蘇　 彬，傅　 泳，侯小東，張超英，梁 惠，*（. 青 島大學公共衛(wèi)生學院，山東 青島 660；. 中國農業(yè)科學院煙草研究所，山東　 青島　 6600）

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煙草種子油的毒理學評價

蘇 彬1，傅 泳1，侯小東2，張超英1，梁 惠1，*
（1. 青 島大學公共衛(wèi)生學院，山東 青島 266021；2. 中國農業(yè)科學院煙草研究所，山東 青島 266100）

【摘要】目的： 研究煙草種子油的毒理學安全性。方法：參照衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》，采用急性經口毒性試驗，檢測煙草種子油有無急性毒性作用；采用Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗和小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗3項遺傳毒性試驗，檢測煙草種子油有無致突變作用；采用30 d喂養(yǎng)試驗檢測煙草種子油亞慢性毒性。結果：小鼠14 d內未見中毒和死亡現象，即煙草種子油對小鼠的半數致死劑量(LD50)>21 500 mg/kg；Ames試驗中煙草種子油各劑量組回變菌落數均未超過自發(fā)回變菌落數2倍，亦無劑量-效應關系，4株試驗菌株，在加與不加S9時，均未呈現陽性結果；小鼠骨髓細胞微核試驗中煙草種子油各劑量組小鼠的微核率在正常范圍內，與陰性對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P 均>0.05)；小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗中陽性對照組染色體畸變率明顯大于陰性對照組，煙草種子油各劑量組的染色體畸變率與陰性對照組間的差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；30 d喂養(yǎng)結束后，未見試驗動物有中毒及死亡狀況，煙草種子油各劑量組的體質量、食物利用率、臟體比、血常規(guī)及血液生化指標與空白對照組相比均在正常范圍內(P>0.05)；病理組織學檢查除煙草種子油高劑量組部分肝組織中見少量脂肪空泡外，各組大鼠主要臟器未見明顯病理學改變。結論：在本實驗條件下，煙草種子油未見明顯的急性毒性，無致突變作用及亞慢性毒性作用。

【關鍵詞】煙草種子油；安全性；急性經口毒性試驗；遺傳試驗；致突變；30 d喂養(yǎng)試驗

作者信息： 蘇 彬，E-mail：948292544@qq.com。*通信作者，梁 惠，E-mail：qdlianghui@126.com

Toxicity evaluation of tobacco seed oil

SU Bin1，FU Yong1，HOU Xiaodong2，ZHANG Chaoying1，LIANG Hui1，*
(1. School of Public Health, Qingdao University, Qingdao 266021; 2. Tobacco Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Qingdao 266100, Shandong, China)

【ABSTRACT】OBJECTIVE: To evaluate the toxicity and safety of tobacco seed oil in mice. METHODS：Mice were orally exposed to tobacco seed oil for 14 and 30 days according to Care Food Inspection and Evaluation of Technical Specifications. Three genetic toxicology tests were used to evaluate mutagenic effects. In addition thirty day feeding test was conducted to detect sub-chronic toxicity. RESULTS：There was no evidence of toxicity or death in mice within 14 day，which indicated the median lethal dose (LD50) was more than 21 500 mg/kg. In the Ames test，the revertant colonies numbers in each dose group were two times less than the numbers of spontaneous revertant colonies，and no doseresponse relationship occurred. Four bacterial strains did not show positive results with or without S9 activation. In the mouse bone marrow cell micronucleus test，the rates from the exposed groups were similar to that of the negative control group (P>0.05). In the mouse bone marrow cell chromosome aberration test，the rates from the exposed groups were no significantly difference with the negative control group. After feeding for 30 days，there was no poisoning and death in the exposed mice. There was no significant difference from the control group in body weight，food utilization，organ-body ratios，and blood biochemical indexes. Histopathologic examination showed that fat vacuoles were observed in the liver tissue of high-dose group，but the other main organs of mice in the other groups had no pathological changes. CONCLUSION：Tobacco seed oil was non-toxic and did not show potentially mutagenic effects and sub-chronic toxicity within the text d oses.

