徐昌君，方松文，李宏彬，但 勇，張 川，徐林林，劉 楊，張莉莉，楊長福＊＊

（1. 貴陽中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 貴陽 550002；2. 貴州省人民醫(yī)院護士學(xué)校 貴陽 550002）

黃芪提取物對肺纖維化小鼠肺泡炎癥影響及抗纖維化作用研究＊

徐昌君1，方松文1，李宏彬1，但 勇1，張 川1，徐林林1，劉 楊1，張莉莉2，楊長福1＊＊

（1. 貴陽中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 貴陽 550002；2. 貴州省人民醫(yī)院護士學(xué)校 貴陽 550002）

目的：研究黃芪多糖、黃芪總黃酮、和黃芪總皂苷對博萊霉素（BLM）誘導(dǎo)肺纖維化KM小鼠肺泡炎癥影響及抗肺纖化的作用。方法：KM小鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、藥物處理組（黃酮組、多糖組、皂苷組、皂苷+黃酮組）共6組，模型組及藥物處理組小鼠氣管內(nèi)一次性滴注BLM，假手術(shù)組予等量生理鹽水，造模后予相應(yīng)藥物或生理鹽水灌胃，第28天取材；分別行肺泡灌洗液細胞計數(shù)分類，肺組織HE、Masson染色，免疫組化及western blot測TGF-β1、TNF-α表達水平。結(jié)果：①與對照組比較，模型組肺泡灌洗液（BALF）單核細胞和巨噬細胞明顯增多（P＜0.05），黃芪黃酮治療組改善較明顯，且優(yōu)于其他成份組（P＜0.05）；②Masson結(jié)果和HE結(jié)果具有高度一致性，炎癥反應(yīng)強度和纖維化程度成正比。黃芪總黃酮能明顯改善肺纖維化炎癥反應(yīng)，抑制早期纖維化結(jié)節(jié)出現(xiàn)，黃芪多糖和黃芪皂苷改善作用不如黃芪黃酮；③模型組TNF-α、TGF-β1免疫組化陽性顆粒明顯比對照組增多，與模型組比較，黃芪黃酮能有效降低TNF-α、TGF-β1水平，黃芪多糖組和黃芪皂苷組與模型組比較雖有一定改善，但是效果不如黃芪黃酮；黃芪皂苷+黃酮聯(lián)合應(yīng)用無協(xié)同作用；④蛋白印跡結(jié)果與免疫組化結(jié)果具有一致性。結(jié)論：黃芪黃酮能有效抑制肺纖維化炎癥反應(yīng)及后期的纖維化過程，該抑制作用與抑制TNF-α、TGF-β1表達具有密切關(guān)系。

黃芪糖 黃芪黃酮 黃芪皂苷 肺纖維化 炎癥 TNF-α TGF-β1

肺纖維化（Pulmonary Fibrosis，PF）是由多種因素導(dǎo)致的纖維增殖性疾病，是以細胞外基質(zhì)（Extracellular Matrixc，ECM）沉積伴隨炎癥損傷、大纖維細胞增生，導(dǎo)致肺組織結(jié)構(gòu)破壞為特征的病理過程[1]。迄今，對PF尚沒有一種令人滿意的治療方法，西醫(yī)治療以糖皮質(zhì)激素為主，但長期激素應(yīng)用會產(chǎn)生嚴重的副作用。PF屬中醫(yī)“肺痿”、“肺痹”范疇，病機為“氣虛血瘀”，益氣活血法是治療PF的基本治療方法。對中醫(yī)方劑的篩查總結(jié)發(fā)現(xiàn)：以黃芪為核心的補益藥用藥頻度高達36%，而黃芪用藥頻度達19%[2]，黃芪在抗PF的作用過程具有重要作用。本實驗研究黃芪3種主要成份：黃芪多糖、黃芪總黃酮、黃芪總皂苷對PF肺泡炎癥的影響及PF作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

