李偉

(中國人民解放軍251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000)

Girdin、Bim蛋白在兒童腎母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性

李偉

(中國人民解放軍251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000)

目的 探討Girdin、Bim蛋白在兒童腎母細(xì)胞瘤和正常組織中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系，并進(jìn)一步分析兩者之間的相關(guān)性。方法收集2000年1月至2009年12月60例住院患者的腎母細(xì)胞瘤及腎母細(xì)胞瘤旁正常組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)(EnVisionTM)法分別檢測Girdin、Bim蛋白在腎母細(xì)胞瘤和正常組織中的表達(dá)情況，數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0分析檢驗(yàn)。結(jié)果Girdin蛋白在腎母細(xì)胞瘤、正常組織中的陽性表達(dá)率分別為68.33% (41/60)、46.67%(28/60)，兩組之間表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.76，P＜0.01)；Bim蛋白在腎母細(xì)胞瘤、正常組織中的陽性表達(dá)率分別為21.67%(13/60)、78.33%(47/60)，兩組之間表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=38.53，P＜0.01)；腎母細(xì)胞瘤組織中Girdin蛋白的表達(dá)與腫瘤直徑、組織學(xué)形態(tài)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，但與性別、年齡、腫瘤位置無關(guān)(P＞0.05)；腎母細(xì)胞瘤組織中Bim蛋白的表達(dá)與腫瘤直徑有關(guān)(P＜0.05)，但與性別、年齡、腫瘤位置、組織學(xué)形態(tài)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)；腎母細(xì)胞瘤組織中Girdin蛋白的表達(dá)與Bim蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.59，P＜0.01)。結(jié)論腎母細(xì)胞瘤組織中Girdin、Bim蛋白的異常表達(dá)均與腫瘤直徑有關(guān)，這表明檢測兩者有利于判斷腫瘤細(xì)胞的增殖能力。

腎母細(xì)胞瘤；Girdin蛋白；Bim蛋白；免疫組織化學(xué)

兒童期腎臟腫瘤多數(shù)來源于腎胚芽組織且多為惡性腫瘤，其中最常見的為腎母細(xì)胞瘤。腎母細(xì)胞瘤又稱為韋爾姆瘤(Wilm tumor)，占小兒實(shí)體瘤的8%，并有一定的家族遺傳性[1]，其發(fā)病機(jī)制與WT基因突變和(或)腎源性剩余有關(guān)，前者從基因角度闡述，后者強(qiáng)調(diào)胚胎期腎組織，但兩者都有相應(yīng)的局限性。腎母細(xì)胞瘤患者預(yù)后受多種因素影響，如腫瘤細(xì)胞的分化程度、間變改變及浸潤轉(zhuǎn)移等。Girdin蛋白是一種新發(fā)現(xiàn)的肌動結(jié)合蛋白，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及細(xì)胞運(yùn)動的功能，并在多種腫瘤組織中過表達(dá)。Bim是促凋亡因子，其在多種惡性腫瘤組織中出現(xiàn)低表達(dá)或無表達(dá)[2-4]。而有關(guān)Girdin、Bim蛋白在兒童腎母細(xì)胞瘤中的相關(guān)研究未見報(bào)道，本研究主要探討Girdin、Bim蛋白在兒童腎母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及與臨床病理因素之間的關(guān)系，并進(jìn)一步分析兩蛋白之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2000年1月至2009年12月我院住院患者資料60例，并經(jīng)病理檢查明確診斷為腎母細(xì)胞瘤。其中男性32例，女性28例；患者年齡1～10歲，平均3歲，其中≥3歲者29例、＜3歲者31例。腫瘤直徑≥5 cm者39例、＜5 cm者21例；腫瘤部位：位于腎上極18例、腎中極26例、腎下極16例；組織學(xué)形態(tài)：以胚芽組織為主者7例、以間葉成分為主者12例，以上皮成分為主者6例，以混合成分為主者35例；臨床分期：Ⅰ期22例、Ⅱ期20例，Ⅲ期14例、Ⅳ期4例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無轉(zhuǎn)移者34例。同時(shí)選取腎母細(xì)胞瘤旁3 cm處正常組織作為對照組。

