劉曉蕓, 彭胡丹

(1. 江蘇省南京市紅十字醫(yī)院 病理科, 江蘇 南京, 210000;

2. 江蘇省南京金域醫(yī)學檢驗所有限公司, 江蘇 南京, 210000)

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人乳頭瘤病毒DNA聯(lián)合液基薄層細胞學檢查在宮頸病變診斷中的應用

劉曉蕓1, 彭胡丹2

(1. 江蘇省南京市紅十字醫(yī)院 病理科, 江蘇 南京, 210000;

2. 江蘇省南京金域醫(yī)學檢驗所有限公司, 江蘇 南京, 210000)

摘要：目的探討人乳頭瘤病毒(HPV)DNA聯(lián)合液基薄層細胞學(TCT)檢查在宮頸病變診斷中的應用。方法663例行宮頸癌前病變篩查的女性，分別進行HPV-DNA和TCT檢測，所有HPV-DNA檢測陽性和TCT檢測分級≥非典型鱗狀上皮細胞(ASCUS)者在陰道鏡下取組織樣本進行病理檢查。結果組織學病理檢查顯示，慢性炎癥201例、宮頸內上皮瘤變(CIN)1級167例、CIN2級125例、CIN3級114例、宮頸癌56例。聯(lián)合檢測對≥CIN2級病理的診斷敏感度、特異度、陽性和陰性預測值分別為90.85%、76.90%、75.92%和91.29%，單獨HPV-DNA檢測對≥CIN2級病理的診斷敏感度、特異度、陽性和陰性預測值分別為80.68%、85.60%、81.79%和84.68%，單獨TCT檢測對≥CIN2級病理的診斷敏感度、特異度、陽性和陰性預測值分別為81.69%、82.88%、79.28%和84.96%，其中聯(lián)合檢測對病理分級≥CIN2的診斷敏感度高于單獨檢測；不同病理分級HPV-DNA陽性率和負荷量比較，CIN3級與宮頸癌間無顯著差異(P>0.05), 其余各級間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。此外，TCT結果分級與HPV陽性率二者間呈正相關(r=0.56, P<0.01)。結論HPV-DNA和TCT檢測均是篩查宮頸癌前病變的有效方法，聯(lián)合檢測可提高診斷敏感度，病變越嚴重者HPV陽性率和病毒負荷量越高。

關鍵詞:人乳頭瘤病毒; 液基薄層細胞學; 病理檢查; 宮頸病變

宮頸癌是臨床發(fā)病率較高的婦科腫瘤，人乳頭瘤病毒(HPV)感染是其主要發(fā)病原因，其中HPV16、58、52、33等基因亞型的感染與癌前病變密切相關[1-2]，因此HPV-DNA檢測在宮頸癌前病變的診斷中具有重要意義[3]。宮頸具有易暴露、易觀察及易取樣等解剖學特征，及時發(fā)現(xiàn)病變對于病情逆轉和治療具有重要意義。液基薄層細胞學(TCT)檢查可提高對異常細胞的診斷率，其診斷準確率較傳統(tǒng)的巴氏染色法高[4]。本研究以組織學病理檢查結果為金標準，探討HPV-DNA和TCT在宮頸癌前病變診斷中的應用價值，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月—2015年1月在南京市紅十字醫(yī)院行宮頸癌前病變篩查的女性663例，年齡21～60歲，平均(42.57±3.16)歲，排除急性生殖道炎癥、有子宮頸錐切或子宮切除史者。

1.2方法

1.2.1HPV-DNA檢測：以宮頸刷取得足量分泌物和脫落細胞，置于洗脫管中送檢。采用核酸擴增儀檢測系統(tǒng)進行PCR檢測，基本步驟如下：洗脫液離心后棄上清，裂解懸浮沉淀，加熱后離心，保留上清液。按試劑盒說明進行擴增，再以雜交法對基因進行分型檢測，經(jīng)洗膜、顯色，1 h內觀察結果。

1.2.2TCT檢測：將收集到的細胞經(jīng)自動制片系統(tǒng)處理后制成涂片，行HE染色后，閱片。采用TBS分類法[5]分為: ① 正?；蜓装Y; ② 非典型鱗狀上皮細胞(ASCUS)及腺細胞(AGSU); ③ 不排除高度病變的非典型鱗狀上皮細胞(ASC-H); ④ 低度鱗狀上皮內病變(LSIL); ⑤ 高度鱗狀上皮內病變(HSIL); ⑥ 鱗狀細胞癌(SCG)和腺癌。

