何曉輝, 王立霞，方 琴，王俊剛，申 紅

(1.石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2. 石河子大學農(nóng)學院，新疆石河子 832003)

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黃粉蟲抗菌肽對耐藥糞腸球菌抑菌效果的研究

何曉輝1, 王立霞1，方 琴1，王俊剛2，申 紅1

(1.石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2. 石河子大學農(nóng)學院，新疆石河子 832003)

摘要：【目的】探究黃粉蟲抗菌肽對耐藥糞腸球菌抑菌效果?！痉椒ā坑脻舛葹?×108CFU/mL的糞腸球菌菌液與麩皮混合飼喂誘導黃粉蟲幼蟲，在24 h后提取黃粉蟲抗菌肽，用考馬斯亮藍法(Bradford法)測定黃粉蟲抗菌肽粗提液濃度，采用試管稀釋法測定青霉素、慶大霉素對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)，用多步誘導法篩選出青霉素和慶大霉素耐藥的糞腸球菌，用Kirby Bauer法測定黃粉蟲抗菌肽對耐青霉素和慶大霉素的糞腸球菌的抑菌活性。【結(jié)果】經(jīng)糞腸球菌誘導24 h后提取的黃粉蟲抗菌肽濃度,顯著高于未用糞腸球菌誘導的對照組(P<0.05)，其抑菌活性也顯著高于對照組(P<0.05)，并且誘導黃粉蟲抗菌肽組對耐青霉素、慶大霉素糞腸球菌的抑菌效果顯著高于抗生素組(P<0.05)。【結(jié)論】黃粉蟲抗菌肽對耐藥糞腸球菌具有顯著的抑菌效果。

關鍵詞：黃粉蟲；糞腸球菌；抗菌肽；耐藥菌；抑菌

0引 言

【研究意義】抗生素作為飼料添加劑以及在臨床治療疾病中長期大劑量的使用，會使畜禽逐漸對各類抗菌藥物產(chǎn)生依賴性，導致畜禽體內(nèi)菌群失調(diào)。同時，抗生素進入機體后短時間內(nèi)不能完全代謝排出體外，容易蓄積在動物體內(nèi)，就會造成動物性產(chǎn)品的污染。含有抗生素殘留的肉、奶、蛋、魚等動物性食品若被食用，一般情況下不會表現(xiàn)出急性中毒癥狀，但長時間攝入含有抗生素殘留的動物性食品，就會造成抗生素在人體內(nèi)某些器官和組織蓄積，引起相應的病變，甚至會發(fā)生癌變[1]?？蒲腥藛T一直致力于探尋一種安全可靠且經(jīng)濟的新型抗菌藥物，來緩解由抗生素引起的種種不利局面，昆蟲抗菌肽便被關注。昆蟲抗菌肽作為生物防御系統(tǒng)的一個重要組成部分，是昆蟲受到病原微生物感染或損傷的情況下產(chǎn)生的一類具有抗菌活性的物質(zhì)，這種物質(zhì)為非專一性免疫應答產(chǎn)物，對細菌、病毒、真菌均具有抑殺作用，尤其是對耐藥細菌也具有殺傷作用[2]?！厩叭搜芯窟M展】自Mcon H J等[3]報道黃粉蟲通過誘導可以產(chǎn)生抗菌肽后，國內(nèi)很多學者對黃粉蟲體內(nèi)的抗菌活性物質(zhì)進行研究，王小平等[4]研究發(fā)現(xiàn)，黃粉蟲幼蟲用大腸桿菌誘導可產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，這種抗菌物質(zhì)能夠?qū)Χ喾N植物和動物病原微生物產(chǎn)生抑制作用；韓潤林等[5]用超聲波和饑餓后飼喂大腸桿菌的方式處理黃粉蟲，發(fā)現(xiàn)經(jīng)處理后的黃粉蟲產(chǎn)生了具有抗菌活性的抗菌肽?！颈狙芯壳腥朦c】腸球菌屬(Enterococcus)是醫(yī)院引起感染的常見病原菌，主要感染對象是過量使用抗生素的患者或免疫力低下的人群，可以引起菌血癥、尿道感染、腹腔感染等[6]，也可導致敗血癥、心內(nèi)膜炎等疾病的產(chǎn)生甚至可危及生命，死亡率達21.0%～27.5%[7]。糞腸球菌是腸球菌感染的臨床分離株中最常見的菌株，由于腸球菌具有天然和獲得性耐藥的特性，并且新的抗生素開發(fā)速度緩慢，在臨床治療由腸球菌引起的感染就變得越來越困難。【擬解決的關鍵問題】研究以黃粉蟲為材料，依據(jù)前期研究細菌誘導蠅蛆24 h產(chǎn)生的抗菌肽濃度高和抑菌活性強的基礎上，探索用糞腸球菌飼喂誘導黃粉蟲產(chǎn)生抗菌肽，對誘導24 h產(chǎn)生的抗菌肽進行粗提并測定其濃度和對耐藥糞腸球菌抑菌效果。為黃粉蟲抗菌肽治療耐藥性的腸球菌感染疾病和作為新型的綠色抗生素提供科學依據(jù)。

