張　婷，俞祖亮，孫　冊(cè)，梁俊陽(yáng)

(中國(guó)刑事警察學(xué)院法化學(xué)系,遼寧　沈陽(yáng)　110035)

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食品中罌粟殼理化檢測(cè)相關(guān)問(wèn)題的探討*

張婷，俞祖亮，孫冊(cè)，梁俊陽(yáng)

(中國(guó)刑事警察學(xué)院法化學(xué)系,遼寧沈陽(yáng)110035)

罌粟殼及其提取物作為一類(lèi)麻醉物質(zhì)被非法添加在食品中會(huì)危害人體的健康。對(duì)食品中非法添加罌粟殼的行為認(rèn)定、監(jiān)督和管理，在司法實(shí)踐工作中存在一些問(wèn)題，其中最主要的理化檢測(cè)中存在的問(wèn)題制約了對(duì)食品安全違法行為的有效監(jiān)管。探討罌粟殼檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化方法制定、快速檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室確證檢驗(yàn)、安全性閾值設(shè)定、實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證等問(wèn)題，以期對(duì)罌粟殼的檢測(cè)分析提供幫助。

食品；罌粟；理化檢驗(yàn)；問(wèn)題

食品安全越來(lái)越受到人們的關(guān)注，食品中使用罌粟殼(籽)屬于違法行為，因此對(duì)食品中罌粟殼進(jìn)行理化檢測(cè)是證明此類(lèi)違法行為的重要證據(jù)。但目前在對(duì)食品中罌粟殼檢測(cè)的科學(xué)性、規(guī)范性、法律性、安全性等方面還存在一些問(wèn)題，導(dǎo)致在違法行為追究中的工作效率不高、對(duì)違法行為的處理依據(jù)不足等后果。因此，從理化檢測(cè)的角度研究和探討食品安全問(wèn)題，以期能為食品中罌粟殼理化檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)制定和實(shí)際檢驗(yàn)鑒定工作提供參考。

1　理化檢測(cè)依據(jù)的問(wèn)題

從1991年開(kāi)始，衛(wèi)生部、公安部等多部門(mén)聯(lián)手發(fā)布了《關(guān)于查處在食品中使用罌粟殼(籽)等違法行為的通知》。當(dāng)時(shí)因大型分析儀器不普及，理化檢測(cè)主要分析方法是薄層色譜法[1]、化學(xué)法和電化學(xué)法等[2-3]。因此各地所進(jìn)行的食品中罌粟殼的檢驗(yàn)方法根據(jù)“衛(wèi)生部衛(wèi)監(jiān)發(fā)(1992)第21號(hào)”文件《食品中阿片生物堿成分測(cè)定方法(暫行)》進(jìn)行。

2008年和2011年衛(wèi)生部先后2次公布的第5批可能違法添加的非食用物質(zhì)名錄中，再次將罌粟殼禁用的產(chǎn)品類(lèi)別范圍擴(kuò)大為“火鍋底料及小吃類(lèi)食品”。1987年，罌粟殼列入國(guó)務(wù)院頒布的《麻醉藥品管理辦法》名錄中，在1997年之后罌粟均按麻醉藥品進(jìn)行管理。此時(shí)有關(guān)食品中罌粟的理化檢測(cè)方法依據(jù)公安部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GA/T 104-1995《鴉片毒品中嗎啡、可待因、蒂巴因、罌粟堿、那可汀的定性分析及嗎啡、可待因的定量分析方法》進(jìn)行。

近年來(lái)，隨著高效液相色譜(HPLC)或高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(HPLC-MS)等高靈敏檢測(cè)分析儀器的出現(xiàn)，上海市食品藥品監(jiān)督管理局率先于2010年，頒布了《火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的地方性標(biāo)準(zhǔn)[4]。目前尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化的有關(guān)食品中罌粟殼的檢驗(yàn)方法出臺(tái)。

從各種理化檢測(cè)方法的變遷過(guò)程可以看出，已有的食品中罌粟殼的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)制定年代較早，薄層色譜法無(wú)法完成定量分析。氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法定性分析和定量分析中有關(guān)雜質(zhì)的去除未提及。HPLC-MS分析方法沒(méi)有規(guī)范統(tǒng)一的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，也沒(méi)有開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)驗(yàn)證能力的比較，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)缺乏和滯后將導(dǎo)致?tīng)?zhēng)議下的工作被動(dòng)，以及影響辦案工作進(jìn)度。本著對(duì)食品中罌粟殼理化檢驗(yàn)規(guī)范性的要求出發(fā)，制定相關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義。

