張年江

(黑龍江省海林市畜牧獸醫(yī)局 157100)

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波爾山羊人工授精技術(shù)及效果分析

張年江

(黑龍江省海林市畜牧獸醫(yī)局 157100)

羊人工授精技術(shù)是用假陰道采集種公羊的精液，對精液品質(zhì)進行檢查和稀釋后，再用輸精器將一定量的精液輸入到發(fā)情母羊生殖道內(nèi)，用以代替公母羊自然交配而繁殖后代的一種技術(shù)。人工授精技術(shù)可以提高種公羊的配種效能，擴大配種母羊的頭數(shù)，不僅可以有效地改變羊的交配過程，還能夠提高優(yōu)秀種公羊的配種率，這在養(yǎng)羊生產(chǎn)中具有重要意義。

波爾山羊的人工授精與綿羊相似，但通過子宮頸管實施子宮內(nèi)輸精比綿羊容易。其次，有公山羊存在時母羊的發(fā)情鑒定(即使在同情發(fā)情后)更為有效，即使沒有公羊也可進行母山羊的發(fā)情鑒定。因此，在生產(chǎn)實踐中，波爾山羊的人工授精更容易推廣。例如在法國，20世紀80年代采用人工授精的山羊數(shù)量增加了4倍。由于精清與富含牛奶/卵黃的稀釋液之間的相互作用會對精子產(chǎn)生毒害作用，所以山羊精液的冷藏和冷凍保存都存在一定困難。

1采精和精液保存

波爾山羊通常用假陰道采精，也可通過電刺激采精，但波爾山羊?qū)﹄姶碳さ哪褪苄圆蝗缇d羊，電刺激后精清組分改變，可降低精子耐受冷凍保存的能力。公山羊是季節(jié)性繁殖的動物，春夏兩季精子質(zhì)量和數(shù)量有所降低。

1.1精清對精液保存的影響

波爾山羊精液保存的主要問題是，在含有牛奶和卵黃的稀釋液中，精清的組分可能產(chǎn)生損傷精子活力的物質(zhì)。精清中與卵黃作用后產(chǎn)生有毒物質(zhì)的成分主要是由尿道球腺分泌的卵黃凝固酶(EYCE)，這種酶可以凝結(jié)卵黃，并將卵黃磷脂水解為脂肪酸及具有殺精子作用的溶血卵磷脂。EYCE主要通過磷脂酶A發(fā)揮作用，但其也含有脂肪酶。尿道球腺的分泌物也可與牛奶產(chǎn)生毒性作用。分子量(55～60)×103的糖蛋白脂肪酶，現(xiàn)命名為BUSgp60，其結(jié)構(gòu)與胰腺的脂肪酶PLRP2相似，能使牛奶中甘油三酯產(chǎn)生油酸。因此在稀釋液中可使用脫脂奶，其效果取決于奶中殘余的脂肪量。有研究表明，EYCE和BUSgp60是同種蛋白質(zhì)，這一結(jié)果還有待證實。

總之，波爾山羊精液的稀釋液要么使用脫脂奶，以保證精子充分存活；要么在加入卵黃稀釋液前除去精清。除去精清的辦法是將精液用Kerbs-Ringer磷酸緩沖液稀釋后離心。

1.2液態(tài)精液

波爾山羊人工授精中可以采用兩種策略使用液態(tài)精液。

簡單稀釋液冷藏精液：用簡單稀釋液洗滌除去精清，用卵黃-檸檬酸稀釋液或卵黃-Tris-果糖稀釋液稀釋精液，于5℃保存?zhèn)溆谩３ゾ搴臅r而且導(dǎo)致大量精子損失，因此可使用脫脂奶稀釋液稀釋后在5℃保存。精子在脫脂奶稀釋液中的有效壽命相對較短(大約12 h)，但脫脂奶稀釋液的使用仍很廣泛。低濃度的卵黃含量(約2.5%)毒性作用相對較小，所以葡萄糖-檸檬酸或Tris-果糖稀釋液中加入低濃度卵黃也可有效用于精液的稀釋保存。