SPF級KM小鼠90只，雄性，8周齡，體質(zhì)量19-21 g，購自北京維通利華實驗動物有限公司，合格證號：SCXK（京）2012-0001。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由飲水、進食。

1.1.2 藥物

黃芪總黃酮（批號：ZL150206582），黃芪總皂苷（批號：ZL150306582），黃芪多糖（批號：ZL150206），均購于南京春秋生物工程有限公司。

1.1.3 主要試劑及儀器

抗體TNF-α（英國Abcam公司，ab1793，批號：GR54204-2）；抗體TGF-β1（英國Abcam公司，ab4715，批號：GR70926-1），免疫組化試劑盒（北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，批號：k152411B），DAB顯色液（北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，批號：k1556158），Masson試劑盒（南京建成生物工程研究所有限公司），博萊霉素粉劑（日本化藥株式會社），總蛋白提取試劑盒（北京普利萊基因技術(shù)有限公司），BCA蛋白定量試劑盒（北京康為世紀生物科技有限公司），SDS-PAGE凝膠試劑盒（北京索萊寶科技有限公司），PVDF膜（德國默克公司），ECL超敏發(fā)光液（北京普利萊基因技術(shù)有限公司），10×電泳液、10液轉(zhuǎn)膜液、膜再生液（北京索萊寶科技有限公司），防脫載玻片（武漢博士德生物工程有限公司），包埋石蠟（德國萊卡公司）；LD4-2型低速離心機（北京醫(yī)用離心機廠）、PLUS新型-86℃超低溫冰箱（美國Thermo Scientific公司），顯微鏡攝像CCD照相系統(tǒng)，型號：DP73+standard 1.6（日本奧林巴斯公司），Bio-Rad蛋白凝膠電泳儀、BIO-RAD凝膠成相系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模

雄性KM小鼠90只，分為6組，采用隨機數(shù)字表法分為對照組、模型組、多糖組、皂苷組、黃酮組、皂苷+黃酮組，共6組，每組15只。小鼠用4%水合氯醛（10 mL·kg-1）腹腔注射麻醉后，仰臥固定于鼠臺上，頸部酒精消毒后逐層分離并暴露氣管，注射器經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入，模型組及藥物處理組緩慢注入博萊霉素（Bleomycin，BLM）（10 mL·kg-1），對照組予等量生理鹽水[3]。術(shù)后密切觀察動物狀態(tài)，造模后藥物處理組灌胃，給予相應(yīng)藥物（黃芪多糖：284 mg·kg-1，黃芪黃酮43 mg·kg-1，黃芪皂苷：105 mg·kg-1）黃芪皂苷+黃芪黃酮43+105 mg·kg-1），模型組及對照組給予等量生理鹽水，共28天。

1.2.2 取材

第29天各組小鼠按數(shù)字表法隨機分為2組。一組小鼠予4%水合氯醛麻醉（10 mL·kg-1），仰臥位固定，腹主動脈采血處死小鼠，分離頸部氣管，氣管中部作T型切口，氣管插管（消毒灌胃針替代），近心端手術(shù)線結(jié)扎氣管與氣管插管，用1 mL注射器抽取0.8 mL預(yù)冷的PBS緩沖液，通過插管灌洗雙肺，回收BALF于消毒的EP管中，3次灌洗約獲得灌洗液1.2 mL，于4℃離心機離心5 min，轉(zhuǎn)速1 500 rpm。EP管內(nèi)細胞沉淀待作細胞計數(shù)和細胞涂片。另一組小鼠按上述同樣操作，取左葉肺門部組織置于10%中性福爾馬林固定，右側(cè)肺組織存放于-80℃冰箱備用。

1.2.3 BALF細胞計數(shù)及分類

BALF離心，取細胞沉淀用0.3 mL生理鹽水重懸，混合均勻后用細胞計數(shù)板進行細胞計數(shù)，每一標本計數(shù)3次，取平均值。細胞計數(shù)公式：細胞數(shù)/mL=四大格細胞總數(shù)/4×104。