1材料與方法

1.1　材 料

黃粉蟲幼蟲由石河子大學農(nóng)學院植物保護系生物防治研究室提供；糞腸球菌羔羊分離株由石河子大學動物科技學院微生物實驗室提供。

1.2　方 法

1.2.1黃粉蟲抗菌肽的誘導

挑選5日齡黃粉蟲幼蟲300頭，隨機分成2組(誘導組、對照組)，每組設立3個重復。誘導組(采用濃度為1×108CFU/mL的糞腸球菌菌液30 mL與相同質(zhì)量的麩皮混合飼喂黃粉蟲幼蟲)，對照組(用等體積蒸餾水代替菌液與等量麩皮混合飼喂黃粉蟲幼蟲)。將處理的黃粉蟲幼蟲置于溫度為25～30℃，相對濕度為65%～70%的環(huán)境下飼養(yǎng)，24 h后挑取活的黃粉蟲蟲體，備用。

1.2.2黃粉蟲幼蟲抗菌肽的粗提

取上述黃粉蟲幼蟲，先將蟲體用自來水沖洗8次，再用蒸餾水沖洗3次，然后用濾紙蘸干蟲體，再用75%酒精擦拭蟲體消毒。按照蟲體質(zhì)量與提取液體積比為1∶3加入提取液(0.05 mol/L乙酸銨緩沖液，pH=5.0,0.35 g/mL 苯甲基磺酰氟和2‰巰基乙醇)把蟲體置于高速組織搗碎機中充分搗碎，收集勻漿液。將勻漿液在12 000 r/min高速冷凍離心機中離心30 min后收集上清液，重復上述步驟3次，然后合并上清液，將上清液置于100℃恒溫水浴鍋中加熱攪拌5 min，然后待其冷卻10 min，再吸取上清液在4 800 r/min高速冷凍離心機中離心30 min，最后取離心管上清液(抗菌肽粗提液)置于小試管內(nèi)保存于-20℃冰箱中，備用[8]。

1.2.3黃粉蟲抗菌肽粗提液濃度的測定

用考馬斯亮藍法(Bradford法)測定[9]。以標準蛋白(結(jié)晶牛血清白蛋白)的濃度值(mg/mL)作為橫坐標，吸光光度值OD595作為縱坐標作一條標準蛋白曲線。用紫外分光光度計分別測定各組黃粉蟲抗菌肽提取液的OD值，然后根據(jù)標準蛋白曲線來確定各組抗菌肽提取液的濃度。圖1

圖1 標準蛋白曲線

Fig.1 Standard protein cure

1.2.4黃粉蟲抗菌肽粗提液對糞腸球菌抑菌效果的測定

采用Kirby Bauer法(K-B紙片瓊脂擴散法)來確定其抑菌活性。將糞腸球菌用比濁法制備成1×107CFU/mL的菌懸液，取100 L菌懸液用涂布器將菌液均勻涂布于整個BHI培養(yǎng)基表面，反復涂布幾次，每次把平板旋轉(zhuǎn)60°，然后將涂布器沿著平板邊緣旋轉(zhuǎn)2圈。取直徑為6 mm的濾紙片，高壓滅菌，然后把濾紙片在各組抗菌肽提取液中浸泡4 min，常溫放置3 min，再用無菌鑷子夾取濾紙片貼在平板的不同區(qū)域內(nèi)，兩紙片之間距離不小于24 mm，紙片距離平板邊緣不小于15 mm。然后將平板置于37℃溫箱培養(yǎng)18 h后取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑。

