蔣小強，邱紅輝，林長平，何萍，符乃方，蔣盛軍*

(1.海南省東方市畜牧獸醫(yī)局，海南東方572600;2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所，海南儋州571737)

利用中草藥紅茶菌微生態(tài)制劑輔助建立非免疫無疫區(qū)的試點試驗研究

蔣小強1，邱紅輝1，林長平1，何萍1，符乃方2，蔣盛軍2*

(1.海南省東方市畜牧獸醫(yī)局，海南東方572600;2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物品種資源研究所，海南儋州571737)

口蹄疫是國際上畜牧獸醫(yī)學界非常關(guān)注的一個動物疫病。當前口蹄疫的防控主要采用兩種手段，一種是疫苗注射；一種，是撲殺。在發(fā)達國家，口蹄疫的防控主要依靠是撲殺手段來建立非免疫無疫區(qū)。在發(fā)展中國家，主要依靠疫苗注射來防控口蹄疫。為了推進我國的動物疫病防控工作，我國計劃在一些物理隔離條件比較好、疫病防控較好的地區(qū)如海南島、遼東半島、膠東半島開展口蹄疫非免疫無疫區(qū)的建設。2012年，國務院制定和頒布了國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年），對于海南島、膠東半島等地計劃實現(xiàn)口蹄疫非免疫無疫區(qū)。在一些發(fā)達國家和地區(qū)，如日本、韓國、中國臺灣地區(qū)、英國、法國等歐洲國家，都在建立的口蹄疫非免疫無疫區(qū)發(fā)生口蹄疫，由于所有家畜都沒有注射口蹄疫，所有一旦發(fā)病損失慘重。

根據(jù)中草藥益生菌制劑理論，利用中草藥制劑形成的短效口蹄疫疫病防控效果，結(jié)合益生菌菌群持續(xù)產(chǎn)酸形成的長效口蹄疫防控效果，兩者的有機結(jié)合產(chǎn)生的中草藥益生菌制劑使用可以起到相對長效的口蹄疫防控效果，周期性間隔噴霧中草藥益生菌制劑，就也可以起到長期高效防控口蹄疫的作用效果。

我國利用紅茶菌為益生菌制劑菌群，利用甘草、菊花、羅漢果、啤酒花等中草藥提取液為中草藥制劑，利用紅茶菌發(fā)酵上述中草藥提取液，制備獲得中草藥紅茶菌制劑。利用細胞、乳鼠以及豬為動物模型，我們開展了中草藥紅茶菌防控口蹄疫的體外和體內(nèi)的抗病毒試驗，結(jié)果表明：中草藥紅茶菌在體外和體內(nèi)對口蹄疫病毒都有一定的殺滅和抑制作用，并且在大田試驗中預防口蹄疫取得成功【1,2，3】。為了驗證噴霧中草藥紅茶菌是否可以有效預防口蹄疫的感染，我們在某地開展了中草藥紅茶菌預防口蹄疫的大田試驗，預期為中草藥紅茶菌防控口蹄疫提供新的試驗證據(jù)。

1 試驗點的選取和動物分組

由于是大田試驗，為了保證具有口蹄疫病毒的感染源，我們選取一個以前發(fā)生過幾次口蹄疫疫情的豬場開展試驗，這樣盡可能確保豬場的豬群攜帶有口蹄疫病毒。為確保試驗結(jié)果的客觀真實性，選取春季、冬季重復進行兩次試驗。至少選取體重、年齡相近（一月齡）的75頭未注射過口蹄疫疫苗的小豬作為樣本,采血進行ELISA口蹄疫檢測，則將其隨機分為空白組、試驗組和疫苗注射組，每組25頭豬。分別對每頭豬標號，將其飼養(yǎng)于環(huán)境相似、距離盡量遠的圈舍，分組后正常飼養(yǎng)兩周,使豬群適應新的群體后再開展試驗。

2 給藥處理階段

三組豬群的飼養(yǎng)管理方式應保持一致。對照組小豬在試驗過程中不做任何處理；對處理組的豬口鼻噴濃度為20%的中草藥紅茶菌制劑100mL/頭，每周噴藥1次，連續(xù)噴藥4周；疫苗注射組小豬在試驗開始時注射口蹄疫疫苗。在試驗期間觀察并記錄豬群的健康狀況。

3 試驗檢測階段

在給藥處理前及試驗結(jié)束后，每頭豬分別稱重并采血7-8mL,置于冰盒中帶回試驗室分離血清。用口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測ELISA試劑盒（中國農(nóng)科院蘭州畜牧獸醫(yī)研究所研制）檢測試驗豬是否存在口蹄疫感染情況?？谔阋卟《痉墙Y(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測ELISA試劑盒用于檢測動物血清中口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，適用于動物群體感染狀況監(jiān)測和評估、發(fā)現(xiàn)早期隱性感染和進出境檢疫，不受血清型的限制。

4 試驗數(shù)據(jù)分析階段

通過SPSS統(tǒng)計分析軟件,分析各組之間的統(tǒng)計學差異，以P＜0.05表示有顯著性統(tǒng)計學意義。

5 結(jié)果與討論

項目試驗按計劃分兩次在某豬場展開，每次75頭豬，分為試驗組、疫苗組、空白組，每組25頭。用口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體檢測ELISA試劑盒對150頭豬的血清標本的分析后，判定統(tǒng)計結(jié)果見表。