1.2.4 細胞涂片

取20 μL細胞懸液點片，95%酒精固定10 min，干燥后將玻片浸入蘇木素染液中孵育8 min，自來水清洗，1%鹽酸酒精分色，1%伊紅染色5 min，后分別于85%酒精、 95%酒精、100%酒精中逐級脫水，二甲苯透明兩次，每次2 min，中性樹膠封片。封片后將玻片置于倒置顯微鏡下觀察，并進行分類計數(shù)，每張切片計數(shù)400個白細胞，計數(shù)3次，取平均值。

1.2.5 HE和Masson染色

組織常規(guī)固定、脫水透明、石蠟包埋后切片，HE常規(guī)染色:石蠟切片二甲苯脫蠟2次，12 min/次，于100%酒精、95%酒精、80%酒精、70%酒精梯度脫水，蘇木精染色6 min，自來水藍化10 min。視核染深淺進行鹽酸酒精分化，伊紅染色3 min，酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。Masson染色：石蠟切片脫蠟，入水同前，染色按照試劑盒依次操作，最后脫水、透明、封片等操作步驟同前。

1.2.6 免疫組化

組織切片常規(guī)脫臘，梯度酒精入水，抗原用檸檬酸緩沖液修復(fù)，3%H2O2滅活過氧化氫酶，加入一抗TNF-α、TGF-β1孵育過夜。TBS洗滌，加二抗于37℃孵育20 min，洗滌。DAB顯色，蘇木精復(fù)染，透明、封片。

1.2.7 Western blot檢測TNF-α、TGF-β1表達

肺組織標本從-80℃冰箱取出，稱重，按50 mg/500 μL加入裂解液勻漿，靜置10 min，1：2加抽提試劑混勻，4℃靜置10 min，12 000 rpm離心，提取中間分離相，1%SDS溶解，BCA蛋白定量分析，4：1加上樣緩沖液95℃變性。SDS-PAGE蛋白凝膠電泳：上樣量為30 μg/孔，電泳時間為1.5 h、電壓80-120 V，轉(zhuǎn)膜2 h、電壓為60V；5%脫脂牛奶封閉后，加入TGF-β1和TNF-α1一抗孵育液（1：1000稀釋），4℃孵育過夜，二抗孵育液按1：8000稀釋，常溫下孵育2 h（搖床輕搖）。洗滌后超敏發(fā)光液顯色，Bio-Rad蛋白凝膠電泳儀成像拍照。

1.2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

免疫組化和原位雜交結(jié)果使用Image-Pro Plus6.0專業(yè)圖像分析軟件進行圖像分析，用Image J軟件分析western blot圖像。采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)資料均用均數(shù)±標準差（±s）來表示。當數(shù)據(jù)符合正態(tài)和方差齊時，各組間比較采用單因素方差分析，多組定量資料之間的比較采用LSD-t檢驗，P＜0.05認為結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 細胞總數(shù)及細胞分類變化

模型組與對照組比較，無論是單核細胞還是巨噬細胞，所占比例明顯比對照組增加（P＜0.05或P＜0.01），說明在PF過程中炎癥是一個重要反應(yīng)。藥物處理組中，黃芪黃酮組單核和巨噬細胞雖然比假手組增加，但是比模型組卻明顯減少（P＜0.01），且黃酮治療效果明顯優(yōu)于多糖和皂苷組（P＜0.05）（見表1）。