1.2.5青霉素、慶大霉素對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)測定

采用試管稀釋法檢測MIC，用BHI肉湯作為培養(yǎng)基，藥物稀釋倍數(shù)依次為：10、20、40和80倍。糞腸球菌作為指示菌種。經(jīng)肉眼觀察，無細菌生長的培養(yǎng)液的最低藥物濃度即為該待檢藥物的MIC。

1.2.6糞腸球菌的青霉素、慶大霉素誘導性耐藥試驗

采用多步誘導法[10]：將糞腸球菌菌液用比濁法制備成1×107CFU/mL的菌懸液。在5 mL含青霉素(100 mg/mL)的BHI肉湯中加入5 L的菌懸液，利用連續(xù)轉(zhuǎn)種的方式培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)24 h為1代。藥物的濃度從1/4 MIC開始增加，藥物濃度依次為：1.25、2.5、5、10…128 g/mL，每個藥物濃度培養(yǎng)5代，最終使抗菌藥物濃度達到128 g/mL。在誘導過程中如果沒有細菌生長則可降低藥物濃度培養(yǎng)或同一個濃度反復傳代培養(yǎng)。若重復傳代5次仍沒有細菌生長則終止試驗。在將試驗菌接種在含青霉素的BHI肉湯的同時，接種等量試驗菌在不含青霉素的BHI肉湯中，作為對照，進行同期培養(yǎng)。慶大霉素(50 mg/mL)誘導性耐藥試驗中只有抗菌藥物和濃度不同，其余步驟與青霉素誘導性耐藥試驗過程相同。將試驗菌接種在含有慶大霉素藥物濃度逐漸增高的BHI肉湯中，37℃培養(yǎng)18 h后觀察。若有細菌生長，則將抗菌藥物濃度逐步增加至2 000 g/mL。

1.2.7黃粉蟲抗菌肽粗提液對耐藥糞腸球菌抑菌效果測定

采用Kirby Bauer法(K-B紙片瓊脂擴散法)來確定其抑菌效果。取待檢菌液(青霉素耐藥糞腸球菌、慶大霉素耐藥糞腸球菌)100 μL用涂布器均勻涂布在整個BHI培養(yǎng)基表面。當平板上的水分晾干后，再貼藥敏紙片(抗菌肽提取液與抗生素)，每個培養(yǎng)基貼5片，兩紙片之間距離不小于24 mm，紙片距離平板邊緣不小于15 mm。然后置于恒溫箱37℃培養(yǎng)18 h后取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑。抑菌圈直徑判斷標準：青霉素藥敏紙片(10 g/片)對糞腸球菌的抑菌圈直徑≤20 mm為低度敏感；20～29 mm為中度敏感；≥29 mm為高度敏感；慶大霉素藥敏紙片(120 g/片)的抑菌圈直徑≤12 mm為低度敏感；12～15 mm為中度敏感；≥15 mm為高度敏感；氨芐西林藥敏紙片(10 g/片)的抑菌圈直徑≤16 mm為低度敏感；16～17 mm為中度敏感；≥17 mm為高度敏感；利福平藥敏紙片(5 g/片)的抑菌圈直徑≤16 mm為低度敏感；16～20 mm為中度敏感；≥20 mm為高度敏感；四環(huán)素藥敏紙片(30 g/片)的抑菌圈直徑≤14 mm為低度敏感；14～19 mm為中度敏感；≥19 mm為高度敏感。

1.3　數(shù)據(jù)統(tǒng)計

利用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行顯著性檢驗，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1　糞腸球菌培養(yǎng)的黃粉蟲抗菌肽粗提液濃度

試驗組糞腸球菌培養(yǎng)的黃粉蟲提取抗菌肽并測定其濃度，用麩皮培養(yǎng)24 h后的黃粉蟲組抗菌肽粗提液的濃度((0.47±0.01)mg/mL)顯著低于糞腸球菌培養(yǎng)的黃粉蟲抗菌肽粗提液的濃度(0.92±0.06)mg/mL(P<0.05)，提示糞腸球菌可以有效的刺激黃粉蟲產(chǎn)生高表達量的抗菌肽。黃粉蟲在一定病原微生物的刺激下能夠產(chǎn)生具有免疫作用的高濃度抗菌肽。

表1黃粉蟲抗菌肽粗提液對糞腸球菌的抑菌圈直徑(mm)
Table 1The inhibition zone diameter of molitor antimicrobial peptides crude extract toEnterococcusfaecalis