1.2.3組織病理檢查：所有HPV-DNA檢測陽性和TCT檢測分級≥ASCUS的女性均進一步行陰道鏡檢查，在圖像異常區(qū)域和碘試驗陰性區(qū)域取組織，制片，行HE染色，閱片。檢查結果分為慢性炎癥，宮頸內上皮瘤變(CIN)1級、2級、3級及宮頸癌。

1.3觀察指標

① 記錄3種檢查方法的結果，以組織學病理檢查結果為金標準，分別計算HPV-DNA、TCT及聯(lián)合檢測的診斷敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值。② 觀察不同程度宮頸病變與HPV-DNA負荷量的關系。③ 觀察不同程度TCT結果與HPV感染的關系。

1.4統(tǒng)計學方法

2結果

2.1HPV-DNA、TCT及聯(lián)合檢測的診斷結果

663例樣本中，組織學病理檢查結果：慢性炎癥201例、CIN1級167例、CIN2級125例、CIN3級114例、宮頸癌56例，其中≥CIN2級295例，其余分級368例。單獨HPV-DNA檢測結果：陽性291例，陰性372例，其中對≥CIN2級病理檢測陽性238例，陰性57例；TCT檢測結果：陽性(分級≥ASCUS)304例，陰性(正?；蜓装Y)359例；其中對≥CIN2級病理檢測陽性241例，陰性54例；聯(lián)合檢測結果：陽性353例，陰性310例，其中對≥CIN2級病理檢測陽性268例，陰性27例。

單獨HPV-DNA檢測對≥CIN2級病理的診斷敏感度80.68%(238/295)，特異度85.60%(315/368)，陽性預測值81.79%(238/291)，陰性預測值84.68%(315/372)；單獨TCT檢測對≥CIN2級病理的診斷敏感度81.69%(241/295)，特異度82.88%(305/368)，陽性預測值79.28%(241/304)，陰性預測值84.96%(305/359)；HPV-DNA聯(lián)合TCT檢測對≥CIN2級病理的診斷敏感度90.85%(268/295)，特異度76.90%(283/368)，陽性預測值75.92%(268/353)，陰性預測值91.29%(283/310)。聯(lián)合檢測的診斷敏感度高于單獨檢測。

2.2不同程度宮頸病變與HPV感染的關系

隨著病變程度分級的增加，HPV陽性率及負荷量均隨之增加。CIN3級與宮頸癌HPV陽性率、負荷量無顯著差異(P>0.05)，其余各級間HPV陽性率、負荷量差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1　不同程度宮頸病變與HPV感染的關系

與慢性炎癥比較, *P<0.05, **P<0.01;

與CIN1級比較, ##P<0.01;

與CIN2級比較, △P<0.05, △△P<0.01。

2.3不同程度TCT結果與HPV感染的關系

TCT陽性病例中，ASCUS/AGSU分級40例，HPV陽性率30.00%(12/40)；ASC-H分級54例，HPV陽性率33.33%(18/54)；LSIL分級81例，HPV陽性率51.85%(42/81)；HSIL分級104例，HPV陽性率73.08%(76/104)；SCG/腺癌25例，HPV陽性率96.00%(24/25)。經(jīng)Spearman等級秩相關分析，TCT結果分級與HPV陽性率二者間呈正相關(r=0.56，P<0.01)，即隨著TCT結果分級的增加，HPV陽性率也隨之增加。

3討論

宮頸癌發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中居于第2位，早期檢查和確診對提高治療效果，降低死亡率具有重要意義[6]。宮頸細胞學檢查最初始于巴氏涂片，但該方法假陰率較高，TCT技術的出現(xiàn)較好地解決了涂片質量問題，使檢查結果更加精確[7]。