2　檢測(cè)方法的科學(xué)性和可行性問(wèn)題

近些年來(lái)，國(guó)家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的制定范圍和新建標(biāo)準(zhǔn)的增速很快，但比起眾多實(shí)踐領(lǐng)域和不斷出現(xiàn)的新問(wèn)題，標(biāo)準(zhǔn)制定則具有滯后性。盡管食品中罌粟殼的檢驗(yàn)方法很多，但各個(gè)實(shí)驗(yàn)室間的方法、水平、檢測(cè)設(shè)備的不同，很有可能面臨著檢測(cè)結(jié)果不一致的情況。

標(biāo)準(zhǔn)的制定過(guò)于嚴(yán)苛或需要配備昂貴的檢測(cè)設(shè)備，在我國(guó)目前經(jīng)濟(jì)發(fā)展不平衡的情況下，基層單位將不能?chē)?yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)揮不了食品安全的監(jiān)督和管理的作用。標(biāo)準(zhǔn)的制定如果直接照搬其他食品中非法添加物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)或者標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不細(xì)致、論證不充分的話(huà)，會(huì)加重理化檢驗(yàn)的工作難度和工作強(qiáng)度。因此，行之有效的方法的檢驗(yàn)方法制定后，開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室間的有關(guān)食品中罌粟殼檢測(cè)的能力測(cè)試不失為是保證檢驗(yàn)科學(xué)性的好方法。

3　檢測(cè)過(guò)程中的問(wèn)題

食品中罌粟殼(籽)的檢驗(yàn)過(guò)程分為現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室確證分析2個(gè)過(guò)程，目前在各個(gè)過(guò)程中均存在一些不完善和亟待解決的問(wèn)題。

3.1免疫法快速檢測(cè)中的問(wèn)題

現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)方法主要有化學(xué)法和免疫法[5-6]，其中免疫法具有快速、高通量、高靈敏和高特異性等優(yōu)點(diǎn)，在現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)中更具優(yōu)勢(shì)。罌粟殼(籽)的主要生物堿有5種，其中含量較高的為嗎啡，約占10%，其次為那可汀，約占2%～5%，再次是罌粟堿，可待因，蒂巴因的含量約為0.2%～1%，因此嗎啡免疫膠體金試紙板應(yīng)用較多[7]。嗎啡測(cè)試板主要用于吸食毒品者尿液的初篩檢驗(yàn)。目前尚無(wú)針對(duì)食品檢測(cè)使用的專(zhuān)用測(cè)試板，在用于火鍋底料、調(diào)味品和鹵制品等食品時(shí)，常因蛋白質(zhì)、脂肪等雜質(zhì)含量過(guò)高而使得試紙擴(kuò)散難進(jìn)行。如果加水浸泡和提取后再進(jìn)行免疫法測(cè)定，嗎啡的提取率不高，會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

張冬升、鈕偉民等[7-8]分別則是制備了罌粟堿抗體，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)火鍋底料和湯料中罌粟堿的成分。盡管該方法的檢測(cè)限為0.1 μg/kg，檢測(cè)范圍為0.1～20 μg/kg，但罌粟堿抗體與其他阿片類(lèi)生物堿有一定交叉反應(yīng)，因此，初篩檢測(cè)中會(huì)有假陽(yáng)性等問(wèn)題。

此外免疫試紙法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性與生產(chǎn)廠(chǎng)家的工藝及試紙的保存、測(cè)試溫度、測(cè)試時(shí)間等使用情況有很大關(guān)系。免疫試紙法通常也只能作為初篩定性使用，不能用作定量分析。

3.2實(shí)驗(yàn)室確證檢測(cè)的問(wèn)題

實(shí)驗(yàn)室確證方法包括有氣相色譜法(GC)[9-10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC/MS)[11-13]、高效液相色譜法(HPLC)[14-20]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)[21-25]、質(zhì)譜法等[26-28]。所有上述儀器檢測(cè)前，均需要將食品等檢材制備成較潔凈且濃縮后的溶液才能進(jìn)行分析。因此樣品的前處理方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響較大。