由表中可知一期試驗、二期試驗都有陽性樣本存在，推測原因是該豬場由于前幾年發(fā)生過口蹄疫疫情，環(huán)境中仍然有口蹄疫病毒存在，口蹄疫病毒未徹底凈化，導致試驗期發(fā)生感染情況。一期樣本中感染率為24%，二期樣本感染率為5.3%，經(jīng)過卡方檢驗得知，二期試驗發(fā)病率極顯著低于一期試驗（P=0.001），推測原因是豬場在一期試驗檢測出陽性樣本后，加強了日常消毒管理，并采用漏縫地板養(yǎng)殖，降低了感染率。

表1 豬試驗前后血清檢測以及分析結(jié)果

表2 不同試驗期判定結(jié)果分析

表3 三組預防口蹄疫效果分析

試驗組、疫苗組、空白組預防口蹄疫成功的豬分別有42、45、41頭，失敗的分別有3、4、9頭。經(jīng)過卡方檢驗試驗組和疫苗組的預防效果差異不顯著（P=0.782）。試驗組和空白組的預防效果雖未達到統(tǒng)計學意義上的顯著水平（P=0. 097＞0.05），但從數(shù)據(jù)上可以看出紅茶菌制劑確實對口蹄疫有一定的預防作用，兩組間差異已接近顯著水平。疫苗組和空白組的預防效果差異也不顯著（P=0.147）。由于口蹄疫疫苗對口蹄疫的預防作用是確信已知的，之所以出現(xiàn)統(tǒng)計學上的不顯著狀況，推測原因是試驗樣本量偏小，造成統(tǒng)計分析的結(jié)果發(fā)生了偏差。

6 試驗組和疫苗組治療口蹄疫效果分析

組別成效合計治療成功治療失敗試驗組505疫苗組101

一期試驗中，由試驗前陽性的轉(zhuǎn)為試驗后陰性的，即口蹄疫痊愈的豬，試驗組有5頭，疫苗組有1頭，兩組中患病的豬在試驗結(jié)束后都已痊愈。

7 小結(jié)

中草藥紅茶菌具有多種抗口蹄疫的作用機制，對豬口鼻噴霧中草藥紅茶菌，可以形成預防口蹄疫的三道防線：第一道防線，噴霧的中草藥紅茶菌可以分散到整個豬圈，殺滅和抑制豬圈以及周圍環(huán)境的口蹄疫的存活和繁殖。這個殺滅和抑制機制，中草藥提取液可以起到一定的短時作用，更重要的時紅茶菌中的醋酸菌和酵母等復合益生菌可以持續(xù)產(chǎn)生大量有機酸拮抗口蹄疫病毒。口蹄疫病毒是一個對酸非常敏感的病毒。其次，對豬口鼻噴霧中草藥紅茶菌可以同時進入消化道和呼吸道，尤其是呼吸道。呼吸道是口蹄疫感染豬的主要途徑。因此，中草藥紅茶菌可以殺滅或抑制進入消化道和呼吸道的口蹄疫病毒，形成預防口蹄疫感染的第二道防線。第三道防線，對豬口鼻噴霧的時候，豬會從口腔吸入大量中草藥紅茶菌，中草藥紅茶菌的有效抗病毒成分會進入血液，在體內(nèi)起到殺滅和抑制口蹄疫病毒作用，從而形成預防口蹄疫的第三道防線。外界漂移進入的口蹄疫感染源，要進入利用中草藥紅茶菌防控的豬場，必須通過這三道防線，這種感染幾率是非常小的。所以，利用噴霧中草藥紅茶菌可以有效預防豬、牛等家畜的口蹄疫。本試驗的結(jié)果也再次證明這一點。由于數(shù)量相對不夠大，進一步擴大豬群的試驗規(guī)模，將會取得更有信服的數(shù)據(jù)。

[1]NaifangFu,Juncai Wu,Lv Lv,Jijun He,Shengjun Jiang. Anti-foot-and-mouth disease virus effects ofChinese herbal kombucha in vivo.Brazilian Journal of Microbiology.2015;46(4):1245-55.

[2]符乃方，吳俊才，符啟俊，呂律，何繼軍，李開綿，葉劍秋，蔣盛軍，蔣小強，邱紅輝，高李澤，何萍，謝崢嶸，陳吉雄.中草藥紅茶菌的制備及其體外抗口蹄疫病毒活性.安徽農(nóng)業(yè)科學,，42(17):5500－5502,2014

[3]符乃方，吳俊才，符啟俊，呂律，何繼軍，李開綿，葉劍秋，蔣盛軍，蔣小強，邱紅輝，高李澤，何萍，謝崢嶸，陳吉雄.中草藥紅茶菌的制備及其體內(nèi)抗口蹄疫病毒活性.安徽農(nóng)業(yè)科學,，42(18):5892－5894，5908,2014

S853.71

B

1003-8655（2016）06-0004-02

*通訊作者，蔣盛軍，博士，副研究員，18708938111@139.com