【KEY W ORDS】tobacco s eed o il；safety；acute t oxicity t est；genetic t oxicity t est；mutagenesis；30 d ays f eeding t est

煙草種子油從煙草種子中提取，其含油量為35.9%～42.0%，平均為39.4%，不同類型不同品種變異不大。煙草種子油中脂肪酸含量較高，主要飽和脂肪酸為棕櫚酸、硬脂酸，不飽和脂肪酸為油酸、亞油酸、亞麻酸。不飽和脂肪酸含量77.1%～82.5%，亞油酸含量最高，平均為71.6%，是橄欖油的4～5倍。其主要成分不飽和脂肪酸是人體不能自身合成的，它們一方面可以促進膽固醇的代謝，降低血液中低密度脂蛋白膽固醇和血總膽固醇[1]；另一方面可以軟化血管，維持毛細血管的健康，從而預防和治療高血壓、動脈硬化等心腦血管疾病。因此對煙草種子油的急性毒性、遺傳毒性等方面進行安全性評價，為后期煙草種子油的開發(fā)利用提供安全性保障至關重要。目前，關于煙草種子油的毒理學安全性評價鮮有報道，本實驗根據中華人民共和國《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》，通過大鼠經口急性毒性試驗、Ames試驗、小鼠骨髓微核試驗、小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗及30 d喂養(yǎng)試驗[2-3]，對其進行毒理學評價，為其以后的研究開發(fā)提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 受試物 煙草種子油由中國農業(yè)科學院煙草研究所提供，為淡黃色油狀物，貯存于干燥、密封處。

1.1.2 實驗動物與環(huán)境 昆明種小鼠120只，SD大鼠80 只(許可證號為SCXK魯20130001)，雌雄各半，飼料及動物均購自山東魯抗醫(yī)藥集團有限公司。動物實驗室條件為SPF級動物實驗室，濕度40%～70%，溫度20～24℃。在青島大學醫(yī)學院營養(yǎng)所飼養(yǎng)3 d 以適應環(huán)境。

1.1.3 試驗菌株 組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102，經鑒定符合試驗要求。

1.2 試驗方法

1.2.1 小鼠急性經口毒性試驗 采用霍恩氏法，選用健康昆明種小鼠20只，體質量20～25 g，按完全隨機化的方法，將小鼠分為4組，每組5只，給予基礎飼料、水，適應性喂養(yǎng)3 d，確定其為健康小鼠。通過預實驗確定正式試驗的劑量分別為2.15、4.64、10.00、21.50 g/kg。分別對各組小鼠進行灌胃，一次性給予受試物，并觀察小鼠灌胃后的狀況，連續(xù)觀察14 d，記錄中毒和死亡情況。

1.2.2 Ames試驗 采用組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102共4個試驗菌株。代謝活化系統(tǒng)為多氯聯苯(polychlorodiphenyls， PCBs)誘導的大鼠肝勻漿S9液。試驗設8、40、200、1 000、5 000 μg/皿5個劑量組，每個劑量組做3個平行皿，同時設空白對照(雙蒸水)、二甲基亞砜(dimethyl s ulfoxide，DMSO)對照和陽性對照組(陽性對照物為敵克松，疊氮鈉，2-氨基芴，1，8-二羥蒽醌)。稱取樣品1.25 g，用DMSO溶解并定容至25 mL，混勻，0.055 Mpa壓力下滅菌20 min，4 ℃存放備用。臨用前將以上溶液按1∶4依次用DMSO稀釋成以下濃度：50 000 μg/mL(原液)、10 000、2 000、400、80 μg/mL。采用標準平皿滲入法，每個受試濃度做3個平行皿。在頂層瓊脂中加入0.1 mL試驗菌液、0.1 mL受試樣品溶液(溶劑對照加入0.1 mL滅菌DMSO)和0.5 mL S9混合液(當需要代謝活化時)，混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。37 ℃培養(yǎng)48 h，計數每皿回變菌落數，重復2次。