3.2.1液液萃取前處理的問(wèn)題

罌粟含有的生物堿具有在堿性條件下可溶于有機(jī)溶劑，在酸性條件下溶于水的特點(diǎn)，可以分別調(diào)節(jié)溶液至酸性后，用水及乙醇的混合溶液提取生物堿的鹽溶液，張靖采用酸性乙醇提取幾種生物堿的檢出限分別為嗎啡0.8 μg/L、可待因3 μg/L、罌粟堿0.3 μg/L。熊劍娟等采用硝酸銀溶液沉淀過(guò)濾后直接測(cè)定的方法。這樣的方法操作比較簡(jiǎn)便，但由于雜質(zhì)去除不徹底，很難應(yīng)用在高靈敏的液-質(zhì)聯(lián)用分析儀器中。

另一種前處理方法則是酸性條件下有機(jī)溶劑去除雜質(zhì)后，再將水溶液調(diào)至堿性有機(jī)溶劑反萃取。有機(jī)溶劑萃取多選用混合有機(jī)溶劑，如李永芳等[10]用三氯甲烷-甲醇(3:1)提取。張艷萍[12]采用三氯甲烷-異丙醇(4:1)溶液提取。董南采用三氯甲烷-乙醇(9:1)溶液提取。上述方法中油脂去除較好，但有機(jī)溶劑用量過(guò)大，提取和旋轉(zhuǎn)揮發(fā)等操作次數(shù)多，較為繁瑣。

3.2.2固相萃取前處理的問(wèn)題

近年使用LC-MS法，方法的靈敏度大為改善，但其對(duì)檢材有凈化要求，當(dāng)分析食品中農(nóng)藥殘留時(shí)一般采用固相萃取法，選用的萃取材料有MCX、ChemElut、PSA和無(wú)水硫酸鎂等。但HPLC-MS檢測(cè)過(guò)程中，不同的生物堿在質(zhì)譜中的響應(yīng)強(qiáng)度不同，通常選用的C18色譜柱檢測(cè)，由于嗎啡的分子極性較大，在該柱子上保留性差，嗎啡的檢出限要低于罌粟堿和那可汀。王力清等對(duì)調(diào)料中罌粟殼成分采用了超聲波提取，MCX固相萃取柱凈化，HPLC-MS/MS法進(jìn)行檢測(cè)，調(diào)料中罌粟堿、那可丁的最低檢出限分別為0.8 μg/kg、1.0 μg/kg，嗎啡、可待因和蒂巴因的最低檢出限為50 μg/kg。劉敏敏等采用水提取、乙腈萃取火鍋底料中的生物堿成分，用PSA及無(wú)水硫酸鎂凈化，嗎啡的檢出限為37 μg/kg，其他4種檢出限為1 μg/kg。考慮到嗎啡的極性較大，王柯等采用QuECHERS提取管提取罌粟殼中的生物堿成分，并使用了親水性的ACQUITY UPLC BEH HILIC色譜柱，結(jié)果罌粟堿、那可丁的檢出限均為5 μg/kg，其余為10 μg/kg。

可見(jiàn)，盡管HPLC-MS有較高的靈敏度，但在同一條件下，不可能使極性不同、結(jié)構(gòu)相異的所有生物堿都有很高的響應(yīng)，在所報(bào)道的方法中含量較低的罌粟堿檢出限要高于嗎啡。

3.2.3測(cè)定閾值的問(wèn)題

分析測(cè)定閾值問(wèn)題，這個(gè)檢測(cè)閾值不僅與樣品的前處理方法有關(guān)，也與儀器的靈敏度及運(yùn)行保養(yǎng)有關(guān)，眾多的文獻(xiàn)檢出限較低只是計(jì)算出的檢出限而非真正測(cè)定的檢出限，罌粟中生物堿的檢測(cè)閾值設(shè)定應(yīng)考慮對(duì)人體的安全接受量的前提下，合理制定，不能以無(wú)限追求最低的檢出靈敏度為標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)外通行的認(rèn)定嗎啡尿液陽(yáng)性的閾值為10～40 ng/mL，低于這個(gè)值認(rèn)定為陰性，這個(gè)閾值應(yīng)區(qū)別于工作領(lǐng)域的入職測(cè)試和常態(tài)化的濫用毒品人員的毒品檢測(cè)[29-30]。在一些歐洲和南美國(guó)家有食用罌粟籽的習(xí)慣，匈牙利成年人們每日食用源自食物中的嗎啡含量為78.6 μg/kg左右，兒童是116.9 μg/kg，咖喱飯中食用的嗎啡含量為200.4～1002 μg；可待因?yàn)?5.9～479.5 μg。實(shí)驗(yàn)證明從食用罌粟籽人員中的尿液、血液和毛發(fā)的濃度可以看出其含量均超過(guò)這個(gè)閾值,并且在使用量更大的人群中這一濃度會(huì)延續(xù)至48 h[31-33]，因此閾值的制定需要一些懂得藥理和毒理的專(zhuān)業(yè)人士以及懂得儀器分析的專(zhuān)業(yè)人士，共同討論得出。