2.2 肺組織HE染色結(jié)果

對照組小鼠肺內(nèi)結(jié)構(gòu)清晰，肺泡間隔未見增厚，無充血、水腫及急慢性炎癥，各時間點均未出現(xiàn)明顯病理改變。模型組肺泡結(jié)構(gòu)塌陷，肺毛細血管充血，肺泡間隔水腫，肺泡壁增厚，肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)以巨噬細胞、中性粒細胞和淋巴細胞為主的炎癥細胞浸潤，出現(xiàn)大量肺纖維結(jié)節(jié)，PF瘢痕形成；多糖組肺泡炎仍然較明顯，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡間隔增寬，成纖維細胞明顯增多，較模型組有所減少，總體有一定改善；黃酮組有輕微炎癥反應(yīng)，但肺泡結(jié)構(gòu)較清晰，纖維增生不嚴重，但還是觀察到少量纖維結(jié)節(jié)，與模型組比較改善作用明顯；皂苷組肺泡結(jié)構(gòu)比多糖組稍好，但炎癥細胞浸潤較明顯，結(jié)果不如黃酮組；聯(lián)合治療組表現(xiàn)為明顯的纖維增生，炎癥細胞浸潤多，抗PF效果較差（圖1）。從炎癥反應(yīng)評分標準看（見表2），模型組炎癥反應(yīng)與對照組有明顯區(qū)別（P＜0.05），黃酮治療組雖然存在炎癥反應(yīng)，但是與模型組比較可見明顯好轉(zhuǎn)（P＜0.05），而多糖、皂苷、以及聯(lián)合治療組比模型組雖有不同程度好轉(zhuǎn)，但是療效不及黃酮組（見表3）。

表1 BALF單核細胞及巨噬細胞計數(shù)（±s，n=8）

表1 BALF單核細胞及巨噬細胞計數(shù)（±s，n=8）

注：因為受取樣和稀釋濃度的影響，細胞絕對值不能反應(yīng)炎癥情況，而細胞所占比例與炎癥反應(yīng)具有關(guān)聯(lián)性，與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；給藥組間比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別單核細胞單核細胞百分比/%巨噬細胞巨噬細胞百分比/%對照組0.10±0.05 15.00±0.06 0.015±0.002 2.800±0.065模型組0.27±0.07 46.00±0.12*0.035±0.018 9.600±0.074**黃芪總黃酮組0.24±0.01 19.50±0.09*##△0.023±0.008 3.800±0.011##△黃芪多糖組0.18±0.02 25.00±0.13*#0.037±0.012 5.560±0.021*#黃芪皂苷組0.13±0.04 25.65±0.11*#0.030±0.014 6.100±0.013*#黃芪黃酮+皂苷組0.22±0.10 44.40±0.18**0.380±0.009 6.150±0.013*#F值25.6 23.0 15.3 24.1

表2 肺泡炎癥和肺纖維化評分標準

圖2 Masson染色不同成份對膠原蛋白表達影響（×200）

2.3 肺組織Masson染色結(jié)果

對照組肺泡清晰，肺泡間質(zhì)間少量膠原藍染，以小氣管為中心的膠原藍染屬于正常膠原，而模型組肺纖維樣變非常明顯，肺泡塌陷，萎縮，大量纖維膠原生成，呈實變樣。黃酮組肺紋理尚清晰，膠原染色不明顯，與模型組比較明顯改善。與模型組比較，多糖組、皂苷組膠原表達減少，但相比于黃酮組表達增加，說明黃酮的治療作用明顯優(yōu)于多糖和皂苷組，而聯(lián)合治療組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，膠原表達增加、呈實變樣，與模型組比較無明顯差異（見圖2）。PF得分情況與HE呈現(xiàn)高度一致性（見表3）。

表3 HE染色鏡下炎癥反應(yīng)和Masson染色纖維化程度得分（s，n=7）

表3 HE染色鏡下炎癥反應(yīng)和Masson染色纖維化程度得分（s，n=7）

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05；黃芪總黃酮組與多糖組、黃芪皂苷組、黃芪黃酮+皂苷組比較，△P＜0.05。

分組肺泡炎肺纖維化對照組0 0模型組 2.50±0.30* 3.0±0.42**黃芪總黃酮組 1.30±0.20#△ 1.70±0.36#△黃芪多糖組2.00±0.31 1.80±0.28#黃芪皂苷組1.90±0.23 2.10±0.37黃芪黃酮+皂苷組2.30±0.39 2.0±0.21F值22.4 19.1

