胡月，劉萌萌，侯志廣，趙曉峰，張浩（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，吉林長春130118）

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平菇和榆黃蘑中吡唑醚菌酯殘留動態(tài)研究

胡月，劉萌萌，侯志廣，趙曉峰，張浩*
（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，吉林長春130118）

摘要：利用液相色譜儀建立吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑中殘留分析方法，測定吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑及培養(yǎng)料中的消解動態(tài)規(guī)律。結(jié)果表明：吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑及培養(yǎng)料中的消解半衰期分別為2.8、2.9 d和14.1 d。培養(yǎng)料滅菌會減少吡唑醚菌酯的殘留量。平菇和榆黃蘑及在含有吡唑醚菌酯的培養(yǎng)料中栽培90 d后，培養(yǎng)料中供試農(nóng)藥殘留量0.68 mg/kg，在收獲期同步采集的平菇和榆黃蘑子實體中均未檢測到吡唑醚菌酯的殘留量。因此，培養(yǎng)料中吡唑醚菌酯殘留不會向平菇和榆黃蘑子實體轉(zhuǎn)移，對食用菌產(chǎn)品質(zhì)量安全的影響較小。

關(guān)鍵詞：平菇；榆黃蘑；培養(yǎng)料；吡唑醚菌酯；消解動態(tài)

隨著人們對食用菌安全的關(guān)注度越來越高，食用菌作為純天然食品具有獨特的食用和藥用及保健功效，已受到世界各國的廣大消費者普遍青睞[1-2]。但是食用菌在生產(chǎn)過程中，容易受到農(nóng)藥污染，給人類的健康帶來危害[3-4]。因此，研究農(nóng)藥在食用菌上的殘留量，評價農(nóng)藥在食用菌上的安全性具有重要意義。吡唑醚菌酯均屬于高效廣譜殺菌劑，可應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的多種病害防治[5-6]。目前有關(guān)吡唑醚菌酯在作物、蔬菜上的殘留降解均有報道[7-8]，但在食用菌上的消解動態(tài)的報道甚少。本試驗建立了吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑上殘留的分析方法，研究了吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑及培養(yǎng)料中的消解動態(tài)規(guī)律，為指導(dǎo)吡唑醚菌酯在平菇、榆黃蘑上的合理安全使用提供了科學(xué)參考。

1材料與方法

1.1材料與試劑

平菇、榆黃蘑：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌基地提供。

平菇、榆黃蘑培養(yǎng)料：50 %玉米芯、35 %高粱殼、14 %木屑、1 %石灰，按上述配方混勻發(fā)酵15 d，在0.10 kPa，121℃高溫滅菌180 min。

丙酮、正己院、氯化鈉、無水硫酸鈉、乙腈（均為分析純）：北京化工廠；弗羅里硅土（60目~100目）：德國Riedel-De Haen公司。

供試農(nóng)藥：吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.5 %）、25 %吡唑醚菌酯乳油：均由巴斯夫（中國）有限公司提供。

1.2儀器與設(shè)備

HP 1100高效液相色譜系統(tǒng)（配有可變波長紫外檢測器和Rev.A.06.03色譜工作站）：美國惠普公司；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；SHB-111型循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城儀器有限公司；THZ-82B氣浴恒溫振蕩器：江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠；JJ-2型組織搗碎勻漿機：江蘇省金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠。

1.3方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確秤取吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品，配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后再用此標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級分別稀釋成0.05、0.1、0.5、1.0、5.0 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吡唑醚菌酯的線性方程為y = 24.08x-0.687 1，相關(guān)系數(shù)r =0.999 7。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制采用外標(biāo)法定量。按照上述色譜條件下進行測定，進樣量10 μL。

1.3.2吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑中消解動態(tài)試驗

試驗在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌栽培基地進行。當(dāng)平菇和榆黃蘑子實體直徑長至2 cm左右時，用25 %吡唑醚菌酯乳油兌水稀釋500倍均勻噴霧，至子實體表面有水珠滴下。每個處理3次重復(fù)，每個重復(fù)10袋料（每袋料約1 kg）。分別于施藥后2 h及1、3、5、7、9 d隨機采集平菇和榆黃蘑樣品。隨機多點取樣，采用四分法最終收集樣品500 g。在空白試驗中采集空白樣品，置于－20℃冰箱中保存，供殘留檢測。

1.3.3吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中消解動態(tài)試驗

試驗在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌栽培基地進行，試驗設(shè)兩個處理，每個處理3次重復(fù)。處理1：將25 %吡唑醚菌酯乳油5 g滅菌前噴霧于1 000 g培養(yǎng)料中，并混合均勻。處理2：空白對照噴施清水。培養(yǎng)料在0.1 MPa、120℃條件下滅菌2 h，冷卻后接種。培養(yǎng)料滅菌后分別在施藥后0、1、3、5、7、9、14、21、30、45、60、90 d隨機采樣供殘留檢測。