目前研究[8-9]表明，HPV感染是宮頸病變的主要因素，尤其是高危型HPV與CIN的發(fā)生發(fā)展關系密切。大多數(shù)女性一生中均會發(fā)生至少一次的HPV感染，但這種感染大多為“一過性”，可自行清除，但年齡在30歲以上的女性，發(fā)生持續(xù)性感染的可能性增加，如HPV亞型為高危型，應高度重視。HPV檢測方法有細胞形態(tài)學檢查、免疫組化、PCR法等，本研究采用PCR法，獲得了較高的診斷敏感度、特異度及陽性和陰性預測值。近年來，國內外已普遍開展TCT和HPV-DNA檢查，兩者聯(lián)合應用可大大提高宮頸病變的檢出率，篩查出更多高危患者[10-11], 一旦出現(xiàn)較高級別的病變，立即在陰道鏡下行組織病理學檢查，及時確診病情。

本研究結果表明，HPV-DNA聯(lián)合TCT檢測診斷宮頸癌前病變的敏感度較單純采用一種方法高，臨床上可根據(jù)患者實際情況靈活選用檢測方法。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，TCT結果分級越高，HPV陽性率也越高，與劉國忠等[12]報道一致。同時，CIN級別越高，患者HPV陽性率越高，也證實了HPV感染在CIN進展中的作用，與國外相關報道[13-14]一致。鑒于大多數(shù)女性都可能“一過性”感染HPV，而在6～12個月內復查的成本較高，患者的依從性也無法保證，因此單純以HPV陽性來篩選宮頸癌的高危人群可能存在諸多局限，部分學者[15-18]嘗試分析HPV病毒載量與宮頸疾病的關系，但目前國內外學者對病毒載量是否與宮頸病變程度相關仍存在爭議。本研究結果表明，隨著病變程度分級的增加，HPV-DNA負荷量與HPV陽性率同步增加，提示病毒載量的檢測可能會作為宮頸病變程度的參考指標之一[19-20]。

綜上所述, HPV-DNA和TCT檢測均是篩查宮頸癌前病變的有效方法，聯(lián)合檢測可提高診斷敏感度，病變越嚴重，HPV陽性率和病毒負荷量越高。

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Application of human papillomavirus DNA combined with thinprep cytologic test in the diagnosis of cervical lesions

LIU Xiaoyun1, PENG Hudan2

(1.PathologyDepartment,NanjingRedCrossHospital,Nanjing,Jiangsu, 210000;

2．NanjingKingmedDiagnosticsCo.,Ltd,Nanjing,Jiangsu, 210000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the application of human papilloma virus (HPV) DNA combined with thinprepcytologictest (TCT) in the diagnosis of cervical lesions. MethodsA total of 663 women underwent screening of cervical precancerous lesion were given HPV-DNA and CTC detections. The sample tissues of all the patients with positivity of HPV-DNA detection and grading ≥atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS) detected by TCT were collected for pathological examination under colposcope. ResultsHistopathological examination revealed that there were 201 cases of chronic inflammation, 167 cases of grade 1 cervical intraepithelial neoplasia (CIN), 125 cases of grade 2 CIN, 114 cases of grade 3 CIN and 56 cases of cervical cancer. The diagnostic sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of combined detection in grade 2 CIN were 90.85%, 76.90%, 75.92% and 91.29% respectively, which were respectively 80.68%, 85.60%, 81.79% and 84.68% by HPV-DNA detection alone in grade 2 CIN and respectively 81.69%, 82.88%, 79.28% and 84.96% by TCT detection alone in grade 2 CIN. Among them, the sensitivity of combined detection in grade 2 CIN was higher than that of HPV-DNA detection alone and TCT detection alone. There was no significant difference between grade 3 CIN and cervical cancer by comparison to the HPV-DNA positive rates and load capacity in patients with different pathological gradings (P>0.05), and significant differences were presented among other gradings (P<0.05 or P<0.01). Additionally, there was a positive correlation between grading of TCT Resultsand the positive rate of HPV (r=0.56, P<0.01). ConclusionBoth HPV-DNA and TCT detections are effective methods in the screening of cervical precancerous lesion, and combined detection can improve the diagnostic sensitivity. The more serious the lesions are, the higher the positive rate of HPV and viral load capacity are.

KEYWORDS:human papilloma virus; thinprepcytologictest; pathological examination; cervical lesion

基金項目:中國高校醫(yī)學期刊臨床專項資金(11523958)

收稿日期:2015-11-13

中圖分類號:R 711.74

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)03-091-04

DOI:10.7619/jcmp.201603028