室溫稀釋保存：若精子溫度未降到15℃以下，則不需要加入卵黃防止冷休克。脫脂奶和以黃豆脂為基礎(chǔ)的稀釋液能在15～22℃下使精子活力維持24 h左右。

1.3冷凍保存

冷凍保存波爾山羊精液時，卵黃稀釋液比脫脂奶稀釋液使用更為廣泛。最廣泛使用的稀釋液是脫脂奶粉-果糖和Tris-果糖-檸檬酸-卵黃稀釋液。卵黃在稀釋液中含量低于2%時，可采用卵黃稀釋液而無需去除精清。甘油是最有效的冷凍保護劑，而且可以分一次或兩次添加。研究認為，對已清洗過的精子，最初用不含甘油的卵黃-檸檬酸稀釋液稀釋，精液溫度降到4℃時，再加入含有14%甘油的稀釋液。如果精子未經(jīng)洗滌，甘油應(yīng)在30℃時一次加入。

采用子宮頸管內(nèi)輸精時，同樣存在與綿羊相似的精子數(shù)量和輸精體積之間的比例問題。建議：子宮頸管內(nèi)輸精時先將高濃度的稀釋液進行稀釋(卵黃的最終濃度不低于2%)以增加稀釋液的體積，采用一步法稀釋，稀釋比例為1∶1～1∶4。

精液可以在干冰表面凍為顆粒，或用液氮熏蒸法和程控冷凍儀中冷凍制備細管凍精。顆粒凍精解凍后精子的復(fù)蘇率較高，解凍方法改進后，細管凍精也可以得到滿意的復(fù)蘇率，而且細管的使用比顆粒方便，已逐漸成為精液冷凍保存的首選方法。盡管波爾公羊個體間差異較大，但冷凍解凍后輸入子宮的活精子數(shù)達到5×106時受胎率與自然配種時相當。精子數(shù)量和繁殖效率之間的關(guān)系尚不清楚，大規(guī)模的研究結(jié)果很少。但專家建議，每次輸精使用(1～1.25)×108精子，但也有學(xué)者建議，由于波爾山羊輸精精子數(shù)與綿羊相當，解凍方法也與綿羊凍精一致。

2輸精

鮮精直接輸精時可采用陰道內(nèi)輸精，但稀釋精液或冷凍精液陰道內(nèi)輸精效果很不理想，因此主要采用子宮頸管內(nèi)輸精或腹腔鏡子宮內(nèi)輸精。子宮頸管內(nèi)輸精是最常用的方法，尤其是在規(guī)?；B(yǎng)殖的羊群。因為波爾山羊子宮頸管比綿羊更易穿過，所以大量的精子可以穿過子宮頸管進入子宮內(nèi)。雖然可以使輸精導(dǎo)管穿過子宮頸管而直接將精液輸入子宮內(nèi)，但許多技術(shù)人員更愿意在子宮頸管里存留一些精液，以免子宮內(nèi)輸精精液僅進入一側(cè)子宮角內(nèi)。然而，有學(xué)者認為，子宮頸管內(nèi)輸精失敗率高，一是因為輸精導(dǎo)管插入子宮頸管的深度不易掌握，二是輸精過程中可能損傷子宮頸管或子宮。輸精深度與受胎率有密切關(guān)系，子宮內(nèi)輸精受胎率最高，輸精位置越靠近子宮頸管后部，受胎的機會越少。熟練的操作是提高受胎率的關(guān)鍵因素。腹腔鏡子宮內(nèi)輸精的程序與在綿羊一樣。與子宮頸管內(nèi)輸精相比，這一方法需要的精子濃度較低(約2×107)，而且可獲得較高的受胎率，但對技術(shù)要求高。

收稿日期：2016-03-28

作者簡介：張年江(1973-)，男，本科，畜牧師。

中圖分類號：S827.3

文獻標識碼：B

文章編號：1005-2739(2016)04-0022-02