2.4 肺組織TGF-β1和TNF-α的表達

2.4.1 肺組織TGF-β1的表達

免疫組化結(jié)果顯示（圖3），TGF-β1在對照組也有少量表達，主要在細胞質(zhì)和肺泡腔的分泌物中。與假手術(shù)組相比，模型組表達明顯增加，主要在分泌物較多的部位和細胞外周呈現(xiàn)高表達。黃酮治療組TGF-β1表達比多糖組和皂苷組明顯減少（D組、E組），TGF-β1主要表達于胞漿和肺泡粘液中。以上表達特點提示，TGF-β1屬于分泌型炎癥因子，在細胞外周分泌區(qū)高表達，通過細胞膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，刺激纖維細胞大量增殖。

2.4.2 肺組織TNF-α的表達

對與對照組相比，模型組差異明顯，表現(xiàn)為：模型組TNF-α表達增加，即便是在實變區(qū)，其表達仍然明顯，與對照組相比，黃銅治療組無明顯差異，多糖、皂苷和聯(lián)合治療組TNF-α表達水平明顯提高，其表達部位與TGF-β1類似，即在小支氣管上皮細胞，肺泡區(qū)有高表達（見圖4）。

2.5 Western blot測定肺組織TGF-β1和TNF-α的表達

模型組和對照組比較（圖5），TGF-β1高表達（見表5），黃芪黃酮治療組能明顯降低TGF-β1水平（P＜0.01），雖然黃芪多糖和皂苷也能一定程度降低TGF-β1水平，但是降低程度沒有黃芪黃酮組明顯，聯(lián)合組則無明顯變化。TNF-α表達水平與TGF-β1具有相似的表達趨勢，但是皂苷組也能明顯降低TNF-α（P＜0.01）。總之，黃芪黃酮降低TGF-β1和TNF-α優(yōu)于與多糖組合皂苷組，而聯(lián)合治療組無明顯降低作用。

圖3 各組小鼠肺組織TGF-β1的表達（×200）

圖4 各組小鼠肺組織TNF-α的表達（×200）

表4 黃芪不同組份對TGF-β1和TNF-α表達影響（±s，n=7）

表4 黃芪不同組份對TGF-β1和TNF-α表達影響（±s，n=7）

注：與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；黃芪總黃酮組與多糖組、黃芪皂苷組、黃芪黃酮+皂苷組比較，△P＜0.05。

組別TGF-β1 TNF-α對照組0.051±0.003 0.021±0.001模型組0.098±0.008**0.046±0.012**黃芪總黃酮組0.056±0.004**△0.019±0.003##△黃芪多糖組0.063±0.002*#0.035±0.006*黃芪皂苷0.075±0.011*0.026±0.013**黃芪黃酮+皂苷組0.085±0.013**0.022±0.004##F值2521

圖5 Western-blot測定肺組織TNF-α和TGF-β1的表達

表5 Western-blot測定肺組織TNF-α和TGF-β1的表達（-±s，n=4）

表5 Western-blot測定肺組織TNF-α和TGF-β1的表達（-±s，n=4）

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；黃芪總黃酮組與多糖組、黃芪皂苷組、黃芪黃酮+皂苷組比較，△P＜0.05。

組別TGF-β1TNF-α對照組0.121±0.030 0.131±0.025模型組0.224±0.011**0.246±0.035**黃芪總黃酮組0.118±0.015##△0.145±0.039##△黃芪多糖組0.156±0.017#0.220±0.057#黃芪皂苷組0.160±0.007#0.163±0.031#黃芪黃酮+皂苷組0.190±0.009 0.231±0.046F值1320