1.2.3 小鼠骨髓細胞微核試驗 選用體質量在25～30 g健康昆明種小鼠50只，隨機分為5組，即生理鹽水陰性對照組(10 g/kg)，煙草種子油低、中、高劑量組(分別為2.5、5、10 g/kg)和環(huán)磷酰胺陽性對照組(40 mg/kg)，每組雌雄各5只。采用30 h給予受試物法，即2次給受試物間隔24 h，第2次給受試物6 h后，頸椎脫臼處死動物，取股骨，用生理鹽水沖洗骨髓腔，將懸液1 500 r/min，離心10 min后，制成細胞懸液涂片，自然干燥后放入甲醇中固定10 min，再放入Giemsa應用液中，染色5 min后，用蒸餾水沖洗晾干，寫好標簽，于陰涼干燥處保存后閱片。每只動物觀察1 000個嗜多染紅細胞，計算微核率。

1.2.4 小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗 選用體質量在25～30 g健康昆明種小鼠50只，動物分組及各組處理方法同微核試驗，于處死動物前6 h按4 mg/kg注射秋水仙素，頸椎脫臼處死動物。制備標本，閱片。每只動物分析100個中期相細胞，每個劑量組不少于1 000個中期相細胞，觀察染色體結構和數目的改變。

1.2.5 30 d喂養(yǎng)試驗 選用健康SD大鼠80只，雌雄各半，按體質量隨機分為4組，即空白對照組，煙草種子油低、中、高劑量組(分別為5、10、20 g/kg)，每組雌雄各10只[4]，每只大鼠單籠飼養(yǎng)，適應性喂養(yǎng)3 d后，采用飼喂給予受試物的方式，將煙草種子油摻入飼料中，攪拌機攪拌均勻，按體質量的10%折算，將受試物劑量按每100 g體質量攝入的量折算為飼料量，每只大鼠用苦味酸標記，每天觀察進食及活動情況，每周稱取體質量并記錄食物攝入量。30 d后，將大鼠用7%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血8～10 mL，取部分血樣3 500 r/min離心10 min留取血清，測定血常規(guī)及血液生化指標；取完整肝臟、腎、脾、睪丸、卵巢及部分胃和小腸稱取質量，分別切取1～2 mm3組織放入甲醛溶液中固定，制備肝臟、腎、脾、睪丸、卵巢、胃和小腸病理學切片，觀察有無病變。

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，數據以表示，多組間比較采用方差分析，率的比較采用卡方檢驗，以α=0.05為檢驗水準。

2 結 果

2.1 急性經口毒性試驗

灌胃后14 d，各劑量組的小鼠均無明顯中毒癥狀及死亡表現，行為表現及進食情況均正常，根據霍恩氏法判斷，LD50>21 500 mg/kg。按急性毒性分級標準，煙草種子油屬無毒級。

2.2 遺傳毒性試驗

2.2.1 Ames試驗 2次重復測試的實驗結果見表1。受試樣品各劑量組回變菌落數均未超過自發(fā)回變菌落數2倍，亦無劑量－效應關系，對鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102，在加與不加S9時，均未呈現陽性結果。

表1 煙草種子油對鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102回變菌落數的影響

表1 煙草種子油對鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102回變菌落數的影響

陽性對照：TA97、TA98、TA102不加S9為敵克松50 μg/皿；TA100 不加S9為疊氮鈉2.5 μg/皿；TA97、TA98、TA100加S9為2-氨基芴10 μg/皿；TA102加S9為1，8-二羥蒽醌50 μg/皿.

組別　TA97　TA98　TA100　TA102 -S9　+S9　-S9　+S9　-S9　+S9　-S9　+S9煙草種子油 5 000 μg/皿　125±11　 137±12　33±3　38±4　143±10　 148±11　 251±22　 246±22 1 000 μg/皿　133±12　 129±14　30±3　36±4　137±15　 133±14　 247±26　 254±24 200 μg/皿　119±9　134±11　36±5　34±2　135±13　 140±10　 263±23　 249±22 40 μg/皿　126±13　 119±9　40±4　35±3　148±11　 139±12　 256±21　 260±24 8 μg/皿　141±14　 133±11　35±4　29±4　151±13　 142±16　 245±20　 252±25空白對照組　137±15　 126±10　32±3　37±4　145±12　 149±15　 243±24　 250±23溶劑對照組　128±12　 135±11　37±2　41±4　138±13　 145±14　 253±20　 259±19陽性對照組　1 310±152　 1 585±220　 1 067±96　 1 454±124　 2 270±204　 1 638±201　 1 995±243　 1 423±152

