成媛媛

（河南省濟源市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 濟源 454650）

一例仔豬大腸桿菌的鑒別和治療

成媛媛

（河南省濟源市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 濟源 454650）

目前養(yǎng)豬場最常見和多發(fā)的仔豬大腸桿菌病是仔豬黃白痢，其中仔豬黃痢新生仔豬產(chǎn)后2～6 h即可發(fā)病，1～6日齡仔豬發(fā)病常見，7日齡以上仔豬很少發(fā)病，發(fā)病率可高達92.28%，死亡率可達68.41%～100%。仔豬黃痢主要臨床表現(xiàn)為病豬肛門失禁、排黃色或黃褐色稀便、精神不振、消瘦等，常于12～48 h內(nèi)死亡；仔豬白痢7～50日齡仔豬均可發(fā)病，尤以15～35日齡仔豬常見，發(fā)病率較高，約為87.32%，死亡率較低，為25.31%左右。仔豬白痢主要臨床表現(xiàn)為病豬排乳白或灰白色的漿糊狀糞便、消瘦、行動遲緩、拱背、被毛無光澤等，病豬常于3～7 d內(nèi)康復(fù)或死亡。

大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗；診治

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料采集 病料為疑似仔豬大腸桿菌性腹瀉病豬的直腸棉拭子。

1.1.2 實驗材料 麥康凱培養(yǎng)基、馬丁肉湯營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、革蘭氏染色液、多種藥敏片及細菌生化反應(yīng)小管、恒溫培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，各種量程的移液器及相應(yīng)的一次性吸頭，無菌手套及鑷子、手術(shù)刀、載玻片等。

1.1.3 供試藥敏片 氨芐青霉素、卡那霉素、福利平、頭孢噻肟、阿莫西林、氟苯尼考、復(fù)方新諾明、頭孢拉啶、阿奇霉素、慶大霉素、培氟沙星、強力霉素等12種抗生素藥敏片。

1.1.4 試驗動物 5只清潔級昆明雌小白鼠與5只清潔級昆明雌雄小白鼠。

1.2 試驗方法

1.2.1 病原菌分離培養(yǎng) 在滅菌生理鹽水中浸入發(fā)病豬場采集的疑似大腸桿菌性腹瀉的發(fā)病仔豬直腸棉拭子病料，并且對其進行洗脫。在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上接種獲得的懸浮液劃線，并且將其在37 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中進行24 h的培養(yǎng)，并且將其保存在零下四攝氏度的環(huán)境之下，將其用來備用。

1.2.2 革蘭氏染色試驗 將麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上的菌落涂片，在完成了革蘭氏染色之后，要采用油鏡對其進行鏡檢，對分離菌的染色特性以及形態(tài)進行認真觀察。

1.2.3 細菌生化反應(yīng)試驗 獲得以上分離菌之后，要對其進行VP試驗、枸櫞酸鹽試驗、糖發(fā)酵試驗、吲哚試驗以及MR試驗等生化反應(yīng)，并且要對其反應(yīng)的變化情況進行細致觀察。

1.2.4 動物回歸試驗 挑取表面光滑的粉紅色單菌落，在馬丁肉湯營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)上對其進行接種，在37 ℃的環(huán)境之下對其進行18 h的培養(yǎng)，并且將存在于平板上的菌落采用無菌生理鹽水洗下來，對其進行研究，將其制作成為細菌懸液。然后再對十只小白鼠進行選取，對其進行分組，將其分為兩個小組，每個小組包括五只小白鼠，其中一組皮下注射菌懸液0.2 mL/只，另一組皮下注射滅菌生理鹽水0.2 mL/只。將死亡小白鼠及時進行剖檢，并取其心血接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，對分離菌株進行鑒定。

2 結(jié)果

2.1 細菌分離培養(yǎng)結(jié)果分析

在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上對菌落進行培養(yǎng)之后，發(fā)現(xiàn)菌落的顏色主要呈現(xiàn)為粉紅色，有整齊的邊緣，其表面呈現(xiàn)出光滑的現(xiàn)象。在馬丁肉湯營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上對菌落進行培養(yǎng)之后，發(fā)現(xiàn)菌落的顏色主要呈現(xiàn)為灰白色，有整齊的邊緣，其表面呈現(xiàn)出光滑隆起的現(xiàn)象。這兩種菌落和大腸桿菌菌落具有高度相似的形態(tài)特征。

2.2 革蘭氏染色試驗結(jié)果分析

對菌落進行經(jīng)革蘭氏染色之后，發(fā)現(xiàn)菌株主要的呈現(xiàn)形式為革蘭氏陰性小桿菌，將其放置在油鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)菌落的兩端呈現(xiàn)出鈍圓的形態(tài)，并且大部分表現(xiàn)為單個菌落，這和大腸桿菌的染色特性是完全相符合的。

2.3 細菌生化反應(yīng)試驗鑒定結(jié)果分析

在完成分離菌株糖發(fā)酵試驗之后，從其試驗結(jié)果中可以看出這種菌株類型能夠?qū)溠刻?、甘露醇、葡萄糖以及酵乳糖進行有效發(fā)酵，進而能夠產(chǎn)氣產(chǎn)酸。但是這種類型的菌株并不能對蔗糖進行緩慢的發(fā)酵。在進行吲哚試驗以及MR試驗之后，其試驗結(jié)果均呈現(xiàn)出陽性，對其進行VP試驗以及枸櫞酸鹽試驗之后，其結(jié)果顯示出陰性。通過對以上生化反應(yīng)的試驗結(jié)果進行研究分析，可以得出結(jié)論：這種分離菌株其實就是大腸桿菌。

2.4 動物回歸試驗結(jié)果分析

在給予試驗組的小白鼠接種注射菌懸液之后，發(fā)現(xiàn)其主要的臨床癥狀表現(xiàn)為稀瀉以及精神萎靡不振，在對其進行接種的10 h之后，有小白鼠出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象，在接種后24 h，五只小白鼠已經(jīng)全部出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象，剖檢可見小白鼠的肝臟腫大且淤血嚴重，從血液、肝臟、豬仔肛門等組織部位均能夠分離出大腸桿菌菌落，而注射滅菌生理鹽水的對照組小白鼠全部健活，沒有變化。從動物回歸試驗結(jié)果分析可知該分離菌株具有較強的致病性。

2.5 藥敏性試驗結(jié)果

分離菌株經(jīng)藥敏性試驗可知，該株分離菌具有嚴重的耐藥性，在強力霉素、復(fù)方新諾明、培氟沙星、氟苯尼考、氨芐青霉素、阿莫西林、慶大霉素以及卡那霉素等抗生素藥物上，不存在有敏感性。對福利平、頭孢噻肟2種抗生素藥物中度敏感，對頭孢拉啶、阿奇霉素為高度敏感。

3 討論

經(jīng)細菌分離培養(yǎng)、革蘭氏染色試驗、細菌生化反應(yīng)試驗及動物回歸致病性試驗等多種實驗研究結(jié)果均可證明本次發(fā)病的病原菌為大腸桿菌，由此可知該豬場發(fā)病豬由于感染了具有較強致病性的大腸桿菌而導(dǎo)致了仔豬大腸桿菌病的發(fā)生。

（編輯：李善祥）

S858.28

B

1006-799X(2016)20-0056-02

成媛媛（1986-），女，河南濟源人，助理獸醫(yī)師，主要研究方向為動物檢疫、動物疫病。