3 討論

PF病理形態(tài)以早期以肺部炎癥為主，表現(xiàn)為大量中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞嗜酸性粒細胞等炎癥細胞浸潤，肺泡巨唾細胞（Alveolar Macrophage，AM）活化，毛細血管內(nèi)皮細胞（Alveolar Epithelial Cell，AEC）和肺泡上皮細胞損傷，肺泡腔內(nèi)有大量脫落的上皮細胞，主要為II型肺泡上皮細胞和少量單核細胞、巨噬細胞，肺泡壁由于血管擴張、滲出、細胞浸潤呈彌漫性增厚；[4]隨著病程的進展，由炎性細胞和細胞因子介導(dǎo)，膠原纖維大量生成，肺泡數(shù)量減少、變形、閉索或殘留裂隙狀不規(guī)則形態(tài)，細支氣管代償、擴張呈蜂窩肺，正常肺組織結(jié)構(gòu)被破壞，功能喪失，肺毛細血管數(shù)量減少甚至閉索。

研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β以激活的形式過度表達，是導(dǎo)致組織持久嚴重的間質(zhì)纖維化發(fā)生的病理基礎(chǔ)[5]。在TGF-β家族中，參與纖維化形成的主要是TGF-β1，它在PF過程中起著重要的作用，例如 I、III型膠原基因轉(zhuǎn)錄和ECM蛋白均可在其刺激下大量增殖[6]。TGF-β1被認為是器官纖維化過程中的核心介質(zhì)，并喻為細胞因子網(wǎng)絡(luò)的“啟動樞紐”，抑制其表達或生物活性可延緩器官纖維化進程，制約著纖維化的發(fā)展方向[7]。在PF過程中，TGF-β1主要分布于細支氣管、支氣管粘膜上皮、支氣管腺體和血管平滑肌及肺泡巨噬細胞中，各種原因引起的過度表達可導(dǎo)致PF的發(fā)生[8,9]。TNF-α屬于胞漿分泌型炎癥因子，其生物學(xué)活性廣泛，參與炎性反應(yīng)、免疫應(yīng)答、抗腫瘤、內(nèi)毒素性休克等病理過程，對免疫調(diào)節(jié)和抗感染等方面發(fā)揮重要作用，但是若持續(xù)釋放或產(chǎn)生過多則會引起發(fā)熱、休克、纖維化等[10]。

在中醫(yī)學(xué)屬于“肺痿”、“肺痹”等范疇，病機為“氣虛血瘀”，益氣活血法是治療PF的基本治療方法。黃芪其性微溫，味甘，歸肺、脾二經(jīng)，具有補氣升陽、固表止汗、托毒排膿、利水消腫等功效。黃芪成份復(fù)雜，含有皂苷、黃酮、多糖，以及氨基酸、亞油酸、生物堿、膽堿等化學(xué)成分[11]，廣泛用于肺，心肌，肝腎等組織纖維化治療。黃芪能下調(diào)心肌成纖維細胞TGF-β1分泌，抑制其增殖[12]，黃芪能抑制大鼠肝纖維化TGF-β1/Smad2、p38MAPK信號治療肝纖維化[13]，其聯(lián)合TNF-α對CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化產(chǎn)生較好保護作用[14]。在治療PF方面，以黃芪為核心的補益藥用藥頻度高達36%，黃芪用藥頻度達19%[2]，因此黃芪具有較好抑制PF的作用。實驗研究認為，黃芪注射液對人胚肺成纖維細胞增殖及細胞外基質(zhì)合成的干預(yù)作用[15]，黃芪提取物能降低矽肺模型大鼠支氣管肺泡灌洗液 MMP-2、 MMP-9 的表達，抑制矽PF[16]。

本實驗首次在同一模型中比較黃芪不同成份對PF炎癥反應(yīng)及TGF-β1和TNF-α的調(diào)控作用。該模型組織炎癥反應(yīng)強烈，表現(xiàn)為：形成了大量的炎性反應(yīng)中心和肺纖維結(jié)節(jié)，纖維結(jié)節(jié)和炎性反應(yīng)共同存在，肺泡灌洗液炎性細胞比例大幅升高，肺纖維實變區(qū)TGF-β1和TNF-α高表達。黃芪總黃酮，黃芪多糖、黃芪皂苷、黃芪黃酮聯(lián)合皂苷灌胃28天，3種成份都不同程度抑制肺泡炎癥，下調(diào)TGF-β1和TNF-α表達水平，但是黃芪總黃酮的治療作用最明顯，該治療作用與下調(diào)TGF-β1和TNF-α具有密切關(guān)系。