2.2.2 小鼠骨髓細胞微核試驗 小鼠骨髓細胞微核試驗結果見表2。雌、雄小鼠陰性對照組微核率分別為2.1‰±0.1‰、2.0‰±1.0‰，陽性對照組微核率高達12.2‰±2.4‰、12.6‰±3.3‰，明顯高于陰性對照組(P<0.05)，煙草種子油各劑量組小鼠的微核率與陰性對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2.3 小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗 小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗結果見表3。陽性對照組染色體畸變率明顯大于陰性對照組(P<0.05)。煙草種子油各劑量組的染色體畸變率與陰性對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2 煙草種子油對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率的影響

表2 煙草種子油對小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核率的影響

與陰性對照組比較，*P<0.05.

組別　　觀察細胞數(個)微核細胞數(個)　　微核率(‰)雄雌　雄　雌　雄　雌陰性對照組　5 000 5 000　 27　 23　 2.1±0.1　 2.0±1.0煙草種子油 10 g/kg 5 000 5 000　 35　 41　 2.4±1.1　 2.8±1.0 5 g/kg 5 000 5 000　 32　 31　 2.2±1.3　 2.2±0.8 2.5 g/kg 5 000 5 000　 22　 21　 1.9±0.8　 1.8±1.0陽性對照組　5 000 5 000　 102　 109　 12.2±2.4*12.6±3.3*

表3 煙草種子油對小鼠骨髓細胞染色體畸變率影響

表3 煙草種子油對小鼠骨髓細胞染色體畸變率影響

c：染色體斷裂；d：粉碎；e：環(huán)狀染色體；f：易位；g：微小體. 與陰性對照組比較，*P<0.05.

組別　　觀察細胞數　多倍體畸變　　染色體結構畸形改變　　畸變細胞數　　畸變率(‰) cdefg陰性對照組　1 000　0　2　0　0　0　1　3　3煙草種子油 2.5 g/kg　 1 000　0　1　3　1　1　2　8　8 5 g/kg　 1 000　0　1　2　1　0　1　5　5 10 g/kg 　1 000　0　1　0　1　1　1　2　4陽性對照組　1 000　2　13　5　2　6　10　38　38*

2.3 30 d 喂養(yǎng)試驗

2.3.1 一般狀況 實驗期間對照組和煙草種子油各劑量組大鼠生長及行為狀態(tài)良好，各組大鼠均無中毒、死亡和其他異常癥狀。

2.3.2 煙草種子油對大鼠體質量及食物利用率的影響 煙草種子油各劑量組雌、雄大鼠每周的體質量與各自的對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05，具體數據略)。表明煙草種子油對大鼠每周的體質量無明顯影響。

煙草種子油對大鼠食物利用率的影響結果見表4。煙草種子油各劑量組大鼠的增重、總進食量及食物利用率與同性別的對照組大鼠相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，從而表明其對大鼠的生長發(fā)育無明顯影響。

2.3.3 煙草種子油對大鼠臟體比的影響 煙草種子油對大鼠臟體比的影響結果見表5。煙草種子油各劑量組大鼠的主要臟器(肝、腎、脾、睪丸)質量與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，且均在正常范圍之內。各劑量組大鼠主要臟器的臟體比與同性別對照組相比，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。可認為煙草種子油喂養(yǎng)30 d后大鼠的臟器無明顯改變。

2.3.4 煙草種子油對大鼠血常規(guī)指標的影響 煙草種子油對大鼠血常規(guī)指標的影響結果見表6和表7。煙草種子油喂養(yǎng)30 d后，各劑量組雌雄大鼠的血小板、紅細胞計數、白細胞計數及血紅蛋白均在正常值范圍之內，且與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。說明煙草種子油對大鼠血常規(guī)指標無顯著影響。