食品中罌粟殼的理化檢驗(yàn)是提供執(zhí)法辦案的重要證據(jù)，為保證鑒定結(jié)論的法律性、科學(xué)性，需要在具有可行性的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)在充分調(diào)研的基礎(chǔ)上盡快制定出臺(tái)，同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)從事理化檢驗(yàn)鑒定實(shí)驗(yàn)室鑒定能力的管理，對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員、設(shè)備、環(huán)境等方面進(jìn)行定期的，專(zhuān)項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)室能力測(cè)試，實(shí)驗(yàn)室間數(shù)據(jù)比對(duì)等工作，以保證檢驗(yàn)鑒定的客觀(guān)性。另外對(duì)現(xiàn)場(chǎng)執(zhí)法人員進(jìn)行適當(dāng)?shù)哪芰蜆I(yè)務(wù)培訓(xùn)，對(duì)有沖突的規(guī)范或標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)無(wú)法執(zhí)行的規(guī)定要適時(shí)地進(jìn)行調(diào)整和修訂。通過(guò)全面的努力來(lái)保證百姓的食品安全，以促進(jìn)人們的健康生活。

[1]馮雪順.薄層法測(cè)定食品中罌粟殼殘留方法的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,1992,2(4):238.

[2]涂志強(qiáng).罌粟殼中生物堿類(lèi)化合物的含量測(cè)定[J].中成藥,1998,20(3):42-43.

[3]吳功柱,呂太平,楊紅蕓,等.敏感膜電極檢測(cè)火鍋湯中罌粟堿方法研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,1999,9(4):245-247.

[4]上海市食品藥品監(jiān)督管理局.DB31/2010-2012火鍋食品中罌粟堿、嗎啡、那可丁、可待因和蒂巴因的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].上海,2010．

[5]朱振華,朱士新,陳璐,等.罌粟殼成分快速檢測(cè)方法在食品監(jiān)督中的應(yīng)用[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2015,21(3):8-10.

[6]熊劍娟,王盛良.膠體金免疫試紙法快速測(cè)定調(diào)味湯料中罌粟生物堿[J].中國(guó)衛(wèi)生監(jiān)督雜志,2002(6):354.

[7]張冬升,蔡建榮.ELISA法快速測(cè)定火鍋底料及調(diào)料中罌粟堿[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2004,14(2):208-209.

[8]鈕偉民,毛云中,戴緯杰,等.ELISA檢測(cè)罌粟堿方法學(xué)研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2003,13(5):575-577.

[9]Mario T,Georg O,Wilhelm S.Urinary concentrations of morphine and codeine after consumption of poppy seeds[J].J.Anal.Toxicl.,2003,27(1):53-56.

[10]李永芳,會(huì)耀華.氣相色譜法測(cè)定食品中罌粟殼殘留的研究與應(yīng)用[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2000,10(1):38-40.

[11]劉奮,戴京晶,林奕芝,等.GC/MS 測(cè)定滲入食品中罌粟殼殘留的方法研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2003,13(6):714-715.

[12]張艷萍,廖華樂(lè),肖兵,等.GC/MS測(cè)定食品中罌粟堿和嗎啡含量[J].衛(wèi)生研究,2011,40(4):512-513.

[13]Paul BD,Dreka C,Knight ES,et al.Gas chromatographic/mass spectrometric detection of narcotine,papaverine,and thebaine in seeds of Papaver somniferum[J].Planta Med,1996,62(6):544-547.

[14]陳建軍.固相萃取-反相高效液相色譜法測(cè)定火鍋中嗎啡和可待因[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,13(3):766-767.

[15]張靖.食品中罌粟堿、嗎啡、可待因含量的液相色譜檢測(cè)法研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2007,17(1):72-73.