綜上所述，黃芪治療PF具有確切作用，黃芪治療PF與黃芪總黃酮類成份有關(guān)，黃芪總黃酮通過抑制TGF-β1和TNF-α表達而抑制PF進程。

1 藏凝子,龐立健,劉創(chuàng),等.特發(fā)性肺纖維化在病證結(jié)合模式指導(dǎo)下的療效評價體系框架.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2014, 16(10): 2118-2123.

2 趙國靜.現(xiàn)代中醫(yī)藥治療特發(fā)性肺纖維化的文獻研究.山東:山東中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2012.

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Impacts of Astragalus Extract on the Alveolar Inflammation and Anti-Fibrosis Effects in Pulmonary Fibrosis Mice

Xu Changjun1, Fang Songwen1, Dan Yong1, Zhang Chuan1, Xu Linlin1, Liu Yang1, Zhang Lili2, Yang Changfu1
(1. Basic Medical College, Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China;
2. The Nurse School, Guizhou Province People's Hospital, Guiyang 550002, China)

Astragalus was widely used in the TCM treatment of pulmonary inflammation in fibrosis. This study aimed to exam the therapeutic effects of flavonoids, polysaccharides and saponins in astragalus on pulmonary inflammation in bleomycin (BLM) induced fibrosis KM mice model. BLM were administered intratracheally in the model group and the medication group, while the same volume of normal saline in the control group. Mice were sacrificed after astragalus ingredients administration for 28 days. It was found that neutrophile granulocyte and macrophagocyte in bronchoalveolar lavage fluid were significantly increased in the model group (P ＜ 0.05), which were reversed after administration of astragalus flavonoids. The same cell count results were showed both in Masson and HE staining (P ＜ 0.05). And a positive correlation between inflammatory response and pulmonary fibrosis was presented in the study. However, there was no significant change after the treatments of astragalus polysaccharides, saponins and astragalisaponins plus flavonoids. Quantifing analysis of collagen was consistent with that of inflammation. Astragalus saponins and flavonoids both restrained early fibrosis nodules, while astragalus flavone was superior to the astragalus saponin group and the astragalus saponin plus flavone group. TNF-α, TGF-β1were significantly increased in IHC and western blot results in the model group. Tragalus astragalus flavonoids reversed these trends, which surpassed other ingredients. In conclusion, astragalus flavone and astragalus saponin can inhibit pulmonary inflammation and fibrosis, which may be related to the antiinflammatory effects of TNF-α and TGF-β1.

Astragalusmembranaceus sugar, astragalus flavones, astragalus saponin, pulmonary fibrosis, inflammatory, TNF-α, TGF-β1

10.11842/wst.2016.04.015

R563

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2015-12-20

修回日期：2016-02-04

＊ 國家自然科學(xué)基金委地區(qū)科學(xué)基金項目（81260587）：從自噬/溶酶體途徑探討組織蛋白酶D對特發(fā)性肺纖維化中II肺泡上皮細胞損傷的的分子機制及加減補肺湯的干預(yù)研究，負責(zé)人：楊長福；貴州省科技廳科學(xué)技術(shù)基金（黔科合J字[2014]2034號）：miRNA-21、LET-7d對IPF炎癥反應(yīng)及細胞自噬途徑的影響，負責(zé)人：徐昌君；貴州省高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃：黃芪抗肺纖維化藥用成份分析及篩選，負責(zé)人：方松文。

＊＊ 通訊作者：楊長福，副教授，主要研究方向：中藥治療肺纖維化。