1.2 試劑和方法 濃縮型Girdin兔抗人單克隆抗體和即用型Bim兔抗人單克隆抗體及其相關(guān)配套試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。稀釋度按1:100，免疫組化染色采用EnVision兩步法，操作步驟參照說明書進(jìn)行。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗制作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 Girdin蛋白陽性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[5]，細(xì)胞染色結(jié)果判定由中國人民解放軍251醫(yī)院病理專家進(jìn)行雙盲評估，并規(guī)定總得分≤2分為陰性、＞2分為陽性。Bim蛋白著色于細(xì)胞漿，可表現(xiàn)為棕黃色、黃色或淡黃色染色，其判斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[10]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0分析處理相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Girdin、Bim蛋白在腎母細(xì)胞瘤組織和正常組織中的表達(dá) Girdin蛋白在60例腎母細(xì)胞瘤中陽性表達(dá)41例，陰性表達(dá)19例，陽性率為68.33%；在60例正常組織中陽性表達(dá)28例，陰性表達(dá)32例，陽性率為46.67%，兩組之間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.76，P＜0.05)；Bim蛋白在60例腎母細(xì)胞瘤中陽性表達(dá)13例，陰性表達(dá)47例，陽性率為21.67%；在60例正常組織中47例陽性表達(dá)，陽性率為78.33%，兩組之間表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=38.53，P＜0.01)。

2.2 Girdin、Bim蛋白的表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理因素的關(guān)系 Girdin蛋白的表達(dá)與腫瘤直徑、組織學(xué)形態(tài)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，而與患者性別、年齡及腫瘤位置無關(guān)(P＞0.05)；Bim蛋白的表達(dá)只與腫瘤直徑有關(guān)(P＜0.05)，而與患者性別、年齡及腫瘤位置、組織學(xué)形態(tài)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P＞0.05)，見表1。

表1 Girdin、Bim蛋白的表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤臨床病理因素的關(guān)系

2.3 腎母細(xì)胞瘤組織中Girdin、Bim蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性 腎母細(xì)胞瘤組織中Girdin、Bim蛋白同時(shí)陽性表達(dá)共2例，同時(shí)陰性表達(dá)共8例；Girdin陽性表達(dá)而Bim陰性表達(dá)共39例，Girdin陰性表達(dá)而Bim陽性表達(dá)共11例，經(jīng)相關(guān)性Spearman檢驗(yàn)顯示，Girdin、Bim蛋白之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.59，P=0.00＜0.01)。

3 討 論

腎母細(xì)胞瘤是兒童常見的惡性腫瘤之一。目前，腎母細(xì)胞瘤主要的治療方案是手術(shù)、放療及化療等綜合治療。盡管這一定程度上緩解了患者的病情，但瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移仍是治療無效或不佳的原因。趨化因子受體4(CXCR4)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、細(xì)胞凋亡抑制基因B淋巴瘤細(xì)胞-2(bcl-2)、細(xì)胞周期蛋白D1等異常的表達(dá)與腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的機(jī)制相關(guān)[6-8]。研究顯示，Girdin蛋白是一種含有1 870個氨基酸、相對分子質(zhì)量為(220～250)×103的肌動結(jié)合蛋白，其結(jié)構(gòu)由一個N末端的結(jié)構(gòu)域、中心的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域及一個C末端結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，前兩者結(jié)構(gòu)域有利于二聚體的形成，C末端結(jié)構(gòu)域包含Akt磷酸化位點(diǎn)和肌動蛋白結(jié)合位點(diǎn)，這些結(jié)構(gòu)的異常有助于Girdin蛋白參與肌動蛋白骨架的重構(gòu)，進(jìn)而影響細(xì)胞的運(yùn)動、腫瘤血管的生成及自我吞噬的功能[9]。王敏等[10]發(fā)現(xiàn)Girdin蛋白在膽管癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織，其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，而與年齡、性別等因素?zé)o關(guān)。李智慧等實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小RNA干擾技術(shù)能有效沉默惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株×LN229中的Girdin表達(dá)，其表達(dá)水平的降低也導(dǎo)致瘤細(xì)胞增殖能力的下降、非定向運(yùn)動能力的減弱及侵襲能力的下降，因而推測，Girdin蛋白的表達(dá)與瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力有關(guān)[11]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Girdin蛋白在腎母細(xì)胞瘤組織中的過表達(dá)高于正常組織，可見其異常表達(dá)一定程度上參與瘤變的發(fā)生；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑越大、組織學(xué)形態(tài)越原始、臨床分期越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中Girdin蛋白的表達(dá)高于相應(yīng)組織，這也說明Girdin蛋白的過表達(dá)不僅反映了瘤細(xì)胞的侵襲力和增殖力，而且還體現(xiàn)出瘤細(xì)胞骨架的可塑性，特別是Girdin在胚芽組織中的表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他組織，因而推測，Girdin的過表達(dá)還與腫瘤組織的分化程度有關(guān)。其機(jī)制可能是瘤細(xì)胞過表達(dá)Girdin，導(dǎo)致瘤細(xì)胞肌動蛋白骨架重構(gòu)，促進(jìn)了細(xì)胞遷移，引起腫瘤細(xì)胞的浸潤和擴(kuò)散，同時(shí)磷酸化蛋白激酶B，促進(jìn)細(xì)胞的增殖。