組別Group抑菌圈直徑(mm)TheInhibitionzonediameter糞腸球菌培養(yǎng)的黃粉蟲組GroupofEnterococcusfaecalisbreedingtenebriomolitor13.97±1.87a麩皮培養(yǎng)的黃粉蟲組(對照)Groupoftenebriomolitorfedwheatbran(Contrast)10.27±1.03b無菌水組Sterilewater0

注：同列肩標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，大寫字母不同表示差異極顯著(P<0.01)，小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，下同

Note: Values with same capital letters within a column were not highly significant(P>0.05),values with different capital were within a columnwere highly significant(P<0.01), values with different lower case letters indicate significant differences (P<0.05), the same as below

2.2　糞腸球菌培養(yǎng)的黃粉蟲抗菌肽粗提液對糞腸球菌抑菌活性

糞腸球菌培養(yǎng)黃粉蟲產(chǎn)生的抗菌肽對糞腸球菌的抑菌圈直徑顯著高于健康生長的黃粉蟲抗菌肽(對照組)(P<0.05)，表明細菌誘導黃粉蟲不僅能夠提高黃粉蟲抗菌肽的表達水平而且還能提高黃粉蟲抗菌肽的抑菌活性。表1

2.3　篩選抗生素對糞腸球菌最小抑菌濃度(MIC)

用試管稀釋法篩選青霉素、慶大霉素對糞腸球菌最小抑菌濃度(MIC)的結(jié)果顯示，當添加抗生素藥液(青霉素、慶大霉素)的初始濃度為50 g/mL時經(jīng)試管稀釋(1∶10)后確定青霉素、慶大霉素對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)值均為5.0 g/mL。依據(jù)美國臨床標準委員會(2004)NCCLS標準規(guī)定，對青霉素敏感的菌株最低抑菌濃度(MIC)<8 g/mL，對慶大霉素敏感的菌株最低抑菌濃度(MIC)<16 g/mL，若抗生素對糞腸球菌最小抑菌濃度(MIC)值大于此標準值即定為對該抗生素耐藥。試驗中青霉素、慶大霉素對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)值為5.0 g/mL即小于以上判定標準，因此糞腸球菌對這兩種抗生素均敏感。

2.4　青霉素、慶大霉素誘導糞腸球菌的耐藥性

經(jīng)抗生素多步誘導法后，根據(jù)美國臨床標準委員會(2004)NCCLS標準推薦的K-B法進行抗生素多步誘導的耐藥試驗結(jié)果顯示，青霉素藥敏紙片(10 g/片)對青霉素誘導的糞腸球菌的抑菌圈直徑為(13.67±0.24)mm，慶大霉素藥敏紙片(120 g/片)對慶大霉素誘導的糞腸球菌的抑菌圈直徑為(14.17±0.44)mm，依據(jù)抑菌試驗判斷標準可知，經(jīng)青霉素、慶大霉素誘導的耐藥試驗獲得的糞腸球菌對青霉素、慶大霉素為中低度敏感即產(chǎn)生了耐藥性。

2.5　黃粉蟲抗菌肽粗提液對抗生素篩選的耐藥的糞腸球菌抑菌活性

用黃粉蟲抗菌肽粗提液紙片和抗生素藥敏紙片(四環(huán)素、利福平和氨芐西林)對青霉素篩選的耐藥糞腸球菌進行抑菌活性的檢測結(jié)果顯示，糞腸球菌培養(yǎng)的黃粉蟲組的抗菌肽對耐青霉素的糞腸球菌的抑菌活性顯著高于氨芐西林組和利福平組(P<0.05)，與四環(huán)素組差異不顯著(P>0.05)。依據(jù)美國臨床標準委員會(2004)NCCLS標準推薦的K-B法的判斷標準可知，篩選獲得的糞腸球菌對氨芐西林、利福平均為低度敏感，而對四環(huán)素為高度敏感。

用黃粉蟲抗菌肽粗提液紙片和抗生素藥敏紙片(四環(huán)素、利福平和氨芐西林)對慶大霉素篩選的耐藥糞腸球菌進行抑菌活性的檢測結(jié)果顯示，糞腸球菌誘導黃粉蟲組抗菌肽粗提液對耐慶大霉素的糞腸球菌的抑菌活性顯著高于氨芐西林組和利福平組(P<0.05)，與四環(huán)素組差異不顯著(P>0.05)?？股亟M的利福平為低度敏感，氨芐西林組對糞腸球菌無抑菌圈產(chǎn)生，表明耐慶大霉素的糞腸球菌對氨芐西林完全耐藥。黃粉蟲抗菌肽對耐藥糞腸球菌具有較好的抑菌效果。表2

