯大于手印痕跡類(lèi)檢材，說(shuō)明脫落細(xì)胞的遺留與接觸力度有關(guān)[2]。長(zhǎng)時(shí)間接觸性檢材中，面罩的口鼻部、帽子內(nèi)側(cè)的邊緣、衣服的衣領(lǐng)內(nèi)側(cè)以及褲子褲腰處內(nèi)側(cè)檢出混合分型的概率明顯低于手套及鞋子的內(nèi)側(cè)，分析認(rèn)為前四種物品使用的人員相對(duì)單一且外源脫落細(xì)胞侵入的概率較低，而手套存在多人多次使用，由手部轉(zhuǎn)移外源性脫落細(xì)胞的概率較大，故出現(xiàn)混合分型的次數(shù)較多。鞋子內(nèi)側(cè)出現(xiàn)較復(fù)雜的DNA分型，推測(cè)與腳或襪子附著的外源脫落細(xì)胞發(fā)生二次轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。同時(shí)，在衣服、褲子、鞋、襪的內(nèi)側(cè)檢出混合分型的概率低于外側(cè)，分析與這些檢材的內(nèi)側(cè)相對(duì)封閉，保護(hù)條件較好，而外側(cè)長(zhǎng)期暴露在外，與外界發(fā)生細(xì)胞交換的可能性更大有關(guān)。在工具手柄類(lèi)檢材的檢驗(yàn)中，其有效檢出率通常與使用時(shí)間呈正相關(guān)，值得注意的是使用時(shí)間長(zhǎng)的工具手柄檢出混合分型的概率也隨之增高，給比對(duì)應(yīng)用帶來(lái)一定困難。

表1不同類(lèi)型檢材的STR分型結(jié)果［例（%）］

3討　論

當(dāng)皮膚接觸到物體表面時(shí)會(huì)留下皮膚脫落細(xì)胞稱(chēng)之為接觸性DNA。皮膚脫落細(xì)胞具有依附載體種類(lèi)多、體積小、現(xiàn)場(chǎng)遺留率高等固有優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也具有量小體微、不易發(fā)現(xiàn)提取、易污染、易毀損滅失和檢驗(yàn)困難的特點(diǎn)[4]。在接觸性檢材的檢驗(yàn)中，能否盡可能地富集脫落細(xì)胞，同時(shí)避免檢材的污染、損耗是決定檢驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵。目前，通常采用剪取法、負(fù)壓吸附法、二步擦拭法等方法轉(zhuǎn)移富集皮膚脫落細(xì)胞[5]。在實(shí)踐中，筆者發(fā)現(xiàn)這些方法各自都有其局限性：剪取法取材的范圍小，可富集的靶細(xì)胞數(shù)量少，而且破壞了檢材的整體性；負(fù)壓吸附法不適用于通透性較高或者接觸面凹凸不平的載體，同時(shí)其吸引力度不便控制，易帶入其他外源性DNA，通常檢出混合基因分型；二步擦拭法是一種有效的轉(zhuǎn)移富集非滲透性載體上脫落細(xì)胞的方法，但并不適用于滲透性較高的檢材（如織物類(lèi)）。在實(shí)際檢案中，應(yīng)該根據(jù)檢材的特點(diǎn)，選擇合適的脫落細(xì)胞轉(zhuǎn)移富集方法。

EZ-tape是公安部物證鑒定中心研制的一種針對(duì)脫落細(xì)胞的提取裝置，其原理是利用膠帶直接粘取滲透性和非滲透性客體表面上的脫落細(xì)胞，具有攜帶方便、操作簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)[6-7]。其粘膠面積大小適中，既可針對(duì)重點(diǎn)部位進(jìn)行粘取，獲得足量的脫落細(xì)胞，又能有效避免過(guò)多帶入背景DNA[8]。對(duì)于有明確接觸部位的檢材，可使用膠片的雙側(cè)面粘取，最大程度地富集脫落細(xì)胞。完成粘取后，膠片固定于密閉的容器中，有效避免了物證保存、轉(zhuǎn)送過(guò)程中可能發(fā)生的二次轉(zhuǎn)移或污染[9]。本研究使用EZ-tape轉(zhuǎn)移富集皮膚接觸性檢材上的脫落細(xì)胞，并采用硅膠膜吸附法純化、濃縮模板DNA，同時(shí)在PCR擴(kuò)增中適當(dāng)增加循環(huán)次數(shù)，以達(dá)到提高檢測(cè)靈敏度的目的，在實(shí)際檢案中獲得了良好的檢驗(yàn)效果，適用于各類(lèi)接觸性檢材DNA的提取。綜上所述，對(duì)于接觸部位明確且范圍局限的檢材，便于剪取的可采用剪取法提取，不宜剪取的可使用EZ-tape粘取；對(duì)于接觸部位不明確或范圍較大的檢材，可采用負(fù)壓吸附法富集提取，但使用EZ-tape

或二步擦拭法（僅適用于非滲透性檢材）分區(qū)域提取，更有利于獲得單一來(lái)源DNA分型。

參考文獻(xiàn)：

[1]郝金萍，邵麗芳，陳松，等.紙張上汗?jié)撝赣NA-STR檢驗(yàn)成功率分析[J].中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2013，28（5）：418-419.

[2]張廣峰，陳松，涂政，等.接觸DNA檢驗(yàn)成功率的影響因素探討[J].刑事技術(shù)，2013，（3）：9-13.

[3]霍塞虎.低拷貝模板DNA及其在法庭科學(xué)中的應(yīng)用與進(jìn)展[J].中國(guó)人民公安大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2011，（1）：12-16.

[4]李樹(shù)，寧淑華，王清山.淺談微量生物物證的發(fā)現(xiàn)方法[J].廣東公安科技，2010，（3）：15-17.

[5]童大躍，劉超.新編法醫(yī)物證檢驗(yàn)技術(shù)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2013：252.

[6]王玉健，王斌，馬妍，等.應(yīng)用EZ-tape膠帶分離提取混合斑精細(xì)胞[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2012，28（2）：133，136.

[7]李萬(wàn)水，胡蘭，劉海東，等.用EZ-tape膠帶提取接觸DNA一例[C]//第三屆全國(guó)法醫(yī)DNA檢驗(yàn)技術(shù)研討會(huì)論文集.北京：群眾出版社，2008：367-368.

[8]田蕊，班茂森.鞋內(nèi)底不同部位接觸DNA提取初探[J].刑事技術(shù)，2013，（2）：50-52.

[9]李越，劉超，馮冬亮.兇器包裝袋內(nèi)面脫落細(xì)胞STR檢驗(yàn)1例[J].中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2011，26（1）：79.

（本文編輯：柳燕）

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收稿日期：（2015-08-05）

作者簡(jiǎn)介：成靜（1975—），女，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)遺傳

文章編號(hào)：1004-5619（2016）01-0061-02

中圖分類(lèi)號(hào)：DF795.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2016.01.014