表4 煙草種子油對大鼠食物利用率的影響

表4 煙草種子油對大鼠食物利用率的影響

性別　　組別　　增重(g)　　總進食量(g)食物利用率(%)雄　對照組　122.6±20.18 655.6±16.18　 18.7±2.74煙草種子油 2.5 g/kg 112.6±18.74 653.8±30.97　 17.1±2.12 5 g/kg 143.6±52.92 663.7±42.74　 21.3±6.82 10 g/kg 144.3±36.49 672.9±35.51　 21.4±4.42雌　對照組　120.6±21.91 633.5±31.46　 18.9±2.58煙草種子油 2.5 g/kg 103.1±28.06 599.8±64.52　 17.1±4.46 5 g/kg 105.4±35.55 607.9±85.29　 16.9±4.84 10 g/kg 135.6±13.28 639.6±28.25　 21.2±2.02

表5 煙草種子油對大鼠臟體比的影響

表5 煙草種子油對大鼠臟體比的影響

性別　　組別　　空腹體質量(g)　　肝/體(%)　　腎/體(%)　　脾/體(%)　　睪丸/體(%)雄　　對照組　290.0±31.77　3.26±0.350　0.668±0.098　0.327±0.107　0.831±0.152煙草種子油 2.5 g/kg 　282.0±24.97　3.54±0.306　0.761±0.067　0.392±0.153　0.901±0.089 5 g/kg 　302.1±55.10　3.67±0.419　0.787±0.104　0.403±0.203　0.869±0.104 10 g/kg 　329.7±53.19　3.49±0.424　0.713±0.079　0.369±0.081　0.852±0.231雌　　對照組　254.5±25.67　3.92±0.161　0.734±0.087　0.402±0.202　-煙草種子油 2.5 g/kg 　245.3±34.83　3.88±0.308　0.799±0.079　0.298±0.084　-5 g/kg 　248.5±41.13　3.89±0.334　0.756±0.108　0.340±0.109　-10 g/kg　269.6±20.68　3.88±0.291　0.684±0.024　0.345±0.152　-

表6 煙草種子油對大鼠血常規(guī)指標的影響

表6 煙草種子油對大鼠血常規(guī)指標的影響

性別　　組別　　血小板　　紅細胞計數　　白細胞計數　　血紅蛋白雄　　對照組　653.8±211.1　8.12±0.47　14.54±6.16　149.8±7.5煙草種子油 2.5 g/kg 　730.5±286.3　7.47±0.60　19.40±9.27　142.6±9.4 5 g/kg 　872.2±194.5　8.05±0.85　 17.09±10.32　143.3±14.4 10 g/kg 　778.8±303.5　7.78±0.47　19.09±7.34　145.1±11.4雌　　對照組　871.9±166.4　7.24±0.36　15.17±9.92　135.9±7.82煙草種子油 2.5 g/kg 　957.9±160.5　7.58±0.66　12.10±6.86　144.0±9.84 5 g/kg 　869.4±153.7　7.92±0.74　12.08±2.74　148.1±16.7 10 g/kg 　846.1±328.2　7.45±0.47　11.97±4.71　140.7±7.71

表7 煙草種子油對大鼠白細胞分類的影響

表7 煙草種子油對大鼠白細胞分類的影響

性別　　組別　　單核細胞百分比(%)淋巴細胞百分比(%)嗜堿性細胞百分比(%)嗜酸性細胞百分比(%)網織紅細胞百分比(%)中性粒細胞百分比(%)雄　　對照組　3.46±2.58　 78.48±17.11　 0.109±0.094　 0.653±0.636　 2.87±1.06　 17.45±8.12煙草種子油 2.5 g/kg 　3.85±1.60　 79.95±10.66　 0.074±0.123　 0.554±0.342　 4.25±2.43　 16.58±11.46 5 g/kg 　4.00±2.09　 82.91±5.62　 0.069±0.042　 0.478±0.386　 3.82±1.11　 12.69±4.50 10 g/kg 　3.86±1.46　 80.32±4.01　 0.091±0.049　 0.491±0.141　 4.12±0.87　 15.51±3.34雌　　對照組　4.12±3.62　 79.92±12.81　 0.102±0.213　 0.832±0.557　 3.09±0.74　 15.03±3.30煙草種子油 2.5 g/kg 　3.72±1.79　 82.87±7.10　 0.076±0.060　 0.506±0.189　 2.59±0.96　 14.01±7.50 5 g/kg 　4.01±2.15　 81.65±8.53　 0.073±0.050　 0.729±0.420　 3.65±1.87　 13.73±7.23 10 g/kg 　4.13±2.80　 83.44±6.83　 0.079±0.306　 0.562±0.477　 3.99±2.24　 11.94±5.41