促凋亡蛋白Bim與凋亡抑制蛋白bcl-2同屬于BCL-2家族，但兩者有著完全相反的細(xì)胞調(diào)節(jié)作用，兩因子之間的平衡維持著細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，如這種平衡被打破，就會引起細(xì)胞功能的改變，進(jìn)而演變?yōu)槟[瘤的形成。耿敬姝等[12]研究結(jié)果顯示，大腸癌組織Bim蛋白低表達(dá)、Bcl-2蛋白高表達(dá)，兩者的異常表達(dá)均與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)。李妍等[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Bim蛋白在腎母細(xì)胞瘤中低表達(dá)，在正常組織中高表達(dá)，可見Bim蛋白的缺失或低表達(dá)參與了腎母細(xì)胞瘤的形成發(fā)展；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還顯示，Bim蛋白的低表達(dá)與腫瘤直徑有關(guān)，而與其他病理因素?zé)o關(guān)，這表明瘤細(xì)胞的凋亡能力降低，進(jìn)而加速了瘤細(xì)胞的增殖，但不能反應(yīng)臨床分期及浸潤轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步分析Girdin、Bim蛋白之間的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，Girdin蛋白高表達(dá)的腎母細(xì)胞瘤組織中Bim蛋白低表達(dá)，Girdin與Bim之間的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，因而推測，Girdin的過表達(dá)抑制了Bim從其復(fù)合體上游離出來進(jìn)而失去了促凋亡作用，但兩者之間的信號傳導(dǎo)途徑及相關(guān)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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Expression of Girdin and Bim protein in nephroblastoma of children and its correlation with clinicopathologic parameters.

LI Wei.Department of Pathology,the 251stHospital of Chinese PLA,Zhangjiakou 075000,Hebei,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Girdin and Bim protein in nephroblastoma tissue and normal tissue,and to analyze its relationship with clinicopathologic parameters.MethodsThe expression of Girdin and Bim protein was respectively detected by immunohistochemisty(EnvisionTM)in nephroblastoma tissue and adjacent normal tissue collected from 60 children with nephroblastoma treated in our hospital from January 2000 to December 2009.The data was analyzed by SPSS17.0.ResultsThe positive expression rate of Girdin protein in nephroblastoma tissue and normal tissue was respectively 68.33%%(41/60),46.67%(28/60),with statistically significant difference(χ2= 5.76,P＜0.01).The positive expression rate of Bim protein in nephroblastoma tissue and normal tissue was respectively 21.67%%(13/60),78.33%(47/60),with statistically significant difference(χ2=38.53,P＜0.01).The positive expression of Girdin protein in nephroblastoma tissue was related to tumor diameter,histological morphous,clinical stage,and lymphaden metastasis(P＜0.05),but not to gender,age and tumor site(P＞0.05).The positive expression of Bim protein in nephroblastoma tissue was related to tumor diameter(P＜0.05),but not to gender,age and tumor site,histological morphous,clinical stages,lymphaden metastasis(P＞0.05).The expression of Girdin protein was negatively correlated with the expression of Bim protein in nephroblastoma tissue(r=-0.59,P＜0.01).ConclusionThe abnormal expression of Girdin and Bim protein in nephroblastoma tissue of children is related to tumor diameter,which indicates that testing both is useful to judging reproductive activity of tumor cell.

Nephroblastoma;Girdin protein;Bim protein;Immunohistochemisty

R737.11

A

1003—6350（2016）12—1939—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.12.014

2015-07-19)

李偉。E-mail：liwei-324@163.com