1.3.4最終殘留試驗

子實體從第一潮菇開始，每潮菇收獲時都要采子實體樣品，即在施藥后33、47、67、87 d即分別為第1茬、第2茬、第3茬和第4茬出菇期間，每次采集的子實體樣品縮分后存放于-20℃冰箱進行冷凍，然后真空冷凍干燥，放于干燥器中待用；同步采集培養(yǎng)料樣品進行測定。

1.3.5樣品分析

子實體提?。簻?zhǔn)確秤取5.0 g子實體樣品置于組織搗碎機中，加入5 mL蒸餾水，40 mL乙腈，勻漿2 min。勻漿之后將全部樣品轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中進行抽濾，將濾液全部轉(zhuǎn)移至盛放10.0 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，進行上下勻速震蕩2 min，靜止分層。吸取20 mL上層提取液體于250 mL圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)濃縮近干，氮氣吹干備用凈化。

凈化：依次向玻璃層析柱內(nèi)裝入2.0 g無水硫酸鈉、2.0 g弗羅里娃土、5.0 g無水硫酸鈉，輕敲填裝均勻，10 mL正己烷預(yù)淋洗后，上樣；用正己烷/丙酮（85∶15，體積比）淋洗液50 mL淋洗，收集洗脫液于圓底燒瓶中，40℃條件下旋轉(zhuǎn)濃縮近干，氮氣吹干，甲醇定容至2 mL，過0.022 μm有機膜，待測定。

培養(yǎng)料提取凈化方法：秤取培養(yǎng)料5.0 g，置于250 mL具塞三角瓶內(nèi)，加5 mL蒸餾水，40 mL乙腈，震蕩1 h，然后全部轉(zhuǎn)移至布氏漏斗進行減壓抽濾。以下處理方法同子實體。

測定：紫外檢測器、C18反相色譜柱（10cm×4.6mm），波長275 nm，甲醇∶水=7∶3（體積比），柱溫30℃，流速0.8 mL/min；進樣量：10 μL。

1.3.6數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)分析用DPS統(tǒng)計[9]。吡唑醚菌酯降解可以用一級動力學(xué)方程表示[10]：

式中：C為吡唑醚菌酯殘留量，（mg/kg）；C0為吡唑醚菌酯初始?xì)埩袅?，（mg/kg）；k為消解速率常數(shù)；t為時間。

2結(jié)果與分析

2.1平菇和榆黃蘑及培養(yǎng)料中添加回收率的測定

在空白平菇、榆黃蘑、培養(yǎng)料樣品中，分別添加吡唑醚菊酯0.01、0.1、1 mg/kg 3個水平。按照1.3.4方法進行測定，試驗結(jié)果見表1。

吡唑醚菌酯在平菇、榆黃蘑和培養(yǎng)料中的平均回收率88.74 %~95.28 %、84.46 %~93.54 %、90.36 %~ 93.26 %，變異系數(shù)2.5 %~6.3 %、4.1 %~5.3 %、2.7 %~ 6.8 %。吡唑醚菌酯在平菇、榆黃蘑、培養(yǎng)料中的最低檢測限為0.01 mg/kg。該殘留分析方法的準(zhǔn)確度、精確度和靈敏度均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求[11]。

表1吡唑醚菊酯在平菇、榆黃蘑、培養(yǎng)料中的添加回收結(jié)果Table 1 Recoveries of pyraclostrpbin in Pleurotus ostreatus Pleurotus citrinipileatus sing and substrates

2.2吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑中消解動態(tài)

在平菇和榆黃蘑子實體直徑長至2 cm左右時，施藥一次后不同時間多次采樣，測定樣品殘留量，試驗結(jié)果見表2。

表2吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑中的消解動力學(xué)參數(shù)Table 2 Dissipation kinetic parameters of pyraclostrpbin in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinipileatus sing

從表2可以看出吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑中降解速率較快，半衰期在2.8 d~2.9 d。在平菇和榆黃蘑中的消解動態(tài)曲線方程為；。

2.3吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中消解動態(tài)

用吡唑醚菌酯噴施一次，滅菌后不同時間采樣，測定吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中的殘留量，結(jié)果見表3。

表3吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中的降解動力學(xué)參數(shù)Table 3 Dissipation kinetic parameters of pyraclostrpbin in the substrates

續(xù)表3吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中的降解動力學(xué)參數(shù)Contiune table 3 Dissipation kinetic parameters of pyraclostrpbin in the substrates

由表3可知，培養(yǎng)料中吡唑醚菌酯殘留量隨著時間的延長而逐漸降低，其消解動態(tài)符合一級動力學(xué)方程。消解動態(tài)方程C=7.945 5e-0.0291t，r=0.984 6，吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中的消解速率較慢，半衰14.1 d，滅菌前吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中殘留量23.81 mg/kg，滅菌后吡唑醚菌酯降解率達(dá)50 %以上，培養(yǎng)料的滅菌會顯著影響吡唑醚菌酯在培養(yǎng)料中的消解。