表2 黃粉蟲抗菌肽與抗生素對耐藥糞腸球菌的抑菌效果
Table 2The antimicrobial effect of molitor antimicrobial peptides crude extract and antibiotic to Enterococcus faecalis

組別Group抑菌圈直徑(mm)TheInhibitionzonediameter青霉素耐藥糞腸球菌PenicillinresistantEnterococcusfaecalis慶大霉素耐藥糞腸球菌GentamicinresistanceinEnterococcusfaecalis糞腸球菌培養(yǎng)的黃粉蟲組GroupofEnterococcusfaecalisbreedingTenebriomolitor25.17±0.60a24.57±0.23a氨芐西林組Ampicillingroup8.10±0.97c無抑菌圈出現(xiàn)利福平組Rifampicingroup12.00±1.89b14.83±1.59b四環(huán)素組Tetracyclinegroup24.67±1.04a22.43±0.30a

3討 論

目前，養(yǎng)殖行業(yè)濫用各類抗菌藥物，引起一些病原微生物產(chǎn)生耐藥性，如何解決病原微生物的耐藥性這一問題便成為了困擾人們的難題。隨著人們對抗菌肽的深入研究以及抗菌肽表現(xiàn)出的諸多優(yōu)點，使得抗菌肽越來越被關注，抗菌肽是輔助生物機體抵抗外來病原體入侵的重要防御分子，不僅能抑制、殺滅多種細菌，而且還具有抗真菌、病毒等作用，最重要的是不產(chǎn)生耐藥性[11]。大量研究報道，通過細菌感染刺激能夠誘導并提高昆蟲抗菌肽的表達水平。試驗采用糞腸球菌菌液與麩皮混合飼喂黃粉蟲幼蟲，飼喂24 h后，提取的黃粉蟲抗菌肽粗提液的抑菌活性的測定結(jié)果顯示，用糞腸球菌誘導黃粉蟲的抗菌肽粗提液的濃度顯著高于未誘導的黃粉蟲對照組(P<0.05)，提示黃粉蟲幼蟲為避免致病耐藥糞腸球菌的侵染，自身產(chǎn)生了高濃度的抗菌肽，可能是致病細菌引起了黃粉蟲的適應性免疫。

隨著對抗菌肽更進一步的深入研究，發(fā)現(xiàn)昆蟲機體內(nèi)抗菌肽基因表達受到微生物誘導的調(diào)控，特定的抗菌肽基因表達是由特定種類的微生物特異地激活，所以表現(xiàn)出不同誘導源誘導的昆蟲可以產(chǎn)生不同的抗菌肽，而且產(chǎn)生的抗菌肽抑菌強度也不相同[12]，對金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌、硝酸鹽桿菌、致病性大腸桿菌以及高度耐藥性細菌菌株均具有抗菌作用[13]。研究發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌不僅對多種常用抗生素有天然耐藥性，而且也可通過突變或接受外源基因而產(chǎn)生獲得性耐藥[14,15]。試驗用試管稀釋法獲得了青霉素、慶大霉素對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)值均為5.0 g/mL，然后進行糞腸球菌的青霉素、慶大霉素誘導性耐藥試驗，篩選獲得了對青霉素、慶大霉素產(chǎn)生耐藥的糞腸球菌。對青霉素篩選的耐藥糞腸球菌的抑菌活性檢測結(jié)果顯示，糞腸球菌對氨芐西林、利福平均為低度敏感，而對黃粉蟲抗菌肽和四環(huán)素高度敏感(P>0.05)，此結(jié)果與Peterson等[16]使用四環(huán)素類抗生素對耐四環(huán)素的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和淋病奈瑟氏菌等進行抑菌活性比較，結(jié)果顯示對四環(huán)素耐藥菌和敏感菌具有相同的抑菌活性的研究結(jié)果一致。