2.3.5 煙草種子油對大鼠生化指標的影響 煙草種子油對大鼠生化指標的影響結果見表8和表9。煙草種子油喂養(yǎng)30 d后，各劑量組雌雄大鼠的總膽固醇、血糖、肌酐及尿素氮均在正常值范圍之內，且與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。

2.3.6 病理學檢查 各劑量組大鼠大體解剖肉眼觀察各臟器未見明顯異常，選擇對高劑量組和對照組雌雄大鼠進行組織病理學檢查。鏡下檢查，各劑量組與對照組的肝、腎、脾、胃、腸、卵巢、睪丸等組織結構較完整，細胞形態(tài)正常，界限清晰，未見充血及炎性浸潤等明顯病變，極少數大鼠出現輕微病理改變，但這些病理改變均無組間特異性[5-6]，可能為試驗動物在試驗過程中自發(fā)產生或其他非試驗因素所致，高劑量組有4只大鼠(雄性3只，雌性1只)肝組織中可見輕度脂肪空泡。結果表明煙草種子油對大鼠肝、腎、脾、胃、腸、卵巢、睪丸等臟器沒有明顯毒性，可能具有一定的致肝臟脂肪變性作用。

表8 煙草種子油對大鼠生化指標的影響

表8 煙草種子油對大鼠生化指標的影響

性別　　組別　　甘油三酯　　總膽固醇　　血糖　　肌酐　　尿素雄　　對照組　0.59±0.19　2.05±0.44　7.21±1.07　40.2±4.87　5.04±1.05煙草種子油 2.5 g/kg 　0.30±0.50　1.81±0.30　7.19±2.58　40.6±4.03　5.20±1.29 5 g/kg 　0.38±0.10　1.79±0.28　7.34±1.97　40.1±6.89　5.70±1.86 10 g/kg 　0.34±0.07　1.85±0.36　6.32±2.19　38.4±4.19　4.81±0.79雌　　對照組　0.51±0.50　2.15±0.27　7.32±2.51　36.7±3.16　7.22±1.81煙草種子油 2.5 g/kg 　0.44±0.29　1.94±0.36　7.90±1.75　41.7±6.88　6.35±1.48 5 g/kg 　0.49±0.40　2.06±0.32　7.74±2.52　41.2±6.78　6.76±1.52 10 g/kg 　0.49±0.37　1.99±0.43　7.12±1.89　43.1±9.16　5.71±1.21

表9 煙草種子油對大鼠生化指標的影響

表9 煙草種子油對大鼠生化指標的影響

性別　　組別　　總蛋白(TP)　　白蛋白(ALB)　　谷草轉氨酶(AST)　　谷丙轉氨酶(ALT)雄　　對照組　61.4±3.17　26.6±1.59　160.3±12.2　73.0±13.4煙草種子油 2.5 g/kg 　67.7±5.67　27.6±1.26　154.3±10.8　70.0±10.5 5 g/kg 　69.1±8.67　27.7±1.67　138.0±13.8　60.2±10.2 10 g/kg 　65.4±4.17　27.0±1.53　128.7±12.1　64.7±17.8雌　　對照組　62.5±2.73　38.6±2.82　129.0±14.2　67.1±19.9煙草種子油 2.5 g/kg 　64.5±2.41　32.7±10.1　108.2±14.8　53.8±13.6 5 g/kg 　63.2±6.91　29.3±2.66　102.7±10.8　59.0±11.7 10 g/kg 　65.1±4.02　35.1±11.3　101.5±14.4　54.0±14.6