2.4培養(yǎng)料中吡唑醚菌酯向平菇子和榆黃蘑子實體中轉(zhuǎn)移規(guī)律

在培養(yǎng)料施用吡唑醚菌酯后，正常栽培平菇和榆黃蘑，分別于藥后33 d（第一茬菇采收期）、47 d（第二茬菇采收期）、67 d（第三茬菇采收期）87 d（第四茬菇采收期）同步采集平菇和榆黃蘑及其培養(yǎng)料樣品，進行樣品吡唑醚菌酯殘留量測定，試驗測定結(jié)果見表4。

表4培養(yǎng)料中吡唑醚菌酯向子實體轉(zhuǎn)移Table 4 Pyraclostrpbin residues in the substrates and Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinipileatus sing

由表4可知，培養(yǎng)料中供試農(nóng)藥在藥后33、47、67、87 d后的殘留量仍較高，達(dá)到0.78 mg/kg~3.07 mg/kg。然而，在同步采集的平菇和榆黃蘑子實體中均沒有檢測到供試農(nóng)藥的殘留?？梢?，平菇和榆黃蘑子實體在生長期間，培養(yǎng)料中吡唑醚菌酯殘留不會向平菇和榆黃蘑子實體轉(zhuǎn)移，對食用菌產(chǎn)品質(zhì)量安全的影響較小。

3結(jié)論與討論

本文研究了吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑及培養(yǎng)料中殘留檢測方法，該方法該操作簡單，具有較好的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度，完全滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。測定了吡唑醚菌酯平菇和榆黃蘑及培養(yǎng)料中的消解動態(tài)，均符合一級動力學(xué)方程。吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑中子實體降解較快，半衰期為2.8 d~2.9 d；培養(yǎng)料中的供試農(nóng)藥的殘留量較高，半衰期為14.1 d。供試農(nóng)藥在培養(yǎng)料中的降解，采用高溫滅菌前后進行對比，滅菌后吡唑醚菌酯的平均降解率50 %以上。是由于供試農(nóng)藥在培養(yǎng)料中熱穩(wěn)定較差，易分解造成的。

在供試農(nóng)藥轉(zhuǎn)移試驗中，培養(yǎng)料中吡唑醚菌酯在施藥后33、47、67、87d后的殘留量仍較高，達(dá)0.78 mg/kg～3.07 mg/kg。然而，在同步取樣的平菇和榆黃蘑子實體中均未檢測到供試農(nóng)藥的殘留量。因此，平菇和榆黃蘑子實體在生長期間，培養(yǎng)料中吡唑醚菌酯殘留不會向子實體轉(zhuǎn)移，對食用菌產(chǎn)品質(zhì)量安全的影響較小。美國規(guī)定吡唑醚菌酯在蔬菜上MRL值也為5 mg/kg[8]。參考其標(biāo)準(zhǔn)說明吡唑醚菌酯在平菇和榆黃蘑上使用是安全的。

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Degradation Kinetics of the Pyraclostrpbin Residue in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinipileatus

HU Yue，LIU Meng-meng，HOU Zhi-guang，ZHAO Xiao-feng，ZHANG Hao*
（College of Resource and Environment，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，Jilin，China）

Abstract：A high performance liquid chromatography（HPLC）method was developed for the determination of pyraclostrobin residues in Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinopileatus. The degradation kinetics of the pyraclostrobin in Pleurotus ostreatus，Pleurotus citrinopileatus and substrates was thus studied. The results indicated that the half -life period of pyraclostrobin in Pleurotus ostreatus，Pleurotus citrinopileatus and substrates were 2.8，2.9 d and 14.1 d respectively. Sterilization remarkably reduced pyraclostrobin residues in the substrates. After Pleurotus ostreatus and Pleurotus citrinopileatus were cultivated for 90 days in the substrates with pyraclostrobin，with the tested pesticide residues in the substrates being 0.68 mg/kg，no residual volume was detected in the substance of Pleurotus ostreatus or Pleurotus citrinopileatus that were harvested at the same time. Therefore，pyraclostrobin residues in substrates didn't transfer to the fruiting bodies of Pleurotus ostreatus or Pleurotus citrinopileatus and thus had little impact on the quality safety of the edible fungus.

Key words：Pleurotus ostreatus；Pleurotus citrinopileatus；substrates；pyraclostrobin；degradation kinetics

收稿日期：2014-07-14

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.008

作者簡介：胡月（1989—），女（漢），在讀碩士，研究方向：農(nóng)藥學(xué)專業(yè)。*通信作者：張浩（1964—），女（漢），教授，博士，主要從事農(nóng)藥環(huán)境毒理研究。

基金項目：吉林省世行貸款農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全項目（2011-Z28）