李旭蓉，張文波，錢振波，李珊，馬斌

（1.甘肅省張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，734000；2.張掖市農(nóng)畜產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心；3.張掖市畜牧管理站）

甘肅省張掖市規(guī)模養(yǎng)雞場減蛋綜合征和新城疫免疫抗體水平調(diào)查

李旭蓉1，張文波1，錢振波2，李珊1，馬斌3

（1.甘肅省張掖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，734000；2.張掖市農(nóng)畜產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心；3.張掖市畜牧管理站）

為掌握張掖市規(guī)模養(yǎng)雞場減蛋綜合征和新城疫的免疫抗體水平，對(duì)張掖市5個(gè)縣（區(qū)）10個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場500份血清進(jìn)行了減蛋綜合征、新城疫免疫抗體檢測(cè)。結(jié)果表明減蛋綜合征合格409份，合格率為81.8%；新城疫合格411份，合格率為82.2%。減蛋綜合征合格率最高為95%，最低為70%；新城疫合格率最高為100%，最低為71%。群體免疫抗體水平均達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定≥70%的標(biāo)準(zhǔn)。

減蛋綜合征；新城疫；抗體水平；調(diào)查

雞減蛋綜合征（EDS76），又稱雞產(chǎn)蛋下降綜合征，是一種由禽腺病毒引起的病毒性傳染病。該病是給養(yǎng)雞業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失的四種主要病毒性傳染病之一[1]，傳染性很高但通常不會(huì)引發(fā)死亡，其主要特征為突然性群體產(chǎn)蛋率下降20～38%，蛋殼異常、蛋體畸形及蛋質(zhì)低劣等，軟殼蛋占15%以上[2]。本病給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

新城疫（ND）,也稱亞洲雞瘟，是由新城疫病毒引起的雞急性、高度接觸性傳染病，一年四季均可發(fā)生，典型臨床癥狀為呼吸困難，頭冠紫黑，食欲廢絕，下痢，部分雞出現(xiàn)神經(jīng)紊亂，共濟(jì)失調(diào)，轉(zhuǎn)圈，前沖，后退，病死率可達(dá)100%。該病仍是最主要和最危險(xiǎn)的禽病之一。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 被檢血清。2015年11月，在甘州、臨澤、高臺(tái)、山丹、民樂5縣（區(qū)）各隨機(jī)選擇2個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場，每個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場采用隨機(jī)抽樣的方式，采集已免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎、減蛋綜合征三聯(lián)滅活疫苗（N79株＋M41株+NE4株）（青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)）21天后的血樣50份，共500份（臨澤和山丹2縣同時(shí)聯(lián)用了禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗（rL-H5株）），無菌分離血清，編號(hào)備檢。

1.1.2 檢測(cè)器材。96孔V型微量反應(yīng)板，100 μL微量移液器，吸頭，離心機(jī)，振蕩器等。

1.1.3 1%雞紅細(xì)胞懸液制備。采集3只以上非免疫健康公雞提供的紅細(xì)胞混合在一起，用pH7.2、0.01 mol/L PBS液洗滌3次，每次均以1000 r/min離心10min，洗滌后用PBS配成體積分?jǐn)?shù)為1%紅細(xì)胞懸液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4 檢測(cè)試劑。減蛋綜合征血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）試劑，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)（批號(hào)：201508）。新城疫血凝（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）試劑，由哈爾濱動(dòng)物生物制品國家工程研究中心有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：20150403）。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 血凝試驗(yàn)（HA）。（1）在微量反應(yīng)板的1孔～12孔均加入0.025 ml PBS，換吸頭。（2）吸取0.025 ml抗原加入第1孔，混勻后依次倍比稀釋至從第11孔吸取0.025 ml棄之，換吸頭。（3）每孔再加入0.025 ml PBS。（4）每孔均加入0.025 ml體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液，室溫(20℃～25℃)下靜置40min后，判斷結(jié)果。（5）結(jié)果判定：將板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌。完全血凝（不流淌）的抗原或病毒最高稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位。