3 討 論

隨著保健品的開發(fā)，油料作物中的不飽和脂肪酸、黃酮等物質越來越受到人們的關注，新型高附加值的產品如“橄欖油膠囊”、“葡萄籽油膠囊”等逐漸被開發(fā)，隨之而來的安全性問題亦成為產品銷售和推廣的主要阻礙。文冠果籽含油量為55%～65%，其中油酸30%、亞油酸為42.9%，具有預防和治療高血壓、血管硬化等心血管病的效果，在對文冠果籽油的毒理學評價中明確其無明顯毒作用[7-8]；辣木籽油含有高達80%以上的不飽和脂肪酸，其中油酸含量在62%～75%[9-10]，食用辣木籽油可以護肝[11]、預防肝硬化[12]、抗氧化[13]、抗胃潰瘍、降血糖等，段瓊芬等[14]在對其進行安全性毒理學評價時指出其是安全無毒的可食用油脂；共軛亞油酸因雙鍵的共軛效應，而具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、增強機體免疫力等多重生理功能，目前已應用于食品添加劑和醫(yī)藥領域。不少研究在對其進行安全毒理學評價時指出，共軛亞油酸是一種安全的食用油脂，可作為食用級油脂應用在食品、添加劑、醫(yī)藥等行業(yè)[15-19]。

本文中煙草種子油成分主要為不飽和脂肪酸，其中亞油酸含量較高，約為71.6%，其可能有不飽和脂肪酸的生物活性。目前國內較煙草種子油的活性研究較少，且在其毒性方面鮮有報道，因此本研究為其實際應用開發(fā)提供相關依據。

急性毒性試驗通常是指經口一次性給予或24 h內多次給予受試物后，在短時間內動物所產生的毒性反應及死亡情況，是認識和研究藥物對機體毒性反應的第一步。本實驗采用霍恩氏法，所得LD50>21 500 mg/kg，按急性毒性分級標準[20]，煙草種子油屬無毒級。這一結果為進一步設計相關毒性試驗提供材料，可為研發(fā)價值的早期調研提供重要信息。

鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗(Ames試驗)結果顯示，受試樣品各劑量組回變菌落數均未超過自發(fā)回變菌落數2倍，亦無劑量-效應關系，鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102共4株試驗菌株，在加與不加S9液時，均未呈現遺傳毒性。

小鼠骨髓細胞微核試驗及染色體畸變試驗，結果雌雄小鼠煙草種子油高、中、低劑量組的微核率均顯著低于陽性對照組(P<0.05)，陽性對照組微核率明顯高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。小鼠骨髓細胞染色體畸變試驗顯示，雌雄小鼠煙草種子油高、中、低劑量組的染色體畸變率均低于陽性對照組，差異具有顯著性(P<0.05)，陽性對照組細胞畸變率明顯高于陰性對照組，經統(tǒng)計分析，差異有統(tǒng)計學意義(P< 0.05)。以上結果表明在本實驗條件下，煙草種子油對小鼠骨髓細胞無抑制作用和遺傳毒性。

30 d喂養(yǎng)試驗中，大鼠連續(xù)30 d喂飼不同劑量的煙草種子油，各劑量組動物生長、發(fā)育狀況良好，無中毒及死亡現象；各劑量組雌雄大鼠體質量、增重、食物利用率等均無不良影響，表明煙草種子油對大鼠的正常生長發(fā)育和食物吸收代謝等無明顯影響。各劑量組的血常規(guī)、生化指標及動物臟體比均在正常范圍之內，與同性別的對照組相比無顯著性差異；各劑量組大鼠主要臟器解剖后除肝臟見少量脂肪空泡外未見明顯異常，各組織病理學觀察未見非可逆性病理變化。綜上所述，煙草種子油30 d喂養(yǎng)試驗結果表明其對大鼠生長發(fā)育、代謝無不良影響；對大鼠增重、進食量、食物利用率、血常規(guī)、血生化、臟體比及主要臟器病理組織學均未見異常。

綜上所述，煙草種子油在本實驗劑量范圍內未見明顯的毒副作用，無致突變作用，安全性較高。

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基金項目：十二五農村領域國家科技計劃課題(2012BAD33B01-2)

收稿日期：2015-09-01；

修訂日期：2015-12-29

中圖分類號：R114

文獻標志碼：A

文章編號：1004-616X(2016)01-0060-06

doi:1 0.3969/j.issn.1004-616x.2016.01.013