[16]Yan J.,Zhao MP,Li YZ.An efficient immunoaffinity chromatographic method for extraction and purification of papaverine from samples of pericarpium papaveris and food products[J].J Sep Sci,2005,28(11):1163-1170.

[17]董南,王海燕.高效液相色譜法檢測(cè)食品中多種香料共存時(shí)的罌粟殼[J].色譜,2000,18(6):554-555.

[18]王越,馬麗霞,田微.火鍋底料中罌粟殼的高效液相色譜法測(cè)定[J].色譜,1999,17(4):401-402.

[19]信海紅,王庭欣,朱路,等.超聲波微波萃取-高效液相色譜法檢測(cè)肉湯中的罌粟堿[J].中國(guó)食品添加劑,2012(4):250-252.

[20]皮立,胡鳳祖,師治賢.高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定罌粟籽和火鍋湯料中的罌粟堿[J].色譜,2005,23(6):639-641.

[21]米建萍,徐遠(yuǎn)金,朱平川,等.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在濫用食品添加劑及食品中違法添加物測(cè)定中的應(yīng)用及研究進(jìn)展[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué),2015,34(7):1579-1586.

[22]王力清,酈明浩,李錦清,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法高通量快速測(cè)定調(diào)料中罌粟殼生物堿含量[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2012,38(8):168-172.

[23]劉敏敏,張朝正,李延志,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)火鍋底料中罌粟殼[J].食品研究與開(kāi)發(fā),2012,33(12):91-94.

[24]王柯,鄭榮,簡(jiǎn)龍海,等.火鍋調(diào)料中5種生物堿成分的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定法[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2011,21(2):363-365.

[25]顧萬(wàn)江,周春艷,唐曉琴,等.固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定食品中5種生物堿[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2014,24(17):2481-2484.

[26]謝增瑞.串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)復(fù)雜基質(zhì)中的嗎啡[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2004,25(增刊):103-104.

[27]姜宏,管境,曲青.質(zhì)譜直接進(jìn)樣技術(shù)確證食品中含罌粟堿[J].職業(yè)與健康,2001,17(3):56-57.

[28]Mol HG,Van Dam RC,Zomer P,et al.Screening of plant toxins in food,feed and botanicals using full-scan high-resolution (Orbitrap) mass spectrometry[J].Food Addit Contam Part A,2011,28(10):1405-1423.

[29]Jankovicová K,Ulbrich P,Fuknová M.Effect of poppy seed consummation on the positive results of opiates screening in biological samples[J].Leg Med,2009,11(1):S416-S418.

[30]ElSohly MA,Jones AB.Drug testing in the workplace:could a positive test for one of the mandated drugs be for reasons other than illicit use of the drug?[J].J Anal Toxicol,1995,19(6):450-458.

[31] Hill V,Cairns T,Cheng CC,et al.Multiple aspects of hair analysis for opiates:methodology,clinical and workplace populations,codeine,and poppy seed ingestion[J].J Anal Toxicol,2005,29(7):696-703.

[32]Moeller MR,Hammer K,Engel O.Poppy seed consumption and toxicological analysis of blood and urine samples[J].Forensic Sci Int,2004,143(2/3):183-186.

[33]Rohrig TP,Moore C.The determination of morphine in urine and oral fluid following ingestion of poppy seeds[J].J Anal Toxicol,2003,27(7):449-452.

Discussion on Determination of Illegal Papaver in Food*

ZHANG Ting，YU Zu-liang，SUN Ce，LIANG Jun-yang

(Department of Forensic Chemistry,National Police University of Chinese,Liaoning Shenyang 110035,China)

Poppy shell and its extract as a class of narcotic substances are illegally added in the food will harm the health of the human body.State superintendence,behavior identification and administration of illegal added papaver in food need to be develop standard examination method.However,already existing testing method about opium poppy have provided some practical problems in the judicial practice.These problems including standardization determination procedure,fast test and confirm test,conclusion expression,analytical threshold value,analysis ability acknowledgement among labs,and so on,were discussed,hoped to provide some advices in drafting about the standard of illegal papaver in food as quickly as possible.

food; papavers; determination; problems

中國(guó)刑警學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(201410175033)；中國(guó)刑警學(xué)院青年基金項(xiàng)目(2014)。

張婷(1975-)，女，講師，主要從事毒物和毒品分析。

TS201.6

A

1001-9677(2016)011-0013-03