1.2.2 血凝抑制試驗(yàn)（HI）。（1）根據(jù)HA試驗(yàn)結(jié)果配制四個(gè)血凝單位的的抗原。（2）在微量反應(yīng)板的1孔～11孔加入0.025 ml PBS，第12孔加入0.05 ml PBS。（3）吸取0.025 mL血清加入第1孔內(nèi)，充分混勻后吸0.025 ml于第2孔，依次對(duì)倍稀釋至第10孔，從第10孔吸取0.025 ml棄去。（4）1孔～11孔均加入含4個(gè)血凝單位的抗原0.025 ml，室溫(20℃～25℃)靜置30 min。（5）每孔加入0.025 ml體積分?jǐn)?shù)為1%的雞紅細(xì)胞懸液混勻，室溫（20℃～25℃）靜置20～40 min，對(duì)照孔紅細(xì)胞呈顯鈕扣狀沉于孔底時(shí)判斷結(jié)果。（6）結(jié)果判定：減蛋綜合征以完全抑制4個(gè)血凝單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)判為該血清的HI抗體效價(jià)。如果效價(jià)在1:16以上，判定為合格，新城疫以完全抑制4個(gè)血凝單位抗原的血清最高稀釋倍數(shù)判為該血清的HI抗體效價(jià)。如果效價(jià)在1: 16以上，保護(hù)率為90%～100%。

2 結(jié)果與分析

共對(duì)5縣（區(qū)）10個(gè)規(guī)模蛋雞場采送的500份血清進(jìn)行了減蛋綜合征和新城疫免疫抗體檢測(cè)，減蛋綜合征合格409份，合格率81.8%；新城疫合格數(shù)411份，合格率82.2%。山丹縣、臨澤縣減蛋綜合征和新城疫的免疫抗體合格率均較高。檢測(cè)結(jié)果見表。

表 張掖市規(guī)模養(yǎng)雞場EDS76和ND免疫抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 小結(jié)與討論

3.1 李曉東等[3]2008-2011年，每年選取100個(gè)養(yǎng)殖場，每個(gè)養(yǎng)雞場采20份血清，共2000份，用血凝與血凝抑制試驗(yàn)監(jiān)測(cè)減蛋綜合征抗體效價(jià)，合格率分別為83.9%、83.6%、86%、90.3%、86%。說明接種三聯(lián)苗能達(dá)到較好的免疫效果。黃文生等[4]用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，對(duì)使用雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗二倍量飲水免疫及注射新城疫滅活疫苗的5個(gè)養(yǎng)雞場采集血清，進(jìn)行了新城疫血清抗體檢測(cè)。共檢測(cè)180份，平均合格率為96.67%，最高達(dá)100%，最低達(dá)93.33%。從此次檢測(cè)結(jié)果來看，因臨澤縣、山丹縣同時(shí)聯(lián)用了禽流感、新城疫重組二聯(lián)活疫苗，新城疫免疫抗體水平明顯較高，分別達(dá)到95%、100%。與以上兩次報(bào)道的檢測(cè)結(jié)果一致，說明多次接種的免疫方法可以獲得較高水平的免疫抗體。

3.2 免疫接種是防止減蛋綜合征和新城疫發(fā)生的一種即經(jīng)濟(jì)又簡便的有效手段，是預(yù)防和控制該類病的根本措施。此外，還應(yīng)加強(qiáng)科學(xué)管理措施，提高飼養(yǎng)水平，改善飼養(yǎng)環(huán)境，做好衛(wèi)生消毒，盡量減少和防止此類病的傳播。

3.3 從本次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，張掖市5個(gè)縣（區(qū)）隨機(jī)抽查的10個(gè)蛋雞場進(jìn)行了減蛋綜合征、新城疫免疫抗體的檢測(cè)，共檢測(cè)500份雞血清,減蛋綜合征合格409份，合格率81.8%。新城疫合格411份，合格率82.2%。從整體免疫合格率上來講，減蛋綜合征和新城疫雖然達(dá)到了農(nóng)業(yè)部和省獸醫(yī)局關(guān)于動(dòng)物群體免疫合格率≥70%的要求，但還有個(gè)別縣的養(yǎng)殖場還存在群體免疫不合格的風(fēng)險(xiǎn)，說明有些養(yǎng)殖場對(duì)免疫工作的重視程度還不夠。

[1]許春榮,王猛,曹亞丹.雞產(chǎn)蛋下降綜合癥的病因及防治措施[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2006,10:147.

[2]鄭明球,蔡寶祥.動(dòng)物傳染病診治彩色圖譜[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2002.

[3]李曉東,李建民,高潔,等.廊坊地區(qū)雞減蛋綜合征血清學(xué)調(diào)查與免疫技術(shù)研究[A].“創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)、生態(tài)養(yǎng)殖、轉(zhuǎn)型發(fā)展”論文集[C].,2014:3.

[4]黃文生,洪小珠,陳澤金,等.南安市部分規(guī)?；B(yǎng)雞場雞新城疫血清學(xué)調(diào)查與分析[J].福建畜牧獸醫(yī), 2013,05:19-21.

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1003-8655（2016）06-0091-02

執(zhí)筆作者：馬斌（1981），男，張掖民樂縣人，助理畜牧師，主要從事畜牧獸醫(yī)技術(shù)研究推廣工作。