黃粉蟲抗菌肽粗提液對慶大霉素篩選的耐藥糞腸球菌的抑菌活性檢測結(jié)果顯示，抗生素組中利福平為低度敏感，氨芐西林組對糞腸球菌無抑菌圈產(chǎn)生，表明耐慶大霉素的糞腸球菌對氨芐西林完全耐藥。而黃粉蟲抗菌肽與四環(huán)素組高度敏感(P>0.05)。說明黃粉蟲抗菌肽和四環(huán)素對青霉素和慶大霉素耐藥的糞腸球菌具有同樣的抑菌效果。

目前已有研究發(fā)現(xiàn)，昆蟲抗菌肽具有獨特的殺菌機理，其主要是作用于細菌的細胞膜，然后破壞其完整性并產(chǎn)生穿孔，從而造成細胞內(nèi)容物溢出胞外而死亡或抗菌肽作用于膜蛋白引起凝聚、失活及離子通道，引起膜滲透性改變而導致細菌死亡，這種獨特的殺菌機制對臨床上一些常見的耐藥性細菌具有良好的應用前景[17,18]。試驗通過多步法用抗菌藥物對糞腸球菌進行耐藥性誘導，在低濃度抗生素的長期作用下，可以誘導糞腸球菌產(chǎn)生獲得性耐藥。然后通過K-B法進行體外抑菌試驗的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，糞腸球菌對多種抗生素產(chǎn)生耐藥，但黃粉蟲抗菌肽對其仍具有一定抑菌效果。

4 結(jié) 論

試驗通過糞腸球菌刺激誘導黃粉蟲24 h后獲得糞腸球菌刺激誘導黃粉蟲的提取液，黃粉蟲提取液不僅具有較高的濃度而且對耐藥糞腸球菌具有較好的抑菌效果，可能是黃粉蟲針對糞腸球菌的刺激迅速產(chǎn)生了具有抗菌活性的物質(zhì)，這種機制還有待于在分子水平上做更進一步的研究。黃粉蟲是我國飼養(yǎng)量較大的一種資源昆蟲，具有很好的應用價值和市場前景。因此，研究通過相關試驗為昆蟲抗菌肽治療由耐藥性細菌引起的疾病和新型抗菌藥物的研發(fā)奠定了基礎。

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Fund project:Supported by NSFC (31060281 ) and the National SRP (201410759068)

Study of the Effects of Tenebrio Molitor Antimicrobial Peptides Acting on

ResistantEnterococcusfaecalisAntibacterial

HE Xiao-hui1, WANG Li-xia1, FANG Qin1, WANG Jun-gang2, SHEN Hong1

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology，ShiheziUniversity,ShiheziXingiang832003，China；2.CollegeofAgronomy，ShiheziUniversity,ShiheziXinjiang832003，China)

Abstract：【Objective】 In order to explore tenebrio molitor antimicrobial peptides (AMPs) and observe it for resistant Enterococcus faecalis inhibitory effect.【Method】In this experiment, tenebrio molitor larva were fed with concentration of Enterococcus faecalis bacteria 1×108CFU/mL mixed with bran, the AMPs was extracted crudely after 24 h respectively. Crude extract of the antibacterial peptides of tenebrio molitors was detected by Coomassie brilliant blue method. MIC was determined for enterococcus against penicillin and gentamicin by tube broth method. At last enterococcus were screened with multi-step inducing method and the antibacterial activity of peptides were determined by Kirby Bauer method.【Result】The result showed that the value of peptides was obviously higher than these not induced by enterococcus in the control group(P<0.05). The antibacterial activity of peptides was also higher than that of the control group(P<0.05)and antibiotic group(P<0.05).【Conclusion】Antibacterial peptides of tenebrio molitors have a good effect on gentamicin resistant enterococcus .

Key words:tenebrio molitor; Enterococcus faecalis；antimicrobial peptides; resistant bacteria；antibacterial

通訊作者:申紅 (1970-)，女，副教授，碩士生導師，研究方向為動物生理生化與分子遺傳育種，(E-mail)shenhong98@163.com

作者簡介:何曉輝 (1991-)，男，甘肅人，本科生，研究方向為動物醫(yī)學，(E-mail)1210427624@qq.com

基金項目:國家自然科學基金項目(31060281)；國家SRP資助項目(201410759068)

收稿日期：2015-07-08

中圖分類號：S182

文獻標識碼：A

文章編號：1001-4330(2016)02-0317-07

doi:10.6048/j.issn.1001-4330.2016.02.018